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不同中医证型食道癌对化疗药物敏感性的相关性分析
目的:分析不同中医证型食道癌和化疗药物敏感性的相关性.方法:随机选取2013年4月至2016年3月,于我院就诊经胃镜取病理组织活检并确诊为食管鳞癌的患者60例,通过中医辨证论治,将其证型分为痰瘀互结型19例、气阴两虚型17例、津亏热结型13例、痰气交阻型11例,其中年龄在40～ 60岁之间,平均年龄(47.6±6.8)岁,其中男37例,女23例.体外肿瘤组织细胞液制备均由手术切除的食管癌患者提供新鲜组织块,体外加入不同浓度的紫杉醇、伊立替康、泽菲、5-氟尿嘧啶、顺铂等化疗药物,细胞MTT测试计算各个中医证型中化疗药物对肿瘤细胞的抑制率.结果:在用5种不同化疗药物分别对60例食管癌患者的食管癌细胞进行体外抑制试验,结果显示各药物对癌细胞敏感度的基本情况为:紫杉醇＞顺铂＞5-氟尿嘧啶＞伊立替康＞泽菲.各组间经统计学比较,痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型各组间经统计学比较,无统计学意义(P＞0.05).痰瘀互结型、津亏热结型和痰气交阻型的化疗药物敏感性均高于气阴两虚型(P＜0.05).结论:不同中医证型食道癌与化疗药物敏感性存在相关性,其中气阴两虚型存在耐药性.
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消化道肿瘤转移淋巴结中P糖蛋白和谷胱甘肽S转移酶π的表达与肿瘤化疗药物敏感性的关系
目的 探讨消化道肿瘤淋巴结转移灶中P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的表达与化疗药物敏感性的关系及其临床意义.方法 对54例胃癌和大肠癌新鲜肿瘤组织及转移淋巴结进行肿瘤细胞培养化疗药敏性实验,行原发灶和转移灶P-gP和GST-π免疫组化染色.结果 ①肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中P-gp和GST-π表达一致率较低,分别为22%(k=-0.0133,P=0.8698)和50%(k=0.1137,P=0.1496);淋巴结转移灶中P-gP和GST-π表达强度均明显高于原发灶(Z=-3.0448,P=0.0023;Z=-2.1178,P=0.0034).②VCR、OPT、OXA、DDP、MTX对淋巴结转移灶肿瘤细胞抑制率明显低于原发灶(均P<0.05),仅VP-16对原发灶的抑制率明显低于转移灶(P=0.0406).③原发灶中P-gp表达程度与5-FU、VCR和PTX对肿瘤细胞抑制率呈负相关(r=-0.4142～-0.5712,均P<0.05),GST-π表达程度与5-FU、VCR、OPT和PTX的抑制率呈负相关(r=-0.3927～-0.4951,均P<0.05);转移灶中P-gP表达程度与VP-16、PTX和eADM对肿瘤细胞抑制率呈负相关(r=-0.3802～-0.4624,均P<0.05),GST-π表达程度与5-FU、VCR、DDP的抑制率呈负相关(r=-0.3996～-0.5345,均P<0.05).结论 消化道肿瘤淋巴结转移灶中P-gP和GST-π的表达以及对化疗药物的敏感性均存在与原发灶不同的异质性,淋巴结转移灶具有更强的耐药倾向.术后辅助化疗的靶目标应针对淋巴结转移灶.
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食管鳞状细胞癌癌内异质性与化疗疗效的关系
目的 研究食管鳞状细胞癌(ESCC)的癌内异质性与化疗药物耐药性的关系.方法选取临床食管癌术后切除的肿瘤标本10例,在每一瘤体5个不同区域(R1~R5)和手术断端相对正常食管黏膜区域(R6)取材进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ESCC临床常用化疗药物顺铂对不同区域肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测顺铂对不同区域肿瘤细胞的细胞周期和凋亡的影响,实时荧光定量PCR法检测顺铂泵出基因ATP7A和ATP7B mRNA的表达.结果每例标本不同区域细胞对顺铂的敏感性均表现出不同,且R6区域细胞的存活率均高于其他区域.第10例标本R3区域的细胞存活率为(81.42±8.84)%,而R5区域细胞的存活率为(11.90±2.75)%,差异有明显统计学意义(P<0.01).流式细胞术检测结果显示,6例标本的不同区域细胞在顺铂杀伤后,表现出了早期凋亡及晚期凋亡的差异性,且差异均有统计学意义(均P<0.05);7例标本的不同区域细胞在顺铂杀伤后,表现出了细胞周期的差异性,且7例标本中G1期细胞的差异有统计学意义(均P<0.05).实时荧光定量PCR检测结果显示,ATP7A mRNA在R1、R2、R3、R4和R5区域中的相对表达水平分别为(100.00±3.42)%、(118.10±2.21)%、(75.40±4.15)%、(95.40±3.32)%和(41.70±2.57)%,差异有统计学意义(P<0.05);在R6区域中的相对表达水平为(175.20±5.32)%,明显高于R1~R5区域(P<0.05).ATP7B mRNA在R1、R2、R3、R4和R5区域中的相对表达水平分别为(100.00±4.89)%、(73.60±2.65)%、(175.60±6.12)%、(46.10±4.62)%和(363.70±8.67)%,差异有统计学意义(P<0.05);在R6区域中的相对表达水平为(1165.40±7.25)%,明显高于R1~R5区域(P<0.05).结论ESCC癌内异质性的存在导致了肿瘤对顺铂耐药的异质性,从而影响了化疗疗效.
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化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其与端粒酶逆转录酶mRNA表达的关系
目的 观察化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应,并探讨其与胃癌组织中端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的关系.方法 将68例新鲜胃癌组织制备单细胞悬液,台盼蓝染色计数活细胞,分别加入紫杉醇(TAX)、阿霉素(ADM)、顺铂(CDDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)和丝裂霉素(MMC)培养48 h.四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性变化.用原位杂交技术检测hTERT mRNA的表达.结果 不同个体的肿瘤细胞对化疗药物敏感性不同,与肿瘤分化有关,TAX、CDDP、5-Fu、ADM和MMC的胃癌细胞抑制率分别为(40.6±6.9)%、(38.4±7.8)%、(38.9±9.2)%、(31.6±8.5)%和(28.9±9.8)%.全组hTERT mRNA表达阳性率为90.0%,hTERT mRNA阳性者对5-Fu和ADM有较强的耐药性.结论 hTERT mRNA的高表达可能是胃癌原发性耐药的标志之一,MTT比色法体外药敏实验有助于筛选胃癌的个体化有效化疗药物.
关键词： 胃肿瘤 hTERT mRNA 化疗药物敏感性 -
10个基因的启动子CpG岛甲基化状态与乳腺癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的关系
目的 探讨10个基因的启动子CpG岛甲基化状态与乳腺癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的关系,确定与乳腺癌细胞株5-Fu敏感性相关的启动子CpG岛类基因.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Bcap-37、T47D和ZR-75-30乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性.应用甲基化特异性PCR(MSP)方法,检测3株对5-Fu敏感性有差异的乳腺癌细胞株中BAG1、C110RF31、CBR1、CBR4、GJA1、FOXL2、IGFBP6、P4HA1、SRI和TYM基因的启动子CpG岛甲基化状态,并用实时定量PCR的方法检测PKSS21、LOX、IGFBP6、ABCC8和CHFR基因的稳定态mRNA表达的水平.结果 IGFBP6和FOXL2基因在对5-Fu敏感和耐药的乳腺癌细胞株中的甲基化状态有差异.除CHFR基因以外,PRSS21、LOX、IGFBP6和ABCC8基因的表达水平与启动子CpG岛甲基化状态有关,处于甲基化状态时表达水平低,而在处于去甲基化状态时表达水平高.结论 在敏感和耐药乳腺癌细胞株中存在甲基化状态差异的基因为IGFBP6和FOXL2基因,这为进一步开展DNA甲基化标志在乳腺癌化疗耐药中的应用研究提供了依据.
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口腔颌面肿瘤活检标本对化疗药物敏感性的研究
目的检测口腔颌面部癌肿活检标本的体外化疗药物敏感性,明确临床常用各种化疗药物对口腔癌敏感性差别.方法 150例口腔癌化疗前活检新鲜组织标本行改良MTT药敏检测.检测用药是顺铂、5-氟尿嘧啶、平阳霉素、紫杉醇、替尼泊苷、表阿霉素、长春地辛和甲氨蝶呤8种常用化疗药物.结果 150例标本成功完成MTT药敏检测的有140例,检测成功率是93.33%.MTT药敏检测所用药物浓度是各药物峰血浆浓度的5倍.结果表明,8种药物对口腔癌细胞体外平均生长抑制率分别是:替尼泊苷63.76%、顺铂25.93%、表阿霉素25.86%、紫杉醇23.52%、平阳霉素22.97%、氟尿嘧啶22.08%、长春地辛18.42%、甲氨蝶呤18.93%;替尼泊苷对口腔颌面恶性肿瘤体外抗瘤效果显著高于其他7种化疗药物(P<0.05).＞40%的口腔鳞状细胞癌标本对替尼泊苷、顺铂、表阿霉素3种药物中度以上敏感;＞40%的腺源性口腔癌标本对替尼泊苷、紫杉醇和表阿霉素中度以上敏感.结论大多数口腔颌面部癌肿对替尼泊苷敏感,顺铂、表阿霉素和紫杉醇敏感性也较高.替尼泊苷、表阿霉素和紫杉醇是口腔颌面部恶性肿瘤有潜力的化疗药物,其敏感性强于长春地辛、氟尿嘧啶和甲氨蝶呤.临床上应用改良MTT药敏检测法,筛选口腔颌面部癌肿化疗的有效药物是可行的.
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A549肺腺癌多细胞球体放射抗拒细胞的化疗药物敏感性
目的探讨A549肺腺癌多细胞球体放射抗拒细胞的化疗药物敏感性.方法放射抗拒细胞为6 MV高能X线照射25Gy后的第10代再增殖细胞,对照组为A549亲代细胞和MCF-7长春新碱耐药(MCF7/VCR)细胞.6种化疗药物分别为顺铂(DDP)、长春花碱酰胺(VDS)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基喜树碱(HCP)、丝裂霉素(MMC)和阿霉素(ADM),异搏定(VPL)作为耐药逆转剂.MTT比较药敏试验效果,RT-PCR检测mdr1和MRP耐药基因表达.结果A549亲代和放射抗拒细胞对DDP耐药,对VDS、5-FU、HCP、MMC和ADM敏感,VPL的抑制率分别为98%和25%(P＜0.001).未加药组A549亲代细胞的A值为放射抗拒细胞的2倍(P＜0.001).MCF7/VCR细胞对DDP和MMC耐药,对VDS、5-FU、HCP和ADM较敏感,VPL的抑制率80%.A549所有细胞的mdr1/β2-MG为0,MRP/β2-MG为0.7左右,MCF7/VCR分别为35和4.36.结论A549放射抗拒细胞的化疗药物敏感性无明显变化,对VPL的敏感性减低不能以mdr1和MRP耐药基因的表达水平来解释,可能与某种膜蛋白的变化,以及细胞增殖能力减低有关.与化疗引起的多药耐药不同,对于放射抗拒细胞,VPL可能不是一个理想的耐药逆转剂,应寻求新的生物制剂联合化疗药物治疗放射抗拒复发肿瘤.
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TIP30基因启动子甲基化与大肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性关系的研究
目的 探讨TIP30 启动子CpG 岛甲基化状态与大肠癌细胞对奥沙利铂敏感性的关系.方法采用MTT 法检测HCT116 和HT29 大肠癌细胞株对L-OHP 的敏感性.通过甲基化特异性PCR,检测对奥沙利铂敏感性有差异的2 个大肠癌细胞株中TIP30 基因启动子CpG 岛甲基化状态,并用RT-PCR 法检测其mRNA 表达.结果 HCT116 及HT29 细胞中TIP30 基因甲基化状态存在差异,其表达水平与启动子CpG 岛甲基化状态有关,并且二者对奥沙利铂的敏感性不同.结论 TIP30 基因启动子甲基化状态可能影响大肠癌细胞对化疗药物的敏感性,为大肠癌患者的个体化治疗提供了依据.
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P53在三阴性乳腺癌中的表达及其与铂类化疗药物敏感性的关系
目的 探讨P53对三阴性乳腺癌(TNBC)预后的意义及其与铂类化疗药物敏感性的关系.方法 选取291例原发性乳腺癌患者的新鲜癌组织(新发组),采用肿瘤原代细胞胶原凝胶体包埋化疗药物敏感性检测技术(CD-DST法)进行常用化疗药物(多西他赛、表柔比星、吡柔比星、诺维本、顺铂)的体外检测,用免疫组化方法检测患者中P53的表达,分析其与各临床病理特征及化疗药物敏感性的关系.同时回顾性收集有完整临床和随访资料及完整的生物学指标检测结果的153例TNBC患者资料作为随访组,采用Cox回归分析影响患者无瘤生存期的因素.结果 291例原发性乳腺癌患者中,TNBC患者43例,其中P53阳性表达率为62.79％(27/43),高于非三阴性乳腺癌(30.65％,76/248).在组织学Ⅲ级患者中,P53的阳性表达率为66.04％,高于组织学Ⅰ级(23.73％)和Ⅱ级(30.17％)的阳性表达率.P53是影响TNBC患者无瘤生存期的影响因素,其阳性表达者的5年无瘤生存率低于阴性者(69.7％ vs89.4％,P=0.001).对顺铂化疗药物敏感的TNBC中P53阳性表达率低于耐药组,差异有统计学意义(P=0.018).结论 P53阳性是判断TNBC预后较差的指标之一,其表达和铂类化疗药物敏感性呈负相关.
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沉默NRP-1基因对人T细胞白血病Jurkat细胞株增殖与凋亡的影响
目的：探讨RNAi沉默NRP-1基因对人T细胞白血病细胞株增殖与凋亡的影响。方法：将我们前期构建好的pLB-NRP-1／shRNA重组慢病毒质粒，感染至Jurkat细胞中，用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及化疗药物表柔比星（ EPI）处理后细胞增殖情况；用AV／PI法结合流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期。结果：细胞增殖结果：在48、72、96 h时间点NRP-1／shRNA干扰组的OD值均低于相应对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义（P＞0.05）；细胞凋亡率结果：与对照组比较，NRP-1／shRNA干扰组细胞的凋亡率明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；对化疗药物表柔比星（ EPI）敏感性检测结果：EPI浓度为0.025、0.05、0.1、0.2、0.4μg／ml时， NRP-1／shRNA干扰组的细胞生长抑制率较相应对照组高，差异皆有统计学意义（ P＜0.05），并且选择IC50进行EPI诱导后，NRP-1／shRNA干扰组的细胞凋亡率明显升高，与对照组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）；WB结果显示：与对照组相比，NRP-1／shRNA干扰组Bcl-2蛋白的表达水平明显下降， Bax的表达水平明显升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；细胞周期结果：与对照组比较，NRP-1／shRNA干扰组G0／G1期细胞的比例增高，S期细胞的比例明显降低，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论：RNAi沉默NRP-1基因可抑制Jurkat细胞增殖，促进其凋亡，提高对化疗药物的敏感性，其机制可能涉及Bcl-2／Bax途径的调节；并可将细胞周期阻滞在G0／G1期，降低细胞的增殖水平，诱导细胞进入凋亡期。
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人卵巢癌细胞SKOV3对硼替佐米和紫杉醇联合应用的药物敏感性及可能机制
背景与目的:蛋白酶体抑制剂硼替佐米是新型抗癌药物,体外对多种恶性肿瘤细胞均具有良好的疗效.本实验研究硼替佐米与紫杉醇单独及联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3的存活率和凋亡率的影响,并对糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和髓样白血病-1基因(Mcl-1)在其诱导细胞凋亡中的作用机制进行探讨,为临床治疗卵巢癌提供理论依据.方法:用50 nmol/L硼替佐米、90 nmol/L紫衫醇,或50 nmol/L硼替佐米联合90 nmol/L紫衫醇分别作用于SKOV3细胞12、24、36、48及72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,并计算细胞存活率,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测相关蛋白表达水平.结果:50 nmol/L硼替佐米和90 nmol/L紫衫醇联合作用于SKOV3细胞,12、24、36、48及72 h时间点细胞存活率分别为(65.2±5.8)%,(58.3±14.4)%, (35.3±5.0)%,(19.2±1.5)%和(11.4±2.5)%,与紫杉醇单用组比较,细胞生长抑制增强,差异有显著性(P<0.05).药物单独或联合作用细胞24 h后,紫杉醇单用组、硼替佐米单用组和两者联用组细胞凋亡率分别为(14.7±0.5)%、(15.1±0.8)%和(20.5±0.7)%,硼替佐米与紫杉醇联用组凋亡率显著增高(P<0.05).药物处理细胞后,经免疫印迹法检测p-GSK-3β和Mcl-1蛋白表达水平,硼替佐米与紫杉醇联用组p-GSK-3β和Mcl-1表达水平降低为明显,分别为正常细胞组表达水平的(19.3±0.4)%和(31.6±3.1)%,差异均有显著性(P<0.05).硼替佐米和紫杉醇单用组中p-GSK-3β表达水平有所降低,分别为正常细胞组的(78.7±1.2)%和(85.1±1.6)%,Mcl-1表达水平分别为对照组的(68.2±4.5)%和(57.0±4.1)%,差异均具显著性(P<0.05).结论:硼替佐米与紫杉醇联用能增强人卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性,并促进GSK-3β磷酸化Mcl-1,使其降解,诱导细胞,GSK-3β/Mcl-1信号通路可能在硼替佐米与紫杉醇联用诱导凋亡中发挥了重要作用.
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非小细胞肺癌胸水原代肿瘤细胞系建立及其药敏试验的临床应用价值
目的 通过非小细胞肺癌(NSCLC)患者恶性胸腔积液肿瘤细胞的体外原代培养,检测其对常规化疗药物的敏感性,为临床筛选个体化治疗方案提供参考.方法 收集20例经病理组织学确诊为NSCLC患者的恶性胸腔积液,通过密度梯度离心法分选后体外短暂培养以去除非肿瘤细胞成分,建立原代细胞系;使用MTT法检测肺癌常规化疗药物作用于肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50),与理论计算获得的血药浓度值(IC50 m)进行比较获得IC50绝对预测值(R),并将其与患者的临床实际疗效进行比对分析.结果 20例恶性胸腔积液样本经预处理及培养4代后均能获得在体外稳定传代的原代肿瘤细胞系,巴氏染色证实其具有癌细胞特征,且显微镜下观察癌细胞纯度近乎100％.MTT法检测结果显示,使用R值时,能将超出测试浓度上限的无效IC50值进一步纳入疗效评估的有效范围;与其中具有完整化疗史的6例患者的实际疗效比对结果显示,当用R值在0.5～2.0和大于2.0分别预测实际疗效为疾病稳定和疾病进展时,其疗效预测的总体一致性为77％(10/13).结论 癌性胸水原代肿瘤细胞培养及其药敏检测在预测NSCLC患者的实际化疗疗效中具有参考价值.
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凋亡相关蛋白BCL-2与白血病化疗药物敏感性的研究
目的:研究急性白血病(AL)细胞BCL-2表达及其与体外化疗药物敏感性的关系.方法:采用Western blotting技术和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),分别检测HL-60、U937细胞株和6例急性髓性细胞白血病(AML)细胞BCL-2表达水平及体外对柔红霉素(DNR)的敏感性.结果:(1)BCL-2表达水平HL-60细胞高于U937细胞,而6例AML细胞BCL-2表达水平不同;(2)MTT检测结果显示,DNR对HL-60抑制率低于U937;BCL-2高表达的AML细胞,DNR抑制率低.结论:细胞系和白血病原代细胞的BCL-2高表达伴低药敏与AML疗效有关.
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LZTS1的表达与乳腺癌化疗药物敏感性关系的研究
目的 探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(leucine zipper tumor suppressor 1,LZTS1)与乳腺癌化疗药物敏感性的关系.方法 对122例乳腺癌手术标本行体外胶滴包埋原代细胞培养药敏检测(collagen gel droplet-embed-ded culture-drug sensitivity test,CD-DST),检测分析LZTS1表达与化疗药物敏感性的关系.免疫组织化学检测278例经新辅助化疗的乳腺癌患者活检样本中LZTS1蛋白表达情况,分析其与临床病理特征的关系.观察LZTS1表达与化疗药物敏感性及化疗反应的关系.结果 122例乳腺癌中LZTS1表达与紫杉醇及长春瑞滨的化疗药物敏感性呈正相关(r=0.311,r=0.206;均P<0.05),与其他药物(表柔比星、氟尿嘧啶及顺铂)敏感性无相关性(r=0.121,r=0.083,r=0.017;均P>0.05).Logistic回归分析显示,含紫杉醇方案(紫杉醇+多柔比星、紫杉醇+表柔比星或紫杉醇+表柔比星+环磷酰胺)化疗的乳腺癌患者的LZTS1表达情况可作为预测病理完全缓解的指标(P<0.01).结论 以紫杉醇为基础化疗方案的乳腺癌中,LZTS1可作为预测化疗反应的新指标.
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肿瘤组织CD71表达率与化疗药物敏感性的相关性研究
目的为探讨肿瘤组织转铁蛋白受体(CD71)表达率在指导化疗中的临床价值.方法采用流式细胞术(FCM)对193例各种肿瘤组织进行CD71表达率的检测,同时采用MTT比色法对8种化疗药物:5-氟脲嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、卡铂(CBP)、顺铂(DDP)、环磷酰胺(CTX)、丝裂霉素(MMC)、甲氨喋呤(MTX)、鬼臼(VP16)进行肿瘤细胞药物敏感试验,以相对抑制率和药物敏感率与CD71表达率作相关性分析.结果 CD71的表达率与5-FU、MTX、CTX、VP16、ADM及DDP相对抑制率具有明显的相关性(均P＜0.01及P＜0.05).胃癌组CD71的表达率与5-FU、MTX、CTX及VP,大肠癌组与5-FU、CBP、DDP、MTX及VP,肺癌组与MTX及VP,乳腺癌组与5-FU、MTX及CTX,肝癌组与CBP的相对抑制率具有相关性;3组不同CD71的表达率中显示:CD71表达率越高,肿瘤组织对周期性化疗药物(5-FU、MTX及VP)的敏感率也越高.结论 CD71的表达率与化疗药物5-FU、MTX、CTX、VP及ADM、DDP的相对抑制率具有明显的相关性,但各肿瘤组之间的药物相关性存在一定差异;肿瘤组织对周期性化疗药物(5-FU、MTX及VP)的敏感率与CD71表达率呈正相关.CD71的表达检测率能反映细胞的增值状态,对指导选择化疗药物具有重要意义.
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TIP30基因启动子甲基化与大肠癌细胞5-氟尿嘧啶化疗敏感性的关系
目的 探讨TIP30启动子CpG岛甲基化状态与大肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的关系.方法 采用MTT法检测HCTII6和HT29大肠癌细胞株对5-Fu的敏感性.应用甲基化特异性PCR(MSP)方法,检测2细胞株对5-Fu敏感性有差异的大肠癌细胞株中TIP30基因启动子CpG岛甲基化状态,并用RT-PCR检测其mRNA的表达水平.结果 TIP30基因在HCT116及HT29癌细胞中甲基化状态有差异,其表达水平与启动子CpG岛甲基化状态有关,并且二者对5-氟尿嘧啶敏感度不同.结论 TIP30基因启动子甲基化状态可能影响大肠癌细胞对化疗药物的敏感性,为大肠癌患者的个体化治疗提供了可能.
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下调DNA解旋酶BLM对膀胱癌细胞化疗药物敏感性的研究
目的:探讨下调DNA解旋酶BLM对膀胱癌细胞化疗药物敏感性的影响.方法:采用脂质体转染技术将BLM-siRNA转染入膀胱癌细胞株RT112、5637和J82中,利用RT-qPCR和Westernblot方法检测BLM的mRNA和蛋白表达情况,借助CCK-8法检测吡柔比星和顺铂对膀胱癌细胞的半数抑制率浓度及化疗药敏感性.结果:吡柔比星和顺铂作用于三种膀胱癌细胞株,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,三种膀胱癌细胞株的增殖逐渐降低.与对照组比较,下调膀胱癌细胞内BLM后,BLM的mRNA和蛋白表达均明显降低,且在吡柔比星和顺铂作用下细胞增殖较对照组也明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:下调BLM可增加人膀胱癌细胞对化疗药物的敏感性.
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裸鼠肾包膜下移植法与四唑盐比色法检测直肠癌对抗癌药物的敏感性
目的评价SRCA法与MTT比色法测定肿瘤对药物的敏感性试验中的差异,探讨引起这种差异的可能原因,为临床应用提供理论依据.方法取新鲜直肠癌标本进行SRCA法及MTT法,分为5-FU、MMC、MTX组.SRCA法术后第1、3、5d裸鼠各组分别皮下注射5-FU、MMC 、MTX ,术后第6d测定移植肿瘤消退率;MTT法各组以相应的药物的血浆峰浓度的1/10作为试验浓度,第4d测定肿瘤细胞的抑制率.结果 60组肿瘤对化疗药物敏感性结果中,符合20对,不符合40对,两方法间药物敏感性阳性和阴性结果符合率为33.3%,差异有统计学意义.结论 MTT法与SRCA法肿瘤药物敏感试验结果之间存在差异.
关键词： 肾包膜下移植法 四唑盐( MTT)比色法 裸鼠 直肠癌 化疗药物敏感性 -
Notch1对神经胶质瘤 U251细胞干性及化疗药物敏感性的调节
目的：探讨Notch1对人胶质瘤U251细胞干性和药物敏感性的影响。方法：用高表达Notch1胞内段（Notch1 intracellular domain， NICD1）和Notch1－shRNA慢病毒表达载体感染体外培养的人胶质瘤U251细胞， Western blot和免疫荧光染色法鉴定高表达NICD和Notch1沉默细胞。通过流式细胞术检测分析CD133＋细胞的比例、免疫荧光染色法检测nestin和GFAP的表达情况、检测肿瘤细胞球的形成率和SCID小鼠体内种植致瘤情况，分析Notch1对细胞干性的调节。并采用MTT法检测各组细胞对化疗药物替尼泊苷（VM－26）和卡莫司汀（BCNU）的敏感性。结果：NICD表达增加的瘤细胞干性表型增强，如CD133＋细胞的比例增加、nestin表达增强而GFAP表达减弱、肿瘤细胞球的形成率和SCID小鼠种植致瘤率增加，并伴有对VM－26和BCNU的敏感性降低。而Notch1基因表达下调的瘤细胞干性表型受到明显抑制，而对VM－26和BCNU的敏感性增高。结论：Notch1高表达可增加人胶质瘤U251细胞的干性，减弱U251细胞对化疗药物的敏感性。
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不同模型中乳腺癌细胞化疗药物敏感性差异的研究
目的 比较三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中乳腺癌细胞对化疗药物表柔比星敏感性的差异.方法 (1)分别采用细胞计数和集落计数的方法在三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长曲线;(2)分别用四甲基偶氮唑哇盐法(MTr)和集落计数的方法检测三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中表柔比星对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的细胞生长抑制率曲线和集落形成抑制率曲线;(3)通过IC50计算软件计算出相应乳腺癌细胞的IC50值,后用t检验的统计学方法比较不同模型中乳腺癌细胞的IC50值是否有统计学差异.结果 三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中的乳腺癌细胞MCF-7、231细胞均可达到指数生长期即均可达到良好的生长状态;三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中乳腺癌细胞的IC50值差异无统计学意义.结论 三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性无明显差异,提示不同的三维生长环境对乳腺癌细胞的化疗药物敏感性没有显著影响.
