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Nrf2在不同肝癌细胞株中的表达及定位
目的:观察红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721)中的表达及分布情况.方法:应用流式细胞术测定Nrf2阳性细胞的比例,激光共聚焦观察Nrf2在3种细胞株中的定位情况,通过Wostern blot测定Nrf2在不同细胞胞质及胞核中的表达差异.结果:流式细胞术测定Nd2在HepG2、Hep3B和SMMC-77213种细胞中表达率分别为99.39%、99.94%和99.98%,激光共聚焦观察到Nd2在3种肝癌细胞株胞质胞核中均有分布,但不同细胞的分布规律各不相同,Western blot结果显示:Nrf2在HepG2中以胞质分布为主,在Hep3B中胞质、胞核分布相当,在SMMC-7721中以胞核分布为主.结论:Nrf2在3种肝癌细胞株(HeqG2、Hep3B、SMMC-7721)中均有表达,且在胞质胞核中均有分布,但在不同细胞中的分布规律各不相同,为下一步探讨肝癌细胞耐药机制的相关研究奠定了基础.
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Nrf2在食管鳞癌组织中的表达及意义
目的:探讨Nrf2(Nuclear factor E2 p45-related factor 2)在食管鳞癌组织中的表达及其与临床病理学特征的关系.方法:采用免疫组化SP法检测Nrf2在32例食管鳞癌,30例癌旁组织,21个阳性淋巴结和24个阴性淋巴结组织中的表达.结果:Nrf2阳性表达主要定位于细胞核中,在食管鳞癌中的阳性表达率为78.13％,显著高于癌旁组织(13.33％),淋巴结癌转移阳性组织中的表达率(66.67％)也显著高于淋巴结癌转移阴性组织中的表达水平(20.83％),均具有统计学意义(P＜0.05).Nrf2的阳性表达随淋巴结的转移度的增加而表达增加(P＜0.05),但在不同年龄、性别、TNM分期、肿瘤分化程度及不同部位之间差异无统计学意义.结论:Nrf2在食管鳞癌中高表达,表达的高低与淋巴结转移与否及转移度有关.
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左卡尼汀对肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用及其机制
目的 研究左卡尼汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用并探讨其机制.方法 将大鼠随机分为3组:对照组(C组),缺血再灌注组 (IR组),左卡尼汀组(LC组).C组不予缺血再灌注处理,IR组及LC组建立肾脏IR模型.再灌注6 h后检测各组血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;测定肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-PCR检测肾组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA含量;Western-blot检测各组肾组织Nrf2及HO-1蛋白表达水平.结果 LC组血清Cr、BUN水平低于IR组[ (74.17±12.80) μmol/L、(24.28±2.58)mmol/L vs.(112.83±17.45)μmol/L、(35.13±6.01)mmol/L],差异具有统计学意义(P<0.01).LC组肾组织SOD活性高于IR组[(39.55±6.61)kU/g vs.(28.05±4.37)kU/g],差异具有统计学意义(P<0.01);MDA显著降低于IR组[(4.15±0.69)μmol/g vs.(6.12±1.08)μmol/g],差异具有统计学意义(P<0.01).IR组Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达水平高于C组(P<0.01),低于LC组(P<0.01).结论 左卡尼汀对肾脏缺血再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能为激活Keapl-Nrf2-ARE通路进而诱导HO-1的表达.
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丹参酮Ⅰ通过激活Nrf2-ARE通路阻抑放射性膀胱炎早期损伤的形成
目的 验证丹参酮Ⅰ(T-1)是否通过Nrf2-ARE通路的激活阻抑膀胱接受射线后早期放射性损伤的形成.方法 将人永生化尿路上皮细胞(SV-HUC-1)分为对照组(Control),T-1处理组(T-1),X-射线照射组(X-ray),T-1治疗组(X-ray+ T-1).使用cck-8试剂盒及DCFH-DA活性氧试剂盒比较各组细胞损伤情况.通过Western-Blot法测定各组细胞总蛋白中Nrf2-ARE信号通路的变化.雌性6周龄美国费城癌症研究所小鼠(ICR小鼠)被随机分为对照组(Control),T-1处理组(T-1),X-射线照射组(X-ray),T-1治疗组(X-ray+T-1).每组小鼠预处理10 d后实验组予以盆腔放射.照射3d及1周后比较各组膀胱组织Nrf2-ARE信号通路蛋白表达量.测量膀胱黏膜厚度及组织内SOD变化水平.结果 在体外实验中,T-I治疗组与X-射线照射组对比,细胞活力较高同时活性氧水平较低(P＜0.05).T-1治疗组中Nrf2 ARE信号通路相关蛋白表达量高于X-射线处理组(P＜0.05).在体内实验中T-1治疗组与x-射线照射组相比,膀胱黏膜厚度更小同时SOD水平较高(P＜0.05).T-1治疗组总蛋白中Nrf2-ARE信号通路相关蛋白表达量高于X-射线处理组.结论 T-1对于放射性膀胱损伤具有保护作用,Nrf2信号通路的激活在其中可能发挥了重要作用.
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富马酸二甲酯对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制
目的 探讨富马酸二甲酯(DMF)在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用及可能的机制.方法 将小鼠随机分成3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和DMF预处理组(DMF组).IR组及DMF组制备肾脏IR模型,再灌注24 h后收集血清及肾组织,测定血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)值;评定肾脏组织形态学改变;检测肾脏组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western-blot检测各组肾组织内核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白含量.结果 IR组SCr及BUN显著高于S组[(143.17±14.18) μmol/L,(26.52±3.56)mmol/L vs.(24.50±5.54》 μmol/L,(8.25±2.14) mmol/L,P＜0.01];DMF组SCr及BUN均低于IR组[(81.83±9.39)μmol/L,(18.62±2.75)mmol/L vs.(143.17±14.18)μmol/L,(26.52±3.56)mmol/L](P＜0.01);和IR组比较,DMF组的组织形态学损伤较轻(P＜0.01);DMF组过氧化损伤指标MDA水平低于IR组[(3.55±o.48)μmol/g vs.(5.48±0.70)μmol/g] (P＜0.01),而抗氧化酶SOD水平高于IR组[(35.02±4.13)kU/g vs.(23.80±4.36)kU/g] (P＜0.01).Western-blot及免疫组化结果显示DMF组Nrf2和HO-1蛋白表达水平高于IR组(P＜0.05).结论 DMF对小鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路进而提高肾脏抗氧化应激能力有关.
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Keap1/Nrf2/ARE 信号通路介导非小细胞肺癌耐药机制的研究进展
近十年来，非小细胞肺癌基础及其转化性研究，从癌细胞驱动基因筛选及其靶向干预方面的研究，到肿瘤细胞微环境研究，正逐渐改变传统理念，也成为非小细胞肺癌研究活跃的领域。组织缺氧与抗氧化系统是影响肿瘤微环境、改变肿瘤细胞药物敏感性的重要机制之一。Keap1/ Nrf2/ ARE 信号转导通路是机体重要的抗氧化应激系统之一。近年来，越来越多研究表明，Keap1/ Nrf2/ ARE 信号通路与肿瘤细胞耐药有着密切的关系，调控该通路关键激酶磷酸化过程有望成为新的耐药干预靶点。
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原发性胆囊癌中Nrf2的表达及意义
目的:探讨nuclear factor-erythroid 2 p45-related factor 2(Nrf2)在原发性胆囊癌中的表达及其与病理指标的关系.方法:应用免疫组化SP法检测59例原发性胆囊癌中Nrf2的表达.结果:Nrf2呈散在分布的淡黄色或棕褐色颗粒,主要定位于细胞核中,散见于细胞浆中,强阳性表达率分别为72.8%.随着转移程度、Nevin 分级以及病理分级的增加,强阳性表达率增加,且具有统计学差异(P<0.05).Nrf2表达与性别、年龄相关性不明显(P>0.05).结论:Nrf2的高表达参与了原发性胆囊的发生发展,Nrf2与原发性胆囊癌的分化、转移有关.
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NRF2/HO-1因子与结直肠肿瘤TNM分期的相关性研究
目的：：检测NRF2、血红素氧合酶-1(heme oxygenase,HO-1)在结直肠癌、转移淋巴结及肝脏转移灶中的表达情况,探讨它们在结直肠肿瘤发生发展及转移( TNM分期)中的作用。方法：采用免疫组化的方法检测84例结直肠癌、6例结直肠炎性息肉、10例正常肝脏组织的石蜡标本中的NRF2、HO-1因子表达情况,使用图像分析系统测定阳性细胞平均光密度值。结果：根据NRF2/HO-1因子在肠癌中的表达情况得出散点图的Pearson 相关性=0.876,提示两因子显著相关；结直肠癌组织NRF2/HO-1的平均光密度值高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；结直肠癌组织NRF2/HO-1的平均光密度值随着临床病理分期程度和病理分化程度的提高而升高(P<0.05)；在结直肠组织及转移淋巴结中NRF2/HO-1的平均光密度值都按照N分期(N1-N2)逐渐递增(P<0.05)；在肝脏转移灶中NRF2/HO-1的平均光密度值高于正常肝脏组织(P<0.05)；NRF2/HO-1的平均光密度值与年龄、性别、T分期无关。结论：NRF2/HO-1在结直肠癌、转移淋巴结及肝脏转移灶中呈现高表达,可能与结直肠恶性肿瘤发生发展存在关系,是判断结直肠癌的发生、发展及预后的有效指标。
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天麻素调控Nrf2信号通路在癫痫中的抗炎作用
目的:探讨天麻素调控nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)信号通路在癫痫中的抗炎作用及发挥神经保护作用的新机制.方法:100只SD大鼠,随机分为5组:空白对照组,模型组,50 mg/kg天麻素治疗组,100 mg/kg天麻素治疗组,200 mg/kg天麻素治疗组.模型组构建氯化锂-匹罗卡品SD大鼠癫痫模型,治疗组采用天麻素进行干预.Racine分级标准判断模型是否构建成功,免疫印迹法及免疫荧光染色的方法检测Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达含量.结果:与空白对照组相比,模型组小胶质细胞中抗氧化蛋白Nrf2和HO-1表达略有上调,炎症因子iNOS表达显著增加;经天麻素预处理的治疗组小胶质细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达较模型组增加,而炎症因子iNOS的表达减少.结论:天麻素可能通过调控Nrf2/HO-1经典抗氧化信号通路,降低炎症因子iNOS的表达,从而在癫痫中发挥神经保护作用.
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高压氧对模型大鼠颅脑损伤CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2影响的研究
目的:研究高压氧对模型大鼠颅脑损伤过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的影响.方法:健康SD大鼠30只,体重250～ 300 g,4～5月龄,随机分为3组:假手术组、模型组和高压氧组,每组10只,参照Feeney自由落体冲击造模法建立颅脑损伤大鼠模型.假手术组只给予手术,不造成颅脑损伤;模型组和高压氧组给予颅脑损伤处理;高压氧组用高压氧治疗,1次/d,10 d.用ELISA法检测脑组织CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2含量,采用实时荧光定量PCR检测脑组织CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2 mRNA相对表达量,用Western Blot测定脑组织Nrf2胞质蛋白和Nrf2核蛋白.结果:假手术组、模型组、高压氧组之间的CAT、SOD、GSH-Px、Nrf2 mRNA水平均有差异(P＜0.05).模型组脑组织CAT、SOD、GSH-Px、Nrf2 mRNA水平低于假手术组(P＜0.05),而高压氧组则高于模型组(P＜0.05).假手术组、模型组、高压氧组之间的脑组织CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2核蛋白水平存在差异(P＜0.05),模型组低于假手术组(P＜0.05),高压氧组高于模型组(P＜0.05).Western Blot检测显示:与假手术组比较,模型组和高压氧组脑组织细胞质(核)中Nrf2蛋白表达量有明显升高(P＜0.05),高压氧组升高更明显(P＜0.05).结论:高压氧对模型大鼠颅脑损伤CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2表达具有调节作用,通过这些调节改善机体氧化性损伤.
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红景天苷通过Nrf2/HO-1通路减轻6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤
目的:研究红景天苷(salidroside,Sal)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制.方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测SH-SY5Y细胞活性,CM-H2DCFDA染色检测活性氧(ROS);Western Blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)与血红素氧合酶-1(HO-1)的蛋白表达;结果:与对照组比较,6-OHDA(150 μmol/L)处理SH-SY5Y 24 h后,细胞存活率降低至44.1％±4.6％(P＜0.05),ROS水平增加;红景天苷(25,50 μmol/L)预处理24h后,与6-OHDA组比较,细胞存活率分别增加至68.3％±4.1％(P＜0.05)和80.0％±6.2％(P＜0.01)同时ROS减少.此外,6-OHDA(150μmol/L)可使细胞内Nrf2与HO-1的蛋白表达减少,红景天苷预处理24 h后,Nrf2与HO-1的蛋白表达依次增加.结论:Sal能减少细胞内ROS的水平,对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关.
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Nrf2/HO-1在肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中的表达变化
目的:检测不同疾病阶段肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠脊髓内Nrf2及HO-1表达变化,以探究抗氧化应激能力变化与ALS发病的关系.方法:应用免疫荧光双重标记和Western Blot技术检测Nrf2及其下游调节蛋白HO-1在ALS发病早期(95 d)、发病晚期(122 d)脊髓中的表达差异.结果:与同窝别野生型鼠相比较,免疫荧光双重标记结果显示:95 d、122 d ALS鼠脊髓腰段内Nrf2+ /GFAP+星形胶质细胞增多;虽与同时间点同窝别野生型鼠比较,ALS转基因鼠脊髓中Nrf2蛋白表达略有升高,但差异无统计学意义.HO-1蛋白表达在ALS早期95 d趋势与Nrf2相同,前角神经元内表达较多;至122 d转基因鼠脊髓内HO-1+表达多集中于星形胶质细胞内,且脊髓内HO-1蛋白总量较同窝别野生型鼠显著升高(P＜0.05).结论:ALS运动神经元退变可能与星形胶质细胞激活后Nrf2及HO-1参与的氧化应激机制有关.
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红景天苷通过激活Nrf2减轻MPP+诱导的PC12细胞凋亡
目的:研究红景天苷(对-羟基苯乙基-β-葡萄糖,p-hydroxyphenethyl-b-D-glucoside,Salidroside,SAL)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methy-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导PC12细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测PC12细胞活性;Hochest 33258染色,观察细胞凋亡的变化;Western blot检测核因子2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 p45,related factor 2,Nrf2)蛋白的表达情况.结果:MPP+(500 μmol/L)作用于PC12细胞24 h后,与正常组比较,细胞存活率降低(53.3％±3.4％,P＜0.01);细胞内染色质固缩,呈致密浓染.SAL(10,100μmol/L)预处理24 h后,细胞存活率增加(60.8±1.9)％和(87.1±1.8)％(P＜0.01);细胞核固缩明显减少,且具有剂量依赖性关系.此外,MPP+可使PC12细胞中Nrf2蛋白表达减少,而SAL预处理后,PC12细胞中Nrf2蛋白表达水平明显升高.结论:SAL对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能与促进Nrf2蛋白的激活有关.
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紫檀芪对长波紫外线辐射所致人成纤维细胞急性光损伤的保护作用
目的 探讨紫檀芪(pterostilbene)对长波紫外线(UVA)辐射所致的人成纤维细胞急性损伤的保护作用,初步分析其分子机制.方法 TTI法测定紫檀芪对人皮肤成纤维细胞活力的影响,紫檀芪与人皮肤成纤维细胞共培养24h后,以20J/cm2的UVA剂量进行照射,然后采用乳酸脱氢酶释放法测定细胞活力,DCFH-DA测定胞内活性氧(cellular reactive oxygen species,ROS)水平,彗星实验检测DNA损伤,Western印迹检测核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白细胞定位以及siRNA沉默Nrf2.结果 与对照相比,UVA照射后乳酸脱氢酶相对释放率增加为164.53％(P＜0.001).而UVA照射前4μmol/L和8 μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则细胞乳酸脱氢酶相对释放率分别恢复到对照组的100.11％ (P ＞0.05)和98.69％ (P ＞0.05).流式细胞术分析显示,经UVA辐照后,其ROS水平上升至对照细胞的264.4％(P＜0.001),UVA照射前4μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则活性氧(ROS)水平恢复至对照细胞的113.50％ (P＜0.05).彗星实验结果显示,空白对照组细胞的尾部DNA百分比为(1.795±2.147)％,UVA辐照组为(65.50±12.418)％,与空白对照组相比DNA损伤显著增加(t =40.68,P＜0.000 1);而紫檀芪预处理后再接受UVA辐照组为(13.53±8.152)％,与UVA辐照组相比其DNA损伤显著减轻(t=27.85,P＜0.000 1).紫檀芪处理提高了细胞核中的Nrf2蛋白水平.转染siRNA-Nrf2后,细胞活性与对照细胞差异无统计学意义(P＞0.05),但经UVA照射,紫檀芪的预处理细胞活性为对照组的35.32％ (P ＜0.000 1),紫檀芪的保护作用显著降低.结论 紫檀芪能有效防御UVA所致成纤维细胞急性光损伤.这种保护作用可能与紫檀芪激活Nrf2信号通路相关.
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Nrf2对体外三维皮肤光损伤模型的作用
目的 探讨核转录相关因子E2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)对体外三维(threedimensional,3D)皮肤光损伤模型的保护作用,为光损伤发病机制及治疗途径提供实验依据.方法 取儿童包皮分离、培养原代角质形成细胞(keratinocytes,KC)和成纤维细胞(fibroblasts,FBs).以Ⅰ型胶原为基质混合包埋FBs,接种KC以构建正常体外3D皮肤模型.然后将3D皮肤模型分为3组:正常组、实验组和对照组.其中实验组在接种KC前,通过慢病毒转染方式使KC过表达Nrf2,再行3D皮肤模型的构建.除正常组外,实验组和对照组均予以UVA和UVB混合单剂量照射,照射后继续进行培养.24h后观察各组皮肤病理组织学改变、细胞凋亡情况及Nrf2,SOD,MDA等氧化应激相关指标的变化.结果 正常3D皮肤呈乳白色皮肤类似物.组织病理学上表皮结构清晰,细胞排列整齐,核大圆深染;真皮为淡紫红色胶原基质,FBs散在分布;凋亡细胞少见.UV照射后,对照组表皮细胞排列紊乱、部分肿胀坏死,核浓缩,真皮胶原降解和FBs减少;凋亡细胞明显增加(P＜0.05);Nrf2,SOD,GSH和CAT表达水平显著降低(P＜0.05),而MDA和ROS水平明显升高(P＜0.05).但经过表达Nrf2后,实验组细胞整齐清晰,核无明显浓缩,KC轻度肿胀,FBs轻微减少,凋亡细胞显著减少(P＜0.05);Nrf2,SOD,GSH和CAT水平升高(P＜0.05),MDA和ROS降低(P＜0.05).结论 体外构建的3D皮肤光损伤模型接近人皮肤光损伤,可作为一理想的光损伤模型进行推广;KC过表达Nrf2可减轻UV对体外3D皮肤的损伤.
关键词： 皮肤光损伤 体外三维(3D)皮肤模型 Nrf2 氧化应激 紫外线 -
枸杞多糖对紫外线辐射HaCaT细胞急性损伤中Nrf2/Bach1通路的影响
目的 探讨转录因子Nrf2/Bach1在枸杞多糖(LBP)防御紫外线(UV)致HaCaT细胞光损伤的作用.方法 体外培养的HaCaT细胞经300 μg/Ml LBP预处理24h后,分别接受30 J/cm2 UVA及300ml/cm2UVB照射,孵育24h.以噻唑蓝(MTT法)检测细胞增殖活性;尼罗红荧光染色法检测过氧化脂质含量;采用单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤;RT-Qpcr法检测Nrf2和Bach1 Mrna及下游Ⅱ相解毒酶基因的表达,Western blot法检测Nrf2及Bach1蛋白在细胞内分布及表达情况.结果 强度为30 J/cm2 UVA及300 Mj/cm2 UVB均可造成HaCaT细胞增殖能力下降,过氧化脂质含量及DNA荧光强度、迁移距离增加,与空白组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);300 μg/Ml LBP预处理可显著提高细胞增殖活性,降低过氧化脂质水平,减轻DNA链断裂损伤,且增加Nrf2核蛋白及Bach1质蛋白的量,促进Nrf2 Mrna及下游Ⅱ相解毒酶SOD,CAT,NQO1,GCLC,GCLM Mrna的表达,抑制Bach1 Mrna的表达(均P ＜0.05).结论 枸杞多糖可有效减轻UV诱导的HaCaT细胞氧化损伤,其机制可能是通过激活Nrf2/Bach1转位及下游Ⅱ相解毒酶基因的表达,发挥光防护作用.
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氧化应激、Nrf2和HO-1在白塞病中的表达及相关性分析
目的 探讨白塞病(Beh(c)et's disease,BD)患者氧化应激、转录因子NF-E2相关因子(NF-E2-related factor 2,Nrf2)和HO-1的表达情况及Nrf2,HO-1与BD的相关性.方法 将38例BD患者分为活动期BD组和非活动期(稳定期)BD组,正常组以20例健康人为对照.分别对BD两组患者进行病情评分,采用常规法检测血中ESR和CRP水平、ELISA法检测Nrf2,HO-1和ROS的表达以及化学比色法检测MDA,T-AOC,SOD和GSH的含量.结果 活动期BD组病情评分显著高于非活动期BD组(P＜0.01);活动期BD组ESR和CRP水平均较非活动期BD和正常组明显升高(P均＜0.01).与正常组比较,BD两组血清ROS和MDA水平均明显升高(P＜0.05),T-AOC,SOD和GSH水平均显著下降(P＜0.05);而活动期BD组较非活动期BD组表达ROS,MDA,T-AOC,SOD和GSH差异明显(P＜0.05).活动期BD组Nrf2和HO-1水平较非活动期BD组和正常组下降(P＜0.05),与病情评分、ESR和CRP呈负相关(P＜0.05),尤以Nrf2与病情评分和CRP相关性强(P＜0.01).结论 BD存在氧化应激异常;在活动期Nrf2和HO-1下降,并随着病情加重而降低;Nrf2的下降可能与BD的发展和加重密切相关.
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细胞凋亡与Nrf2信号通路研究进展
核转录因子Nrf2信号通路是调控细胞对抗外来异物和氧化损伤的关键通路,已经明确其在细胞凋亡中发挥十分重要的作用.本文从Nrf2信号通路对细胞凋亡的保护作用、与凋亡相关蛋白之间的相互作用、以及促进肿瘤细胞凋亡和增强肿瘤细胞耐药性的双重作用等方面,就细胞凋亡与Nrf2信号通路关系的相关研究进展进行综述.
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Nrf2信号通路及其分子调控机制
核因子Nrf2信号通路是目前发现的抵御外源性刺激和毒物的抗氧化应答反应的核心转录因子.胞质抑制蛋白Keap1、多种蛋白激酶介导的磷酸化、以及新近认识的胞核抑制因子Bach1等均参与Nrf2信号通路的调控.对该通路的调控很可能与多种生理功能、病理改变、疾病以及癌症等密切关联.
关键词： Nrf2 氧化应激 抗氧化反应元件(ARE) -
抑制Keap1基因对染砷HaCaT细胞蛋白底物的影响
目的 探讨抑制Keap1基因对染砷人永生化皮肤角质(HaCaT)细胞砷蛋白底物的影响.方法 将人源性正常HaCaT细胞作为实验的空白对照组,Keap1抑制HaCaT细胞作为染毒组和阴性对照组,培养8、24、48、72h,对染毒组给予无机砷混合物进行染毒,分为高、中、低浓度组,各浓度组的染毒浓度为LC50的1/10(29μmol/L)、1/50(5.8μmol/L)和1/100(2.9μmol/L);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测砷处理细胞内同型半胱氨酸(HCY)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)、三价砷甲基转移酶(As3MT)N-6-腺嘌呤DNA甲基转移酶1(N6AMT1的蛋白含量.结果 染砷8h,与阴性对照组比较,空白对照组、高浓度组SAM蛋白表达下调,低、中浓度组表达上调;低、中浓度组HCY蛋白表达上调,AS3MT蛋白在空白对照组、低浓度组表达上调,N6AMT1蛋白在空白对照组下调,低、中浓度组表达上调(P<0.0125).染砷24h,与阴性对照组比较,As3MT蛋白在低、中、高3个浓度组表达上调,SAM蛋白在空白对照组表达下调,低浓度组表达上调,高浓度组表达下调,HCY在空白对照组、低浓度组表达上调(P<0.0125).染砷48h,与阴性对照组比较,SAM、HCY的蛋白在低、中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在中浓度组表达上调,高浓度组表达下调(P<0.0125).染砷72h,与阴性对照组比较,SAM蛋白在空白组和高浓度组表达下调,低浓度组表达上调,AS3MT的蛋白在空白对照组、低和中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在空白对照组、高浓度组表达下调,在高浓度组SAM、As3MT、N6AMT1蛋白表达均下调(P<0.0125).结论 SAM和HCY蛋白表达在砷甲基代谢中表达有一致性;砷甲基化代谢中N6AMT1与AS3MT共同作用,其中N6AMT1起辅助作用;在高浓度、长时间的砷暴露中造成蛋白底物的耗竭,砷代谢发生障碍.
