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糖尿病结肠动力障碍结肠平滑肌细胞相关凋亡基因和蛋白表达及其意义
目的 探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍结肠平滑肌细胞的相关凋亡基因和蛋白表达情况.方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照6和10周组、DM 6和10周组,每组9只.检测空腹血糖(FBG)、胃肠推进率及血清胰岛素(FINS),HE染色观察结肠平滑肌变化,荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测结肠平滑肌细胞的BAX、BCL-2及caspase-3的mRNA表达,免疫组化法检测caspase-3蛋白表达.结果 (1)DM组大鼠较同时间点对照组大鼠空腹血糖显著增高,胃肠推进率及血清胰岛素显著降低,结肠平滑肌变薄,BAX及caspase-3的mRNA表达增强,CCL-2的mRNA表达降低,caspase-3蛋白表达增强(对照6和10周组分别为4694±807、4711±812;DM 6和10周组分别为6 974±952、12474±967)(P<0.01);(2)DM 10周组较DM 6周组上述变化进一步增加(P<0.05).结论 糖尿病结肠动力障碍可能与结肠平滑肌细胞的凋亡基因和蛋白表达改变密切相关,且细胞凋亡可能随病程发展而加重.
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糖基化终末产物和磷酸化肌球蛋白轻链在糖尿病结肠动力障碍中的作用
背景:结肠动力障碍是糖尿病(DM)的常见并发症.糖基化终末产物(AGEs)在DM患者体内显著升高,然而其在DM结肠动力障碍中的作用尚未完全明确.目的:探讨AGEs和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)在DM结肠动力障碍中的作用.方法:将Sprague-Dawley大鼠随机分为DM组和正常对照组,以链脲菌素腹腔注射建立DM模型,8周后处死所有大鼠,取远端结肠组织.检测离体结肠肌条肌张力;以免疫组化染色检测结肠组织p-MLC表达;以蛋白质印迹法检测结肠组织p-MLC、总肌球蛋白轻链(t-MLC)表达.分离培养结肠平滑肌细胞(SMCs),以不同浓度、不同作用时间AGEs作用于SMCs,以蛋白质印迹法检测SMCs的p-MLC、t-MLC表达.结果:与正常对照组相比,DM组大鼠结肠平滑肌张力显著减弱[(0.89±0.09)g对(1.98±0.12)g,P＜0.05],DM组大鼠结肠组织p-MLC/t-MLC/3-actin水平显著降低(0.98 ±0.10对1.61 ±0.12,P＜0.05).SMCs经不同浓度、不同作用时间AGEs干预后,p-MLC/t-MLC/β-actin水平显著降低.结论:DM结肠动力障碍可能由AGEs抑制SMCs中MLC磷酸化所致.
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RhoA/ROCK信号通路在糖尿病结肠肌层中的表达
背景：糖尿病（ DM）胃肠动力障碍的机制目前尚不明确，越来越多的研究认为胃肠平滑肌肌源性因素在该病的发生中起重要作用。近年RhoA/ROCK信号通路在DM并发症中的作用成为研究热点。目的：分析DM患者结肠肌层中RhoA/ROCK信号通路主要信号分子的表达变化，探讨该信号通路在DM结肠动力障碍中的可能作用。方法：收集2012年9月-2013年12月南京医科大学第一附属医院行结肠癌根治术患者的正常结肠组织，根据糖化血红蛋白水平，将患者分为DM组和对照组。采用免疫组化或蛋白质印迹法检测结肠肌层中RhoA/ROCK信号通路主要信号分子RhoA、ROCK1、MYPT1和p-MYPT1的表达情况。结果：免疫组化结果显示DM组结肠肌层中RhoA表达明显低于对照组，差异有统计学意义（ P＜0.05）；蛋白质印迹法结果显示，与对照组相比，DM组RhoA、ROCK1和p-MYPT1蛋白表达均明显减少（0.62±0.42对1.15±0.69，0.54±0.09对0.75±0.05，0.70±0.28对1.04±0.47；P＜0.05），而MYPT1蛋白表达差异无统计学意义（0.94±0.50对1.21±0.80，P＞0.05）。结论：DM患者结肠肌层中RhoA/ROCK信号通路活性被抑制，可能与DM结肠动力障碍有一定相关性。
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糖尿病结肠动力障碍时Cajal间质细胞和干细胞因子的变化以及胰岛素的干预效应
Cajal间质细胞(ICC)异常可能是糖尿病胃肠动力障碍的重要原因之一.目的:观察糖尿病结肠慢传输型动力障碍大鼠ICC及其Kit受体配体干细胞因子(SCF)的变化,以及胰岛素干预对结肠动力障碍和ICC的影响.方法:雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组和不同剂量胰岛素(每天8、12、16 U/kg)干预组.于成模第6、8、10周时分批处死各组大鼠,以免疫组化染色、蛋白质印迹法和电子显微镜观察近端结肠组织ICC的变化,以酶联免疫吸附测定(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清和结肠组织SCF的表达.结果:糖尿病模型大鼠胃肠推进率显著降低.近端结肠组织ICC数量减少,超微结构破坏,结肠组织可溶型SCF(S-SCF) mRNA表达和血清S-SCF、胰岛素水平降低.小剂量胰岛素干预可显著改善糖尿病大鼠的胃肠推进率,增加ICC数量,逆转其超微结构改变;中、大剂量胰岛素干预则无明显作用.结论:糖尿病大鼠胰岛素分泌减少,使S-SCF表达降低,引起结肠组织ICC数量减少,结构破坏,可能是结肠慢传输型动力障碍的发生基础之一.小剂量胰岛素可改善糖尿病大鼠的ICC病变和结肠动力障碍.
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糖尿病大鼠结肠动力变化及其机制探讨
目的：观察糖尿病（DM）大鼠结肠动力的变化，并探讨其机制。方法将34只SD大鼠随机分为3组，观察组和模型组制作DM模型，观察组于造模6周后每天皮下注射甘精胰岛素8 U／kg，对照组和模型组均注射等量生理盐水。干预4周后处死各组大鼠，剖腹取出全部肠道测量肠道推进率，免疫组化法检测各组近端结肠Cajal间质细胞（ICC）、缝隙连接蛋白43（Cx43），透射电镜观察近端结肠的超微结构。结果观察组肠道推进率高于模型组，模型组低于对照组，P均＜0．05。结肠组织ICC及Cx43表达均为对照组高于观察组、观察组高于模型组，P均＜0．05。观察组ICC数量、细胞间缝隙连接明显多于模型组，但少于对照组。结论 DM大鼠存在结肠动力障碍，可能与结肠组织ICC数量减少、细胞间缝隙连接破坏及Cx43表达降低有关；甘精胰岛素可抑制上述改变，改善结肠动力。
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糖尿病结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2及caspase-3的表达
目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞凋亡基因的表达.方法:雄性SD大鼠18只应用链脲佐菌素40 mg/kg尾静脉注射后成功建立DM结肠动力障碍大鼠模型,分为模型 6周和10周组;另18只分为正常对照6周和10周组,各组9只大鼠.应用实时荧光定量PCR检测各组大鼠远端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2和caspase-3 mRNA表达,采用免疫组化SP法检测其蛋白的表达.结果:不同组别和作用时间各组大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义(P均<0.001),模型组与同一时间点正常对照组以及模型10周组与6周组大鼠比较,远端结肠平滑肌细胞bax和 caspase-3 mRNA和蛋白的表达增强,bcl-2 mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05).结论:远端结肠平滑肌细胞凋亡基因bax、bcl-2及caspase-3表达的改变可能是DM大鼠结肠动力障碍发病机制之一.
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胰岛素对糖尿病结肠动力障碍大鼠的干预效果及其机制
目的 探讨胰岛素对糖尿病结肠动力障碍大鼠的干预效果及其作用机制.方法 36只雄性SD大鼠随机分为正常组、糖尿病组(DM组)、胰岛素1组、胰岛素2组各9只.DM组、胰岛素1组、胰岛素2组大鼠给予静脉注射链脲菌素建模,分别在造模成功后及造模成功6周后给予胰岛素1组、胰岛素2组大鼠皮下注射胰岛素,而正常组及DM组无处理.造模成功后第10周检测各组大鼠的FBG、胃肠推进率及血清胰岛素水平;处死大鼠后取结肠组织,镜下观察结肠平滑肌变化,并检测结肠平滑肌细胞(SMC)的凋亡指数(AI)及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及半胱-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白]的表达水平.结果 与正常组相比,DM组大鼠结肠平滑肌变薄,SMC数目减少;胰岛素1、2组大鼠的上述情况较DM组减轻.正常组、胰岛素1组、胰岛素2组、DM组大鼠的FBG、结肠SMC的Caspase-3蛋白表达水平及AI依次增高而血清胰岛素依次降低(P<0.05),但正常组与胰岛素1组比较,差异无统计学意义(P>0.05);正常组、胰岛素1组、胰岛素2组、DM组大鼠结肠SMC的Bax蛋白表达水平依次升高而Bcl-2蛋白表达水平依次降低(P<0.01);正常组、胰岛素1组的胃肠推进率高于胰岛素2组、DM组(P<0.05),但正常组与胰岛素1组间、胰岛素2组与DM组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 胰岛素干预可能通过抗凋亡及降血糖作用改善结肠动力障碍,且早期干预效果显著.
