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机动车排放PM2.5对EA.hy926细胞DNA甲基化效应研究
目的 探讨机动车排放PM2.5对EA.hy926细胞(人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549融合的细胞株)增殖功能、DNA甲基化及凋亡的影响.方法 机动车排放PM25对EA.hy926细胞染毒24 h.采用MTS法测定机动车排放PM25对细胞增殖功能的影响;DNA甲基化定量检测试剂盒(比色法)测定机动车排放PM2.5对细胞DNA甲基化的影响;AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪测定机动车排放PM2.5对细胞凋亡的影响.结果 机动车排放PM2.5染毒24 h可抑制细胞增殖功能,当染毒质量浓度为200 μg/mL时,与PBS对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);随着染毒质量浓度的增加细胞DNA甲基化率(5-mC％)下降,在染毒质量浓度为50 μg/mL和200 μg/mL时,与PBS对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);随染毒质量浓度升高细胞诱导凋亡率逐渐升高.结论 机动车尾气排放PM25可以抑制EA.hy926细胞的增殖功能,改变EA.hy926细胞的DNA甲基化率,对EA.hy926细胞产生诱导凋亡作用.此外DNA甲基化可能是细胞增殖和凋亡的机制,定点基因的甲基化仍需要进一步研究.
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浅析新技术在生化分析仪上的应用
本文着重介绍了目前在医院检验科生化分析仪上应用的非接触式超声混匀和检堵功能两项先进技术,并对MTS理论在检堵功能中的应用作了简述.
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131I-zaptuzumab对体外培养肿瘤细胞存活的影响
目的 为提高单克隆抗体治疗肿瘤效果,研究测试放射性核素131I标记的单克隆抗体zaptuzumab对体外培养肿瘤细胞的杀伤作用.方法 实验采用3种肿瘤细胞,分别是人A549肺腺癌、人H460大细胞肺癌和人MGC-803胃腺癌细胞.每组细胞采用4种不同的处理:分别是生理盐水、zaptuzumab、131I-zaptuzumab和131I.处理12h后用MTS法测定细胞活性,用ANO-VA分析各组之间的统计学差异,了解131I-zaptuzumab对肿瘤细胞存活的影响.结果 131I-zaptuzumab的处理使人A549肺腺癌细胞的存活率降低37.9％,而zaptuzumab和131I处理分别使人A549肺腺癌细胞的存活率降低8.7％和1.9％;131I-zaptuzumab 的处理使人H460大细胞肺癌的存活率降低53.4％,而zaptuzumab和131I处理使人H460大细胞肺癌细胞的存活率降低15.1％和18.1％;131I-zaptuzumab使人MGC-803胃腺癌存活率降低13.4％,而zaptuzumab和1311 I处理使存活率降低10.2％和8.4％.结论 131I-zaptuzumab与zaptuzumab相比,能够更有效地杀伤人A549肺腺癌和H460大细胞肺癌细胞,提示靶向死亡受体5的放射免疫治疗的可行性.
关键词： 放射性同位素碘 zaptuzumab A549 H460 MTS -
BUT-6010的抗肿瘤活性实验研究
目的 研究BUT-6010对肿瘤的抑制作用.方法 体外抗肿瘤实验:选取9种人源肿瘤细胞株,并将其分为BUT-6010组、顺铂阳性对照组、细胞对照组和培养基空白对照组,MTS法测定抑制率和IC50值;体内抗肿瘤实验:实验分为BUT-6010 10 mg/kg组、BUT-6010 20 mg/kg组、BUT-6010 30 mg/kg组、顺铂阳性对照组(2.5 mg/kg)和模型组.通过对S180荷瘤小鼠瘤重的研究,观察BUT-6010的体内抗肿瘤作用.结果 BUT-6010对9种人癌细胞株的IC50均小于顺铂.顺铂(2.5 mg/kg)的抑瘤率达51.8%(P < 0.05),BUT-6010(30 mg/kg)抑瘤率为52.8%(P < 0.05).结论 BUT-6010(30 mg/kg)的安全性与有效性同顺铂(2.5 mg/kg)相当.
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北苍术多糖的酶法辅助超声提取工艺的优化及其体外抗肿瘤活性研究
目的 通过生物酶解技术优化北苍术多糖的酶辅助超声提取方法,并考察其体外抗肿瘤活性.方法 选用纤维素酶和果胶酶水解北苍术药材,酶解后采用超声法提取北苍术药材中多糖.以多糖得率为指标,在单因素试验的基础上采用4个因素(酶用量、酶解时间、酶解pH值、酶解温度)3个水平L9(34)正交设计法对酶解条件进行优选,并选用苯酚-浓硫酸法测定多糖,采用MTS、台盼蓝法对北苍术粗多糖体外抗肿瘤活性进行初探.结果 佳酶解条件为酶用量为药材1.2％、在60℃、pH 5条件下酶解50 min,再以超声提取40 min,北苍术多糖的得率为32.29％,所提粗多糖对HeLa细胞增殖的抑制率为64.42％.结论 酶解辅助超声提取北苍术中多糖简便易行,可以提高多糖得率,多糖活性较好.
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MTS/PMS比色分析方法测定LA795细胞活性的实验条件
细胞活性检测是生物学评价体系中的重要指标之一.MTS为Buttke等[1]设计的一种新型的MTT类似物,在偶联剂PMS存在的条件下,可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原形成水溶性的产物,并与活细胞数有着高度的相关性.由于MTS比色法存在着无放射性、快速安全、方便灵敏、结果可靠、特异性强等其它方法无法相比的优点,适用于抗癌药物体外筛选和临床肿瘤药敏等实验[2].本文采用LA795小鼠肺腺癌细胞,对MTS/PMS比色分析测定细胞活性的实验条件进行了探讨.
关键词： MTS LA795小鼠肺腺癌细胞 细胞活性测定 -
应用MTS方法检测生物人工肾小管的细胞活性
目的:探讨应用MTS方法在生物人工肾小管(RAD)构建过程中测定血液滤器中肾小管上皮细胞活性的可行性.方法:采用人肾近曲小管上皮细胞株(HK2)体外培养,然后按不同浓度植入6孔板,应用MTS方法测定490 nm吸光度(OD)值,判断其测定值与细胞数量之间的关系.然后将培养的HK2细胞植入FH66血液滤过器内腔继续培养构建RAD,在培养过程中每隔3 d用MTS方法测定一次OD值,并与无细胞植入的空白滤器作对照.结果:HK2细胞数在105～106范围内,与OD值呈正相关关系,相关系数(r)为0.985,P<0.01.各时间点RAD组MTS测定均值与对照组相比均有统计学意义(P<0.01,n＝5).RAD组MTS测定值随培养时间的延长而增加,提示RAD在培养过程中细胞增殖.结论:MTS方法能较好地反映RAD内的细胞活性,能在RAD培养过程中作为一种简便有效的手段监测滤器内的细胞活性.
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断体地龙再生期提取液对成纤维细胞增生作用的研究
目的:通过研究断体地龙再生期不同时间点提取液对成纤维细胞增生作用的差异,筛选出活性强的提取液,阐明地龙再生期促进创伤愈合作用的物质差异.方法:将活体地龙进行断体,刺激其产生修复物质,在不同时间点于断体处1 cm(8～12体节)取材,匀浆并抽提24 h,得到地龙断体后1～14 d的提取液,并以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为阳性对照,采用MTS法分析各提取液对小鼠成纤维细胞增生作用的影响,筛选出活性强的提取液.结果:地龙断体后第3d的提取液活性强.结论:地龙断体后会产生促进成纤维细胞增生作用的物质,且在地龙修复期的不同时间段产生的修复物质存在一定的差异,其中断体第3d该物质含量较高,为进一步探求地龙中促进创伤愈合作用物质奠定基础.
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紫柏凝胶抑制宫颈癌Siha细胞增殖和诱导凋亡的实验研究
目的 研究紫柏凝胶对HPV阳性宫颈癌细胞Siha的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法 选取对数生长期Siha细胞,采用不同浓度(15、7.5、3.25 mg/mL)组,不加药物Siha细胞为对照组.MTS检测细胞生长抑制,台盼蓝染色检测细胞存活率,HOECHST 33342/PI染色法检测凋亡细胞形态学改变.结果 MTS法检测,各组紫柏凝胶对Siha细胞的生长均有不同程度的抑制作用,3.125 mg/mL剂量组与空白组相比有统计学意义(P<0.05),IC50为(15±2.1)mg/mL;台盼蓝染色,紫柏凝胶对Siha细胞生长有一定抑制作用,各浓度组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);紫柏凝胶作用Siha细胞后细胞间质变松,细胞质颗粒增多,染色质凝聚,分块,胞质浓缩;HOECHST 33342/PI染色,荧光显微镜下观察到紫柏凝胶引起细胞发生凋亡.结论 紫柏凝胶能抑制宫颈癌Siha细胞的增殖和诱导其凋亡.
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制备和培养多细胞肿瘤球体的简易方法
目的通过实验找出一种更加简便、快捷的制备MTS的方法.材料和方法利用本实验室的2个肺腺癌细胞系AGZY和Anip,通过转瓶琼脂培养法(即在培养瓶底部涂上1～2mm厚的琼脂层,使之凝固后接种一定浓度的细胞悬液,置于37℃、50r/min的恒温摇床上旋转培养)进行MTS的制备和培养.结果经过12～14h后,即可见许多较小的细胞集聚体形成,以后集聚体外层细胞不断分裂增生,逐渐形成大小较一致、形态较规则的球体,即MTS.MTS逐渐增大,约12d后生长进入平台期,约15d后MTS表层细胞有脱落,后MTS崩解.结论本实验能够诱导贴壁性很强的细胞(AGZY和Anip)形成MTS,并且可以通过控制接种的细胞浓度来制备一定数量的MTS;形成的MTS大小较一致,形态较规则.重要的是本实验操作简单,观察方便,设备要求不高,更便于普通实验室开展工作.
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槐定碱阳离子脂质体的制备及体外抗肿瘤活性的研究
目的 制备槐定碱阳离子脂质体,并探讨其对肿瘤细胞的抑制作用.方法 采用主动载药法制备槐定碱阳离子脂质体,并对其进行表征研究,采用MTS方法考察槐定碱阳离子脂质体对3种肿瘤细胞的抑制作用.结果 制备得到的槐定碱阳离子脂质体呈类圆形,表面光滑,其平均粒径和聚分散指数分别为242.2 nm和0.180,表面电荷为+32.5 mV,其包封率和载药量分别为88.62％和5.97％.槐定碱阳离子脂质体对3种肿瘤细胞的IC50值均明显高于槐定碱,而空白阳离子脂质体对细胞并无明显的抑制作用.结论 采用阳离子脂质体作为槐定碱的载体有利于将药物透过细胞膜,提高抗肿瘤作用,值得进行深入的系统研究.
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MTS法细胞毒试验的非线性关系研究
目的探讨MTS法细胞毒试验的细胞数-OD关系以及药物剂量-抑制率关系,为更好地应用MTS法提供提示.方法采用HL-60和Raji细胞株.细胞数-OD关系试验:96孔板接种不同浓度的细胞,加入MTS培养1～5 h后于490 nm波长测定OD,用SPSS 11.0软件对数据作曲线估计.细胞毒试验:96孔板每孔接种细胞,加不同剂量的药物培养72 h,加入MTS培养3 h后于490 nm波长测定OD,用SPSS 11.0软件对数据作曲线估计.结果 2种细胞5个时间点的细胞数-OD关系以三次项曲线拟合度好,r2为0.997～1.000,均大于线性模型的r2 0.938～0.993.3种药物对2种细胞的剂量-抑制率以三次项曲线拟合度好,r2为0.998～1.000,优于对数剂量-概率单位线性模型的r2 0.948～0.987.结论三次项曲线对MTS法细胞毒试验的细胞数-OD关系有很高拟合度且优于线性曲线模型.通过药物剂量-抑制率的三次项曲线拟合方程可望得到比常用的概率单位回归法更准确的IC50.
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细胞增殖的检测方法
近年来,细胞增殖一直是生物医学领域各专业的研究热点,细胞增殖检测技术种类繁多却并不完善,本文就细胞增殖的特征以及常用的细胞增殖的各种检测方法的优缺点作一综述.
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金属硫蛋白降解口腔金属材料毒性的研究展望
金属硫蛋白( metallothioneins,MTs)是一种广泛存在生物体内的、进化保守的、热稳定、低分子量的(分子量为6-7kDa)单链多肽.早是50年前Margoshes作为作一种镉的结合蛋白在马肾脏中发现的.由于它金属含量高且具有独特的分子生物学结构,金属硫蛋白被列为金属蛋白类.
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地西他滨联合化疗药物对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用
目的:研究地西他滨单独或联合5-氟尿嘧啶/紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞株的抑制作用.方法:应用MTS方法检测地西他滨单独或联合5-氟尿嘧啶/紫杉醇作用于胃癌SGC-7901细胞株后,在不同浓度梯度和不同时间在490 nm波长处的吸光度(A)值,并计算细胞增殖抑制率.同时,采用流式细胞仪检测中间浓度组各药物单独或联合应用在48 h对细胞凋亡的影响.MTS检测时间分别选择细胞增殖12、24、36、48、60及72 h,流式细胞仪检测时间选择48 h.结果:地西他滨对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用均随着时间和浓度的递增而逐渐升高;地西他滨联合5-氟尿嘧啶或紫杉醇组对胃癌细胞的抑制率均较单药组升高(P ＜ 0.05).在诱导细胞凋亡方面,地西他滨联合用药组48 h的细胞凋亡率均高于单独用药组(P ＜ 0.05).结论:地西他滨能增强5-氟尿嘧啶和紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,能促进5-氟尿嘧啶和紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞的凋亡.
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GRP78重组表达腺病毒的构建及在HepG2细胞的表达及其相关功能研究
目的:构建葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)重组表达腺病毒pAd-GRP78,并感染HepG2细胞建立能够高表达GRP78的细胞模型,同时在HepG2细胞中研究重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖能力的影响.方法:利用腺病毒穿梭质粒pAdTrack-rO4构建载有GRP78基因的穿梭质粒pAdTrack-TO4-GRP78载体,并通过基因测序鉴定载体序列正确.将载体用PmeⅠ酶切线性化,与AdEasy-BJ5183感受态细胞进行基因同源重组.将重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,转染到HEK293细胞中进行包裹,根据增强绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达判断重组腺病毒的包装情况.通过反复离心和低温裂解细胞提取GRP78重组表达腺病毒.以人肝癌HepG2细胞为目标,进行病毒感染.通过qRT-PCR检测GRP78基因表达情况,使用Western blot检测GRP78蛋白的表达.后感染HepG2细胞,通过MTS比色法检测重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖的影响.结果:测序验证pAdTrack-TO4-GRP78构建成功,酶切验证重组腺病毒载体pAd-GRP78构建成功.在HEK293细胞中将pAd-GRP78包裹,GPF荧光检测结果表示病毒包装成功.使用pAd-GRP78感染人肝癌HepG2细胞,qRT-PCR检测到细胞中GRP78基因的过表达,Western blot方法检测到GRP78蛋白的高表达.MTS检测结果显示重组表达GRP78腺病毒对HepG2肝癌细胞有促增殖作用.结论:实验成功构建了GRP78重组表达腺病毒,并验证了构建的腺病毒载体可以收集并感染HepG2细胞表达GRP78蛋白.证明了重组表达GRP78腺病毒能够促进肝癌细胞的增殖.为进一步研究GRP78的功能奠定了基础.
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五种燃煤PM2.5对EA.hy926血管内皮细胞毒性研究
目的 采用MTS法评价五种燃煤PM2.5对血管内皮细胞EA.hy926的细胞毒性.方法 以织金散煤、京西散煤、银川散煤、大同散煤及东胜散煤五种煤为样煤,测定五种煤的挥发分产率,在实验室采用固定源稀释通道采集燃煤PM2.5,分别对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,采用MTS法检测五种燃煤PM2.5对EA.hy926细胞增殖的影响,并对五种燃煤的PM2.5排放因子进行探索性分析.结果 五种燃煤PM2.5均可抑制血管内皮细胞增殖,且相同剂量条件下,五种燃煤PM2.5对EA.hy926细胞的细胞毒性大小具有银川=东胜＞大同＞织金＞京西的趋势,但差异无统计学意义,且五种燃煤PM2.5排放因子具有基本一致的趋势.结论 煤种虽然来自不同地域,挥发分也不相同,但其对血管内皮细胞的毒性无差异性,提示改善燃煤释放PM2.5对健康效应影响,必须采取改变能源消耗结构和降低燃煤用量等相关措施.
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测定淋巴细胞增殖的MTS和XTT比色法的建立
目的建立用新型四唑氮盐MTS和XTT做比色分析测定淋巴细胞增殖效应的方法.方法分别用MTS、XTT结合PMS,对小鼠脾淋巴细胞密度和增殖进行比色测定,选择佳实验条件,并将这两种方法与3H-TdR掺入法和MTT法比较.结果用MTS和XTT比色分析法测定小鼠脾淋巴细胞的增殖,在0.5～4×109/L的范围内,所获光吸收(A)值与细胞密度呈良好的相关性.佳细胞密度为2×109/L,佳反应时间为6 h,佳PMS的终浓度为1×10-4mol/L.两种比色法与3H-TdR掺入法的结果相一致,且两种新方法较MTT法灵敏.结论 MTS和XTT比色分析法可代替3H-TdR掺入法和MTT法,用于测定淋巴细胞的增殖效应.
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MTS/PMS用于超氧化物歧化酶总活性检测的实验探讨
将MTS/PMS显色系统用于人红细胞超氧化歧化酶总活力测定.在固定的实验条件下,检测待检样品在500 nm处的吸光度值,然后查SOD标准曲线得SOD实测值并通过换算[SOD(U·gHb-1·ml-1)＝50×实测值÷36.8÷AHiCN]求得样品中的SOD总活力.该法具有简便、快速、重现性好(批内CV3.36%,批间CV4.31%)等特点.100名正常人的红细胞SOD总活力为91.3±17.8U·gHb-1·ml-1.
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MTS/PMS比色法测定血清黄嘌呤氧化酶
建立了测定黄嘌呤氧化酶的MTS/PMS还原法.用黄嘌呤作为底物,酶促反应过程中生成的超氧离子将MTS还原成呈色的甲,生成的甲为水溶性,在490～580 nm间有一平坦的吸收峰,其ε500为2.738×104.该方法具有良好的重复性(XOD:2.38 u/L,CV4.31%;XOD30.8 u/L,CV2.81%)和线性.参考值为1.024±0.82 u/L.
