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糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠PERK-CHOP-Caspase-12通路的影响
目的 观察糖络宁对糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠坐骨神经内质网应激相关PERK-CHOP-Caspase-12通路的调节作用.方法 选用8周龄雄性SD大鼠,除空白对照组外,采用高脂饲料致高血脂联合链脲佐菌素腹腔注射诱导高血糖致DPN大鼠模型.将高脂高糖大鼠随机分为模型对照组、阳性药(氧化三甲胺)对照组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,连续给药12周.给药过程中,动态监测大鼠血糖、血脂,确保糖尿病造模成功.12周后采用免疫荧光法检测坐骨神经中葡萄糖调节蛋白(glucose regulatory protein 78kD,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、蛋白激酶样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)、caspase-12和caspase-3的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组坐骨神经中GRP78、CHOP、PERK、Caspase-12和Caspase-3的表达均显著升高(P<0.01或P<0.05);与模型对照组比较,糖络宁低剂量组和高剂量组GRP78表达显著升高(P<0.01),CHOP、PERK、Caspase-12和Caspase-3表达明显降低(P<0.01或P<0.05).结论 糖络宁防治DPN的作用机制与调节坐骨神经中内质网应激相关的PERK-CHOP-Caspase-12通路相关蛋白表达而抑制细胞凋亡有关.
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针刺对戊四唑诱发惊厥大鼠海马葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白表达的影响
目的:观察针刺对惊厥大鼠海马神经元内葡萄糖调节蛋白78 (Grp 78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白表达的影响,探讨针刺抗惊厥的可能机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、模型组(n=18)、针刺组(n=18).腹腔注射戊四唑(50 mg/kg)复制惊厥大鼠模型.针刺组立即针刺“百会”“大椎”30 min.各组分别于造模后2、12、48 h采用免疫组化法观察各组大鼠海马CA 1区Grp 78和CHOP蛋白表达情况.结果:模型组大鼠在惊厥发作2、12h海马CA1区Grp 78蛋白表达与正常组比较明显增强(P＜0.01);针刺组大鼠在惊厥发作12h和48 h与模型组比较Grp 78蛋白表达显著增加(P＜0.01,P＜0.05).在惊厥发作各个时段与正常组比较,模型组大鼠海马CA1区CHOP蛋白表达明显上调(P＜0.01);针刺组海马CA 1区CHOP蛋白阳性表达在惊厥发作各个时段与模型组比较明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论:针刺能明显调节惊厥大鼠海马神经元Grp 78蛋白和CHOP蛋白的表达,从而起到保护惊厥性脑损伤作用.
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芪泽汤对慢性肾功能衰竭大鼠内质网应激相关凋亡分子表达的影响
目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响.方法:2.5％腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型.分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g·kg-1·d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.6g·kg-1·d-1),每组10只.造模同时各治疗组ig给药,干预24 d后,观察体重变化,全自动生化分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),应用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot检测CHOP( C/EBP-homologous protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12( Caspase-12)肾内表达水平.结果:模型组BUN(17.21±4.63) mmol·L-1,SCr( 67.00±25.62) μmol·L-1较对照组BUN(4.19±0.77) mmol· L-1,SCr( 15.89±2.62)μmol·L-1明显升高(P ＜0.01)；TUNEL结果显示空白组肾小管上皮细胞有少量凋亡,而模型组细胞凋亡数明显增多(P＜0.01)；模型组CHOP,Caspase-12表达显著增强(P＜0.01).芪泽汤低剂量和尿毒清能抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾小管上皮细胞凋亡和CHOP,Caspase-12表达(与模型组相比较P＜0.05).结论:芪泽汤低剂量能保护腺嘌呤导致的大鼠肾损害,可能与其抑制ERS相关凋亡分子CHOP,Caspase-12高表达有关.
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针刺对糖尿病大鼠胰腺内质网应激PERK-CHOP途径与Bax/Bcl-2基因表达的影响
目的:探讨内质网应激途径PERK-CHOP与链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠胰腺相关凋亡基因表达的关系及针刺对其的影响.方法:70只雄性SD大鼠高脂高糖饲料喂养4周后腹腔注射小剂量STZ (30mg· kg-1·d-1),成功制造糖尿病模型30只,随机分为模型组、针刺组和二甲双胍组,每组10只.治疗4周后,实时荧光定量PCR测胰腺CHOP、PERK、Bax、Bcl-2 mRNA表达,并设空白组对照.结果:与治疗前比较,治疗后针刺组和二甲双胍组RBG均明显降低(P＜0.05);干预4周后,针刺组和二甲双胍组RBG仍显著高于空白组(P＜0.01),虽低于模型组,但差异无统计学意义.干预4周后,模型组胰腺CHOP、PERK和Bax mRNA表达均显著高于空白组(P＜0.01),针刺组和二甲双胍组均显著低于模型组(P＜0.01);模型组Bcl-2 mRNA表达显著低于空白组(P＜0.01),针刺组和二甲双胍组显著高于模型组(P＜0.01).结论:STZ诱导的糖尿病大鼠胰腺组织存在内质网应激和细胞凋亡,针刺可以通过PERK-CHOP通路抑制胰腺内质网应激,改善凋亡基因表达.
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CCK-8降低LPS诱导的小鼠单核细胞RAW264.7 CHOP／caspase-11／caspase-1的表达
目的：探讨CCK-8对LPS激活RAW264.7细胞CHOP／caspase-11／caspase-1信号通路的影响。方法用LPS和（或） CCK-8和（或） CCK-8的1受体阻滞剂孵育RAW 264.7细胞，用Western blot法检测CHOP、caspase-11蛋白表达，用试剂盒检测caspase-1活性，用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-1β水平。结果与对照组相比，LPS组CHOP、caspase-11表达水平均显著升高（ P＜0.05），给予CCK-8可有效抑制LPS诱导的CHOP、caspase-11表达升高（ P＜0.05），而预先给予CCK-8的1受体阻滞剂可明显抑制CCK-8的作用。 caspase-1活性变化、IL-1β含量变化趋势均与CHOP、caspase-11表达水平变化趋势一致（ P＜0.05）。结论 CCK-8通过受体1抑制CHOP／caspase-11／caspase-1表达，减少LPS诱导IL-1β的生成，发挥抗炎作用。
关键词： 胆囊收缩素 脂多糖 C/EBP同源蛋白 caspase-11 Caspase-1 -
4-苯基丁酸钠盐通过抑制内质网应激反应改善大鼠创伤性脑损伤
目的 观察内质网应激相关蛋白葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、磷酸化胰腺内质网激酶(p-PERK)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在大鼠弥漫性脑创伤后的表达变化,探讨4-苯基丁酸钠盐(4-PBA)通过抑制内质网应激,减轻创伤后脑损伤(TBI)程度的机制.方法 将90只雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、TBI组和4-PBA组.Marmarou法建立SD大鼠中度弥漫性脑创伤模型;于伤后即刻腹腔注射4-PBA(120 mg/kg)每天1次,共3d.分别于伤后3、6、12、24、48和72 h处死大鼠,观察伤后24、48和72 h大鼠的神经行为表现;HE染色观察病理学改变;免疫组织化学法及Western blotting检测伤后不同时间点皮质区GRP78、p-PERK和CHOP蛋白的表达.结果 4-PBA组大鼠脑创伤后的神经功能缺损明显改善,与TBI组相比差异具有统计学意义(P<0.05).与Sham组相比,TBI组GRP78、p-PERK和CHOP蛋白表达明显升高(P<0.05),GRP78于伤后3 h增加,12 h达高峰,之后逐渐减少,72 h回落至基线水平;p-PERK于12 h达高峰(P<0.05);CHOP于24 h达高峰,48～72h回落,仍高于基线水平(P<0.05);4-PBA组GRP78、p-PERK与CHOP的表达均低于TBI组(P<0.05).结论 脑创伤后启动内质网应激反应,4-PBA对脑创伤大鼠具有脑保护作用,其机制之一是通过阻断内质网应激启动的PERK/CHOP途径而实现的.
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内质网应激对微囊化HepG2细胞脂代谢影响及调控研究
研究内质网应激发生对微囊化细胞脂代谢调节的影响,探讨内质网应激拮抗剂对微囊化细胞生长代谢调控的可行性.采用静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测微囊化对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达影响；通过MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白蛋白含量,乙烷-丙酮法抽提测定胞内总胆固醇和甘油三酯含量,并比较拮抗剂四苯基丁酸(4-PBA)干预后相关指标变化.结果显示,微囊细胞中内质网应激标识蛋白GRP78和CHOP表达量分别为同天数下平面细胞3.6倍和1.9倍(P＜0.05),胞内总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)含量分别为平面细胞1.7倍和3.2倍(P＜0.05).内质网应激拮抗剂4-PBA在1.0 mM可显著增加微囊化细胞活性.干预后GRP78和CHOP基因表达水平降低50％和30％ (P ＜0.05),胞内CHO和TG含量降低30％和15％ (P ＜0.05),并使白蛋白水平较对照组显著提高(P＜0.05).结果提示微囊内存在内质网应激,且与微囊细胞脂代谢失调有关；内质网应激拮抗剂能缓解微囊对细胞的以上作用.
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内质网应激相关蛋白1对衣霉素诱导HepG2细胞内质网应激的影响
目的：研究过表达内质网应激相关蛋白1（SERP1）对衣霉素诱导肝癌HepG2细胞内质网应激的影响。方法以衣霉素诱导HepG2细胞发生内质网应激，将细胞分为以下5组：正常对照组、衣霉素组、衣霉素＋0．25μg SERP1转染组、衣霉素＋0．5μg SERP1转染组和衣霉素＋1．0μg SERP1转染组，每组实验重复3次；采用MTT法检测不同浓度与作用时间的衣霉素对HepG2细胞存活率的影响，以吸光度（A ）值表示。Western blot法检测各组细胞内内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白（GRP78）、C／EBP同源蛋白（CHOP）以及钙联蛋白的表达水平。采用SPSS 15．0统计软件进行统计学分析，比较蛋白表达水平。结果与对照组相比，衣霉素处理组HepG2细胞中内质网应激标志性蛋白GRP78、CHOP及 Calnexin 蛋白表达量显著升高，分别为对照处理组的3．8倍（t ＝11．5， P ＜0．05）、1．3倍（t ＝3．498，P ＜0．05）和1．4倍（t ＝4．1，P ＜0．05），差异均有统计学意义；随着SERP1过表达量的逐渐升高，变化呈现剂量依赖性。随着SERP1转染剂量的增加，各组GRP78蛋白的表达较单独衣霉素处理组分别下降了12％[（1．83±0．29）A值，（1．61±0．13）A值，t ＝2．36， P ＞0．05]、24％和30％[（1．83±0．29）A值，（1．40±0．11）A值，（1．27±0．21）A值；F ＝50．56， P ＜0．05]，CHOP蛋白的表达水平分别下降了23％，29％和34％[（1．0±0．15）A值，（0．79±0．07）A值，（0．72±0．55）A值，（0．67±0．14）A值；F ＝9．532，P ＜0．05]，Calnexin蛋白的表达水平分别下降了5％[（1．20±0．18）A值，（1．15±0．13）A值；P ＞0．05]、24％和28％[（1．20±0．18） A值，（0．92±0．07）A值，（0．87±0．18）A值；F＝8．116，P＜0．05]。结论外源性过表达SERP1蛋白通过下调内质网应激蛋白的表达，降低HepG2细胞内质网应激水平，缓解内质网应激介导的细胞损伤。
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C/EBP同源蛋白在动脉粥样硬化过程中的作用
在动脉粥样硬化发生和发展过程中,血管壁受到多种刺激使巨噬细胞、平滑肌细胞和内皮细胞产生内质网应激.C/EBP同源蛋白(CHOP)在动脉粥样斑块中高表达,基因敲除小鼠模型揭示了CHOP在血管壁不同细胞中的作用.分子机制研究表明,CHOP参与不同细胞的生长和凋亡等多个信号通路.
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衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡
目的:观察衣霉素(tunicamycin,TM)诱导胃癌BGC-823细胞发生内质网应激介导的细胞凋亡.方法:以浓度为10 mg/L的TM分别处理胃癌BGC-823细胞0、24、36和48 h.Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡,应用RT-PCR、Western blot检测CHOP的表达水平.结果:PI染色法检测凋亡细胞且随时间增加凋亡细胞增多,细胞凋亡率分别为0.0%、11.8%、16.3%、20.4%,具有时间依赖性(P<0.01).RT-PCR及Western blot结果显示,CHOP的表达明显高于对照组,随着处理时间的增加表达量呈上调趋势,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM可诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡.
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C/EBP同源蛋白siRNA对糖尿病周围神经病变大鼠脊髓PERK-ATF4-CHOP通路mRNA的影响
目的 观察C/EBP同源蛋白(CHOP)siRNA对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠脊髓RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)-转录活化因子4(ATF4)-CHOP通路相关因子mRNA表达的影响.方法 采用高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ复制DPN大鼠模型,分为空白对照组(Con)、模型对照组(Mod)、Con+CHOP siRNA组和Mod+CHOP siRNA组,分别鞘内注射转染试剂或CHOP siRNA,取L4～5下脊髓,检测PERK、真核翻译起始因子2a(eIF2a)、ATF4、CHOP、Bcl-2和Bax mRNA表达水平.结果 与Con组比较,Mod组PERK[(1.04±0.03)vs(1.40±0.10)]、eIF2a[(1.01±0.14)vs(1.64±0.13)]、ATF4[(1.02±0.07)vs(1.13±0.07)]、CHOP[(1.06±0.05)vs(1.25±0.07)]和Bax[(1.01±0.04)vs(1.75±0.09)]mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01),而Bcl-2[(1.00±0.16)vs(0.55±0.06)]表达降低(P<0.01);与Mod组比较,Mod+CHOP siRNA组PERK、eIF2a、ATF4、CHOP和Bax的mRNA表达降低(P<0.01),Bcl-2表达升高(P<0.01).结论 CHOP siRNA干预能抑制DPN大鼠脊髓中PERK-CHOP凋亡通路,从而减轻脊髓脱髓鞘,缓解神经病变.
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远程缺血后适应对大鼠脑缺血-再灌注损伤的影响
目的 探讨远程缺血后适应对大鼠脑缺血 - 再灌注损伤的保护作用及对内质网应激诱导的凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)的影响.方法 将56只雄性SD大鼠,随机分为假手术组,单纯缺血组,插栓即刻行缺血后适应组(后适应1组),再灌注即刻行缺血后适应组(后适应2组),每组14只.线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h模型.远程缺血后适应的实行:在插栓后即刻 (后适应1组) 及再灌注即刻(后适应2组)夹闭双侧股动脉10 min,放开10 min,此为一次缺血后适应,共进行3次.于再灌注后24 h处死大鼠, 测定脑梗死体积;免疫组化测定脑组织皮质和基底核CHOP的表达.结果 ①假手术组大鼠脑组织未见梗死灶,单纯缺血组、后适应1组、后适应2组脑梗死体积百分比分别为(48±10)%、(22±11)%及(26±12)%.与单纯缺血组比较,两缺血后适应组的梗死灶体积均明显减小,差异有统计学意义(P＜0.01);两缺血后适应组间差异无统计学意义.②在皮质和基底核区,假手术组仅见少量的CHOP阳性表达细胞,单纯缺血组阳性表达细胞明显增多(P＜0.05);而两后适应组CHOP阳性表达细胞明显减少,与单纯缺血组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).两缺血后适应组间比较,差异无统计学意义.结论 远程缺血后适应对大鼠脑缺血有保护作用.其保护作用可能与减少脑组织中CHOP含量有关.
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壁虎多肽混合物对HepG2细胞增殖及内质网应激途径的影响
目的 研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌HepG2细胞增殖及内质网应激途径的影响.方法 用不同浓度GPM (0,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.40,0.45 mg·mL-1)处理HepG2细胞24h.以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,根据MTT结果,将细胞分为空白组和低、中、高3个质量浓度(GPM:0.1,0.2,0.3mg·mL-1)实验组,对照组(氟尿嘧啶10 μg·mL-1).以Western blot法检测内质网应激相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 GPM可抑制HepG2细胞的增殖,并具有质量浓度依赖性,作用24,48,72h后,其IC50值分别为0.27,0.23,0.20 mg·mL-.正常组、对照组和低、中、高3个质量浓度实验组的双链RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(PERK)与GAPDH灰度比值分别为(4.31±0.81)×10-2,(8.92±0.91) ×10-2,(20.73±0.97) ×10-2,(24.04±0.95)×10-2,(11.65±1.67) ×10-2.这5组的GRP78与GAPDH灰度比值分别为(27.99±2.36)×10-2,(35.58±1.02)×10-2,(42.55±1.19)×10-2,(54.91±1.20)×10-2,(7.31±1.01)×10-2.这5组的ATF4与GAPDH灰度比值分别为(20.82±1.42)×10-2,(39.60±0.56)×10-2,(52.02±1.83)×10-2,(73.39±1.83)×10-2,(18.13±2.28)×10-2;这5组的CHOP与GAPDH灰度比值分别为(8.71±0.76)×10-2,(11.27±1.07)×10-2,(41.29±1.36)×10-2,(48.55±1.37)×10-2,(33.01 ±3.95)×10-2.这5组的多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)与GAPDH灰度比值分别为(13.06±2.88)×10-2,(36.79±2.10)×10-2,(58.72±1.53)×10-2,(67.61±1.68)×10-2,(34.88±2.02)×10-2.这5组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)与GAPDH灰度比值分别为(5.92±0.33)×10-2,(14.71±1.11)×10-2,(17.58±1.33)×10-2,(35.41±2.91)×10-2,(5.94±1.61)×10-2,与正常组相比,4个给药组的以上各项指标差异均有统计学意义(均P ＜0.05).提示GPM可能通过诱导HepG2细胞内质网应激从而诱导细胞凋亡.结论 GPM可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与诱导HepG2细胞内质网应激有关.
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铁皮石斛多糖对高糖诱导的血管内皮依赖性舒张功能的影响
目的:探讨铁皮石斛多糖(dendrobium polysaccharides,DP)对高糖诱导的SD大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张功能(endothelium dependent relaxation,EDR)的影响.方法:采用离体血管灌流方法,观察不同浓度DP对高糖诱导的大鼠胸主动脉EDR的影响.Western Blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)及核转录因子-κB (NF-κB)的表达.结果:高糖(44 mmol·L-)显著抑制了血管环EDR,而对非内皮依赖性舒张功能没有影响;DP(200,400和800 μg· mL-)逆转了高糖对EDR的抑制作用.高糖显著增加胸主动脉中GRP78和CHOP及NF-κB的表达(P＜0.05).与高糖组比较,高糖+DP(200,400和800 μg· mL-1)组GRP78和CHOP及NF-κB的表达均显著降低(P＜0.05).结论:DP对高糖诱导的EDR抑制具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激和NF-κB信号通路有关.
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地昔帕明逆转人脑胶质瘤耐药细胞U251/TR对替莫唑胺的耐药作用
目的探讨抗抑郁药地昔帕明（DMI）对人脑胶质瘤耐药细胞（U251/TR）对替莫唑胺（TMZ）耐药作用的影响及其机制。方法 DMI 20~80μmol·L-1或TMZ 0.5~10 mmol·L-1处理U251/TR细胞24 h，用CCK-8法测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量（IC50）。CCK-8检测TMZ（1和2 mmol·L-1）和DMI （20，30和40μmol·L-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h对细胞增殖抑制的影响，用金正均法计算Q值来评价两种药物的协同效应。TMZ（1 mmol· L-1）和DMI（30μmol·L-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h，以Hoechst33258染色观察细胞核形态，发光法检测胱天蛋白酶3活性；实时定量PCR和Western蛋白印迹法检测C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达；小干扰RNA（siRNA）沉默CHOP的表达后，观察TMZ （1 mmol · L-1）和 DMI（30μmol · L-1）联合给药对U251/TR增殖抑制的影响。结果 DMI或TMZ单用对U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用，并且呈浓度依赖性（r 2=0.983，0.982，P<0.05），IC50分别为（33.6±0.5）μmol· L-1和（2.5±0.6）mmol· L-1。TMZ（1和2 mmol·L-1）和DMI（20，30和40μmol·L-1）联合给药能24 h对U251/TR细胞的增殖抑制率明显强于单独给药，以金正均法计算联合给药的Q值均>1.15，证实TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时，DMI 30μmol·L-1和TMZ 1 mmol·L-1联和应用可诱导U251/TR细胞凋亡，主要表现为细胞核固缩、染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给药的效果（P<0.05）。DMI 和TMZ联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白CHOP的表达（P<0.05）。以siRNA沉默CHOP表达后，DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱，联合给药组细胞生存率由51.8%升至62.2%（P<0.05）。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞U251/TR对TMZ的耐药性，其机制可能与激活CHOP表达有关。
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大脑中动脉内促红细胞生成素或联合tPA注射对大鼠脑缺血再灌注的作用及机制
目的 探讨大脑中动脉内低剂量促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)或联合组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,tPA)注射是否有神经保护作用及对内质网应激通路的影响.方法 将60只成年雄性Sprague-Dawley大鼠采用数字表法随机分为5组,假手术(sham)组、大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型对照组、EPO组、tPA组及EPO联合tPA组,线栓法制备右侧大脑中动脉缺血2h/再灌注24 h模型,在缺血2h/再灌注即刻通过大脑中动脉单独注射EPO(800IU/kg)、tPA(10 mg/kg)以及联合注射EPO(800IU/kg)及tPA (10 mg/kg).再灌注24 h后评价神经功能缺损,测定梗死体积,检测C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)及磷酸化的真核起始因子(phosphorylated form of eukaryotie initiation factor 2α,p-eIF2α)的表达.结果 与MCAO模型组相比,EPO、tPA+ EPO可以显著减小大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,L/R)后的梗死体积,改善神经功能,并显著降低微血管和脑组织中p-eIF2α和CHOP的表达,但单独给予tPA没有作用;与tPA组相比,tPA+ EPO可以显著减小梗死体积、改善神经功能,并显著降低微血管和脑组织中p-eIF2α和CHOP的表达.免疫荧光显示,CHOP与末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)有共定位.结论 在再灌注即刻通过大脑中动脉内注射低剂量EPO或者低剂量EPO联合tPA可以减轻脑I/R损伤,可能与EPO抑制内质网应激,从而减少神经细胞凋亡有关.
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猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡与内质网应激相关蛋白CHOP表达的关系
目的 探讨猪冠状动脉微栓塞(CME)后心肌细胞凋亡与内质网应激相关蛋白C/EBP同源性蛋白(CHOP)表达的关系.方法 将选取的50头小型猪随机分为Sham组和CME组,每组25头.采用介入法经冠脉内注入微栓塞球建立CME模型,Sham组经冠脉内注入等量生理盐水.根据术后观察时间点进一步分为3h组、6h组、12h组、24 h组、48 h组,每组5头.应用超声心动图检测心功能,HE染色观察心肌组织病理学变化,苏木素碱性复红苦味酸(HBFP)染色检测心肌微梗死面积,缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌组织CHOP、Caspase-3蛋白表达.结果 与相应Sham组比较,CME后各时间点心功能均不同程度下降(P＜0.05),CME后12h心功能下降明显.CME后各时间点均可见多发局灶性微梗死心肌,以心内膜下及左心室为多,无大片坏死,各组间微梗死面积比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与相应Sham组比较,CME组各时间点心肌细胞凋亡指数不同程度增加(P＜0.05),CME后12h心肌细胞凋亡达高峰.凋亡心肌细胞主要位于微梗死区及其边缘区.与相应Sham组比较,CME组各时间点CHOP、Caspase-3蛋白表达不同程度上调(P＜0.05),呈动态变化,CME后12h达高峰.结论 CME后CHOP蛋白表达上调可能参与内质网应激诱导的心肌细胞凋亡.
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平阳霉素诱导人脐静脉血管内皮细胞HUVEC凋亡的作用机制
目的 检测不同浓度平阳霉素(pingyangmycin,PYM)作用24h对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC细胞的生长抑制及凋亡的影响,探讨平阳霉素诱导HUVEC细胞凋亡佳浓度及有关作用机制.方法 用不同浓度的平阳霉素作用HUVEC细胞24h,以细胞增殖-毒性8检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较0.1、10、100、1000μg/ml平阳霉素作用24h后对HUVEC细胞的抑制作用,用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒(Annexin-V FITC/PI apoptosis kit)检测不同浓度PYM对HUVEC细胞凋亡作用的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度平阳霉素作用HUVEC细胞后内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达.结果 CCK-8结果显示随平阳霉素浓度的升高,对HUVEC细胞的抑制作用越明显(P＜0.05);然平阳霉素药物浓度100μg/ml和1000μg/ml组相比,差异无显著性统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测显示0.1、1、10、100μg/ml平阳霉素作用24h后细胞凋亡率分别为5.37％±1.63％、12.70％±1.57％、24.70％±6.99％、23.60％±0.80％,坏死率分别为4.87％±2.09％、7.32％±3.88％、39.10％±6.18％、66.30％±0.40％,随药物浓度增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导,和对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blot法结果显示,平阳霉素各浓度作用24h后促进内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达.结论 平阳霉素在体外能明显抑制HUVEC细胞生长并促进其凋亡,当平阳霉素浓度达到100μg/ml时,细胞以坏死为主;平阳霉素可能通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径诱导HUVEC细胞凋亡.
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水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶表达的影响
目的 探讨水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)表达的影响.方法 建立单侧输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型;将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,水苏碱高、中、低剂量组;于术后第14天处死大鼠收集血清测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);采用HE染色观察肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积,判断肾间质纤维化程度;采用免疫组织化学方法检测肾组织中PERK、激活转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达.结果 各治疗组与模型组比较,BUN、Scr均明显降低,肾小管损伤程度明显减轻,肾间质胶原相对面积和PERK、ATF4、CHOP的表达显著降低(P＜0.05、0.01).与依那普利组比较,水苏碱高剂量组的抗肾间质纤维化作用更为显著(P＜0.05).结论 水苏碱能够抑制PERK信号通路介导ATF4蛋白表达水平升高及ATF4激活CHOP的蛋白表达,阻止细胞凋亡,从而减缓了肾间质纤维化的发生和发展.
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姜黄素对小鼠肺缺血/再灌注损伤时细胞凋亡及CHOP的影响
目的:本研究旨在探讨姜黄素(CUR)对小鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的影响.方法:C57BL/6J小鼠60只,随机分为6组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血/再灌注+二甲基亚砜组(DMSO组)以及缺血/再灌注+姜黄素剂量100 mg/kg、150 mg/kg和200mg/kg组(CUR-100组、CUR-150组和CUR-200组).分别于再灌注3h留取左肺,检测湿干/重比(W/D)和总肺水含量(TLW)；光镜和电镜观察肺组织形态学结构改变并进行肺组织损伤定量评估(IQA)；逆转录-PCR、Western blot测定CHOP和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA和蛋白表达水平；原位末端标记法(TUNEL法)检测肺细胞凋亡指数(AI).结果:与Sham组相比,I/R组和DMSO组中CHOP和GRP78 mRNA和蛋白表达水平均升高(P＜0.05),W/D、TLW、IQA和AI均明显增加(P＜0.01),肺组织形态学和超微结构均发生明显损伤；与DMSO组相比,CUR-100组、CUR-150组和CUR-200组各组GRP78 mRNA和蛋白表达水平均升高(P＜0.05),而CHOP mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.05),W/D、TLW、IQA和AI亦均下降(P＜0.01),肺组织形态学异常改变趋近于正常.结论:I/R引发小鼠肺组织细胞过度的未折叠蛋白反应,并通过CHOP途径引起细胞凋亡,损伤肺组织；姜黄素对I/R损伤发生的小鼠肺脏具有良好的保护作用,其机制可能与其对抗过度的未折叠蛋白反应中CHOP途径引起的细胞凋亡有关.
