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老年大鼠腹部手术后认知功能障碍海马中NRF2、γ-GCS、IL-6和TNF-α的表达及黄腐酚对其的影响
目的 老年大鼠腹部手术后认知功能障碍海马中核转录因子E2相关因子2(NRF2)、γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达及黄腐酚对其的影响.方法 将45只SD大鼠随机分为对照组(未行手术)、手术组(行腹部手术)和黄腐酚组(行腹部手术+注射黄腐酚).黄腐酚组大鼠于术前1h,术后6h、第2天、第3天每日腹腔注射1 mg/kg的黄腐酚.各取5只大鼠,术前1天和术后第3天、第7天进行Morris水迷宫测试来检测各组大鼠认知能力.迷宫实验结束后,HE染色观察海马神经元密度,RT-PCR检测海马组织中NRF2和γ-GCS的mRNA,ELISA法检测IL-16和TNF-d的含量.结果 术前第1天,对照组、手术组和黄腐酚组大鼠的逃逸潜伏期和穿越平台次数均无统计学意义(P＞0.05);术后第3天和7天,手术组和黄腐酚组大鼠的认知能力低于对照组,而黄腐酚组大鼠的认知能力高于手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第7天,手术组神经元密度较对照组显著降低(P＜0.05),黄腐酚组与对照组间差异不明显(P＞0.05),且黄腐酚组高于手术组.与对照组相比,手术组和黄腐酚组中NRF2和γ-GCS mRNA均显著升高(P＜0.05),且黄腐酚组高于手术组;同时,海马中IL-6和TNF-α含量较对照组均明显升高(P＜0.05),而给予黄腐酚的海马中IL-6和TNF-α含量明显降低,与手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 黄腐酚能够改善脾脏切除术后大鼠的认知功能障碍,其作用机制可能与上调NRF2、γ-GCS和下调IL-6、TNF-α表达有关.
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WWOX抑癌基因和Nrf2转录因子在胆囊癌组织中的表达及相关性研究
[目的]研究WWOX抑癌基因和Nrf2转录因子在原发性胆囊癌(PGC)组织中的表达及其与临床病理的关系,以及WWOX和Nrf2表达的相关性.[方法]收集胆囊癌标本54例、胆囊腺瘤标本20例、慢性胆囊炎标本20例.应用免疫组织化学方法检测WWOX蛋白和Nrf2蛋白的表达情况,同时收集胆囊癌患者的临床病理资料,并将结果进行分析.[结果](1)WWOX蛋白在胆囊癌、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组织中阳性表达率分别为48.1％ (26/54)、75.0％ (15/20)和85.0％(17/20),差异有统计学意义(P＜0.01).WWOX蛋白阳性表达与病理学分级(P＜0.01)、Nevin分期(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.01)有关.(2)Nrf2蛋白在胆囊癌、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组的阳性表达率分别为66.7％ (36/54)、20.0％ (4/20)及5.0％(1/20),差异有统计学意义(P＜0.01).Nrf2蛋白阳性表达水平与病理学分级(P＜0.05)、Nevin分期(P＜0.01)、淋巴结 转移(P＜0.01)有关.(3)WWOX阳性表达与Nrf2阳性表达均与患者的性别、年龄、病理类型及是否伴有结石无显著关系(P＞0.05).(4) WWOX阳性表达与Nrf2阳性表达呈负相关(r=-0.420,p＜0.01).[结论]WWOX和Nrf2表达可能是反映胆囊癌发生、进展、生物学行为和预后的重要生物学标记物；WWOX和Nrf2蛋白在胆囊癌中的表达呈明显的相关性,可能在胆囊癌的发生中起协同作用.
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沉默信息调节因子2相关酶类1/核因子E2相关因子2信号通路在高血压病中的抗氧化应激作用
氧化应激在高血压的发生发展中起着重要作用.核因子E2相关因子2(Nrf2)属于转录因子cap'n'collar(CNC)家族成员,广泛存在于机体各个器官,是细胞氧化应激反应中的关键因子和中枢调节者.沉默信息调节因子2相关酶类1(Sirt1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的第三类组蛋白去乙酰化酶.Sirt1通过活化Nrf2促进抗氧化基因的表达,在预防和治疗高血压中发挥重要作用.现就Sirt1/Nrf2抗氧化应激在高血压中的保护作用予以综述.
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激活转录因子4协同核因子相关因子-2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基的表达对支气管哮喘豚鼠的影响
支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病.氧化应激在诱导气道炎症及其发展中起关键作用.核因子相关因子-2( NF-E2-related factor 2,Nrf2)是一种对氧化还原敏感的转录因子,调节肺部几乎所有相关抗氧化基因,如γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(γ-glutamylcysteine synthetase catalytic subunit,γ-GCSc),发挥重要的抗氧化作用[1].激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)属于具有碱性亮氨酸拉链结构(basic leucine zipper,bZIP)的cAMP反应元件结合蛋白(CAMP-responsive element binding protein,CREB)家族中的转录因子.氧化应激时,ATF4能与Nrf2结合形成异二聚体,调控Nrf2及其靶基因γ-GCSc表达[2].本研究中通过观察哮喘急性发作期豚鼠肺组织中ATF4、Nrf2、γ-GCSc的表达变化,探讨其在哮喘发病及防治中的作用.
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NRF2-617C/A基因多态性对内毒素刺激下酒精性肝病患者外周血单个核细胞炎症反应的影响
目的 探讨NRF2基因启动子-617C/A多态性对内毒素(LPS)刺激下酒精性肝病(ALD)患者外周血单个核细胞(PBMC)炎症反应的影响.方法 应用Ficoll密度梯度离心法分离82例ALD患者的PBMC,流式细胞仪检测T细胞亚群,同时应用基因测序法检测NRF2基因启动子-617位点的基因多态性,并根据基因测序的结果,将患者分为非突变组(CA和AA)和突变组(CC),以逆转录PCR (RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测LPS刺激下PBMC中NRF2、肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1p、1L-10的表达水平.结果 82例患者NRF2-617位点C和A的频率分别为65.9％和34.1％,其中50例(CA:44例；AA:6例)存在突变,32例为非突变(CC).突变与非突变组间比较肝功能、T细胞亚群分布等临床资料差异无统计学意义(P＞0.05).但LPS刺激后,突变组PBMC中NRF2 mRNA表达明显低于非突变组(P＜0.05),而TNFα、IL-1β的mRNA及蛋白表达均明显高于非突变组(P＜0.05),IL-10 mRNA及蛋白表达虽高于后者,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NRF2基因启动子-617位点C→A突变下调LPS刺激后ALD患者PBMC中NRF2的表达,并加剧促炎反应.
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Nrf2/ARE在化学防癌机制中的作用
化学致癌过程是涉及启动、促进和进展等多阶段的复杂过程.癌症的化学预防是应用天然的或合成的化学物质,以阻断、抑制或其癌变过程, 从而达到预防肿瘤的目的.化学致癌物的体内生物转化依靠肝脏的Ⅰ相和Ⅱ相代谢相酶来完成.作为对化学预防剂的应答反应,碱性亮氨酸拉链蛋白家族成员转录因子Nrf2首先从胞质蛋白Keap1上解离,然后发生核内转位,与Ⅱ相代谢酶基因上游的抗氧化反应元件结合诱导Ⅱ相代谢酶基因的表达,这是化学防癌的重要机制;Nrf2/ARE对Ⅱ相代谢酶的调节涉及PI3K、MAPK、PKC等细胞内重要信号传导途径.这些发现加深了化学防癌机制的认识并为评估潜在抗癌物质提供了新的策略.
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Nrf2对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的观察
目的:红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用.方法:选取一系列人甲状腺未分化癌细胞系FRO、KTC1、KTC2、KTC3、8305C和8505C,分别设空白对照组和万珂处理组；蛋白质印迹法检测甲状腺癌细胞中Nrf2蛋白表达情况；共聚焦显微镜检测Nrf2甲状腺癌细胞核定位;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况.结果:与FRO和KTC2细胞相比,Nrf2在人甲状腺癌细胞系8505C和8305C细胞中基础水平呈现高表达,万珂诱导后的表达增加更高,但对万珂诱导的细胞凋亡表现出不敏感,4种细胞的细胞凋亡率分别为(51.98±3.01)％、(46.92±2.72)％、(17.33±4.18)％和(7.97±1.01)％；万珂可诱导8505C和8305C细胞中的Nrf2细胞核易位.结论:Nrf2抑制蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡,其抗凋亡作用可能源于蛋白酶体抑制剂诱导其细胞核转位.
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siNrf2对万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响及其机制的探讨
目的:明确Nrf2对蛋白酶体抑制剂万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用途径.方法:选取Nrf2高表达的8305C细胞,用微小RNA干扰技术转染细胞,采用实时定量PCR法和蛋白质印迹法分析封闭效果,而细胞内GCLCmRNA的表达、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量和细胞凋亡率,分别由实时定量PCR法、比色法和流式细胞仪法测得.并测定siNrf2对万珂诱导其他甲状腺癌细胞凋亡的影响.结果:与对照组相比,siNrf2组在培养液和万珂处理中Nrf2mRNA和蛋白都显著减少,P＜0.01；随机序列核酸siRNA和错位型siNrf2差异无统计学意义,P＞0.05.与对照组相比,siNrf2能够增加万珂诱导8305C、8505C、KTC1和KTC3的细胞凋亡率,差异均有统计学意义,P＜0.01；FRO和KTC2的细胞凋亡率差异无统计学意义,P＞0.05.与随机序列核酸siRNA组相比,空白对照组中siNrf2转染组GCLCmRNA及GSH减少,P＜0.05；万珂处理组中siNrf2转染组两者减少更显著,P＜0.01.GSH和NAC(GSH的前体并能提高GSH的含量)抑制了siNrf2促万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用.结论:Nrf2抵消万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用,至少部分是通过GCLC转录激活和随后GSH的生成实现的.
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蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的探讨
目的:探讨p38MAPK信号转导通路参与蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用机制.方法:选取甲状腺癌细胞系,利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的三种抑制剂抑制磷酸化途径,利用微小RNA干扰技术转染细胞,封闭p38MAPK.用蛋白质印迹法检测红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)及p38MAPK的表达,实时定量PCR检测细胞内GCLC mRNA的表达,测定还原型谷胱甘肽的含量,流式细胞仪法检测甲状腺癌细胞凋亡率.结果:在甲状腺癌细胞系8305C细胞中,与对照组相比,p38MAPK的抑制剂SB203580和sip38MAPK均能够抑制蛋白酶体抑制剂诱导的Nrf2细胞核易位(P＜0.01),并使随后的GCLC mRNA表达减少、GSH含量减少(P＜0.01),显著提高蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡率(P＜0.01),而其他2种抑制剂和随机序列核酸siRNA无上述作用.结论:蛋白酶体抑制剂通过p38MAPK途径激活Nrf2的细胞核易位,进而导致GCLC的诱导作用和谷胱甘肽生成的连锁反应,成为蛋白酶体抑制剂在甲状腺癌细胞中的一种抗凋亡机制.
关键词： 甲状腺肿瘤/病理学 蛋白酶体抑制剂 p38丝裂原活化蛋白激酶 Nrf2 细胞凋亡 -
Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1过表达抑制肺癌A549细胞的增殖和转移并克服其耐药
目的研究Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（ Keap1）／核转录因子E2相关因子2（ Nrf2）信号通路对肺癌A549细胞生长、转移和耐药的影响。方法利用慢病毒转染体系建立稳定过表达野生型Keap1的A549细胞株模型，采用逆转录聚合酶链反应（ RT?PCR）和Western blot法检测Keap1过表达对A549细胞中Nrf2基因及其靶基因表达的影响。采用黄酰罗丹比色法、流式细胞术、克隆形成实验、Transwell侵袭实验、体外划痕实验等方法研究Keap1过表达对A549细胞生长、转移和耐药的影响。结果 Keap1过表达可引起A549细胞中Nrf2蛋白以及Nrf2靶基因mRNA的表达降低，并使A549细胞的增殖能力和克隆形成能力降低。 Keap1过表达可使 A549细胞阻滞于 G0／G1期，其中A549?Keap1细胞中G0／G1期细胞的比例为（80．2±5．9）％，明显高于A549?GFP 细胞中G0／G1期细胞的比例[（67．1±0．9）％，P＜0．05]。 Keap1过表达可降低A549细胞的迁移和侵袭能力，A549?Keap1细胞的迁移率仅为（35．0±7．1）％，明显低于A549?GFP 细胞的迁移率[（52．5±10．6）％，P＜0．05]；A549?Keap1细胞的侵袭数量为（156．33±17．37）个／高倍视野，明显低于 A549?GFP 细胞的侵袭数量[（306．67±22．19）个／高倍视野，P＜0．05]。过表达Keap1的A549细胞对卡铂和吉西他滨的敏感性增加，其中卡铂对A549?GFP细胞的IC50为（107．8±12．9）μmol／L，对A549?Keap1细胞的IC50为（52．1±3．3）μmol／L，差异有统计学意义（P＜0．01）；吉西他滨对A549?GFP细胞的IC50为（9．9±0．5）μmol／L，对A549?Keap1细胞的IC50为（6．8±1．2）μmol／L，差异亦有统计学意义（P＜0．01）。结论 Keap1过表达影响肺癌A549细胞中Nrf2和下游靶基因的表达，抑制肿瘤细胞的增殖和转移，增加细胞对化疗药物的敏感性。
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Nrf2基因在紫外线氧化应激与光老化中的作用研究进展
皮肤是直接暴露于日光紫外线照射的人类器官,紫外线的照射可导致皮肤的多种损伤,如光老化以及各种皮肤肿瘤.重复的细胞光损伤是导致皮肤光老化的基础.研究发现,紫外线辐射于人体皮肤发生氧化应激反应,产生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)是导致细胞光损伤的主要原因.Nrf2在很多与氧化应激反应相关的病变中均发挥重要的防御保护作用,Nrf2缺失或激活障碍会增加细胞对紫外线辐射的敏感性,而加重细胞的光损伤以及光老化.该文综述了Nrf2基因在光损伤以及光老化中的重要保护作用.
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Nrf2和NF-κB在口腔癌和癌前病变细胞中的表达及意义
目的 探讨Nrf2与NF-κB调控的氧化应激与口腔鳞状细胞癌发生的相关性及其作用机理,为口腔癌治疗寻找新的靶点.方法 采用免疫组化技术检测抗氧化应激反应的重要转录因子Nrf2在口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113、KB及口腔癌前病变细胞株DOK细胞中的表达,同时对应用全基因组表达芯片从Tca8113、KB及DOK细胞中筛选出的与氧化应激相关的差异表达基因GSTπ与NF-κB进行验证.结果 Nrf2、NF-κB、GSTπ在Tca8113、KB及DOK细胞中均有表达,Nrf2在Tca8113和KB细胞胞核中表达增高,NF-κB、GSTπ主要在Tca8113和KB细胞胞浆中表达增高.结论 氧化应激可能与口腔癌前病变、口腔鳞状细胞癌的发生密切相关;可能是通过Nrf2与NF-κB调控的氧化应激导致口腔鳞状细胞癌的发生.Nrf2、NF-κB可能成为口腔癌化学预防新的靶点.
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Nrf2/Keap1通路抗癌作用的研究进展
转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)和它的胞质接头蛋白Keap1是细胞抗氧化反应的中枢调节者,Nrf2通过与抗氧化反应原件(ARE)相互作用,调节编码抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达.Nrf2-Keap1/ARE通路在抗肿瘤,抗凋亡,抗炎等方面发挥着重要的作用.本文综述了Nrf2-Keap1/ARE通路在抗癌作用方面的新研究.
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红景天苷对紫外线照射损伤HaCaT细胞Nrf2核转位的影响
目的：观察红景天苷对人HaCaT细胞转录因子Nrf2核转位及HaCaT细胞受紫外线照射后谷胱甘肽和丙二醛的影响。方法将HaCaT细胞分为5组，第1组未经任何处理（G1），第2组接受100 mJ/cm2剂量紫外线照射（G2），第3组、第4组及第5组分别采用20、40μg/ml及80μg/ml红景天苷（G3、G4、G5）培养24 h后，再采用100 mJ/cm2剂量紫外线照射，免疫荧光法观察HaCaT细胞Nrf2核转位情况，分光光度法分别检测细胞丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平。结果20、40、80μg/ml红景天苷均能够诱导紫外线照射细胞后Nrf2发生核转位，其中40μg/ml和80μg/ml的红景天苷作用尤为显著。G2 MDA较G1显著升高(P＜0.01)，G4、G5 MDA较G2显著降低(均P＜0.05)，G2 GSH较G1显著降低(P＜0.005)，G4、G5 GSH较G2显著升高(均P＜0.01)。结论红景天苷可能通过促进紫外线照射HaCaT细胞的Nrf2核转位，降低MDA及升高GSH的水平，从而减轻紫外线照射对细胞的氧化损伤。
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低氧复合运动抑制低氧诱导的骨骼肌NLRP3炎性小体活化
目的:观察低氧复合运动是否能抑制低氧诱导的NLRP3炎性小体活化,并探讨Nrf2在其间的生物角色.方法:32只雄性SD大鼠随机分为常氧组(NC)、常氧运动组(NT)、低氧组(HC)和低氧复合运动组(HT),每组8只.低氧干预为常压低氧帐篷,11.3％氧浓度持续暴露4周.运动干预为跑台训练(5°,15 m/min),60 min/d,5d/周,共4周.各组大鼠末次低氧后即刻处死,分离双侧股四头肌,单侧肌肉采用差速离心法提取线粒体,二氯荧光素法检测线粒体ROS生成速率,高效液相色谱法检测线粒体DNA中8-oxodG含量,ELISA法检测骨骼肌IL-1β含量,比色法检测骨骼肌Caspase-1活性,Western blot法检测骨骼肌NLRP3、ASC、Nrf2和NQO1蛋白表达.结果:HC组线粒体ROS生成速率和线粒体DNA中8-oxodG含量显著高于NC组(P＜0.01),骨骼肌Caspase-1活性和IL-13含量显著高于NC组(P＜0.01),NLRP3和ASC蛋白表达显著高于NC组(P＜0.01),Nrf2和NQO1蛋白表达显著低于NC组(P＜0.05,P＜O.01).HT组线粒体ROS生成速率和线粒体DNA中8-oxodG含量显著低于HC组(P＜0.01),骨骼肌Caspase-1活性和IL-13含量显著低于HC组(P＜0.05,P＜0.01),NLRP3和ASC蛋白表达显著低于HC组(P＜0.05,P＜0.01),Nrf2和NQO1蛋白表达显著高于HC组(P＜0.01).结论:低氧复合运动可上调Nrf2表达,通过减少ROS产生和促进抗氧化酶表达,抑制低氧诱导的NLRP3炎性小体活化.
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不同时间一次有氧运动对小鼠骨骼肌Nrf2与Keap1结合作用的影响
目的:探讨不同时间一次有氧运动对小鼠骨骼肌NF-E2相关因子(NF-E2-related factor 2,Nd2)与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keapl)结合作用的影响.方法:C57BL/6J小鼠30只,按体重随机分为安静对照组(0h组)和一次有氧运动3小时组(3h组)、一次有氧运动6小时组(6h组),每组10只.0h组安静饲养,3h组和6h组小鼠分别进行3小时和6小时的一次有氧跑台训练,跑速为15 n/min,坡度为0.运动后即刻取后腿骨骼肌.高质荧光测定法检测小鼠骨骼肌活性氧(ROS)水平;免疫共沉淀法测Nrf2/Keap1结合量;Western Blot法测定骨骼肌总Nrf2、Keap1蛋白表达量和细胞核Nrf2蛋白表达量.结果:与0h组相比,6h组ROS水平显著高于0h组(P＜0.05);3h、6h组小鼠骨骼肌中Nrf2/Keap1结合量显著降低(P＜0.05);3 h、6h组小鼠骨骼肌总Nrf2蛋白表达显著升高(P＜0.05),6h组小鼠骨骼肌细胞核Nrf2蛋白表达显著增加且与3h组相比也显著增加(P＜0.05);小鼠骨骼肌总Keap1蛋白表达基本无变化.结论:一次有氧运动对小鼠骨骼肌Nrf2与Keap1解绑和Nrf2转位入核的影响与运动时间的长短有关.
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CoCl2预处理对C2C12细胞氧化损伤后增殖和Nrf2表达的影响
目的:采用CoCl2模拟低氧对小鼠骨骼肌卫星细胞(C2C12)进行预处理,探索其对受H2O2损伤C2C12细胞的增殖和Nrf2表达的影响.方法:体外培养C2C12细胞,利用CoCl2模拟化学低氧状态.实验分为对照组、H2O2组和CoCl2预处理组(3 h、6h、12 h、24 h).采用MTr法检测C2C12细胞活性,DCF法测定细胞内活性氧(ROS)含量,Western blot法检测细胞核内Nrf2蛋白含量.结果:(1)CoCl2预处理6h、12 h、24h组细胞活性吸光度均值与H2O2组比较显著增加,具有统计学意义(P＜0.05).(2)CoCl2预处理各组细胞ROS含量均较H2O2组显著下降(P＜0.05).(3)对照组细胞核内Nrf2蛋白含量极少,H2O2组细胞核内Nrf2含量较对照组显著增加(P＜0.05),CoCl2预处理各组细胞核内Nrf2蛋白含量均较H2O2组显著增加(P＜0.05).结论:CoCl2预处理可以保护C2C12细胞免受氧化应激损伤,Nrf2激活可能参与了细胞的抗氧化过程.
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有氧运动对APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织Keap1/Nrf2信号通路的影响
目的:探讨有氧运动对APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织Keap1/Nrf2信号通路的影响,为揭示有氧运动防治阿尔兹海默症提供理论基础.方法:雄性APP/PS1小鼠随机分为安静对照组(CG)和运动组(EG).EG组小鼠进行为期8周的跑台训练,速度从12 m/min增至15 m/min,训练时间从30 min增至60 min.后一次训练结束后48小时,分离所有小鼠大脑皮质和海马组织.通过荧光定量PCR和West-em blot检测各组小鼠大脑皮质和海马组织中结构蛋白Keap1、Nrf2和Maf及下游抗氧化蛋白HO-1、NQO1和GCLC的mRNA及蛋白含量;通过Western blot检测APP、Aβ42和BACE1的蛋白含量;通过试剂盒检测MDA和GSH含量及GSH-Px和T-SOD活力.结果:8周跑台训练后,EG组小鼠大脑皮质和海马组织Keap1 mRNA和蛋白含量与CG组相比无显著性差异,而Nrf2和Maf mRNA和蛋白含量均显著高于CG组;EG组HO-1、NQO1和GCLC mRNA和蛋白含量均显著高于CG组;EG组MDA含量显著低于CG组,而GSH含量、GSH-Px和T-SOD活力显著高于CG组;APP蛋白含量与CG组相比未发生显著改变,但Aβ42和BACE1的蛋白含量显著低于CG组.结论:有氧运动增强APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织中Keap1/Nrf2信号通路活性;提高该通路下游抗氧化蛋白HO-1、NQO1和GCLC的含量;降低大脑皮质和海马组织氧化应激水平;从而有效抑制Aβ蛋白的形成.
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Nrf2在姜黄素保护UVB所致细胞氧化损伤中的作用
目的 研究姜黄素对UVB导致的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)活性氧(ROS)水平升高和细胞死亡的影响,并探讨转录因子Nrf2在其中的作用.方法 小鼠胚胎成纤维细胞经25μmol/L的姜黄素预处理或无预处理,接受不同剂量的UVB辐射后培养12 h后采用MTT法、荧光探针法和免疫印迹法检测Nrf2敲除MEF细胞存活率、ROS水平和Nrf2、HO1等蛋白表达水平,并进行比较.结果 50 mJ/cm2的UVB照射导致MEF细胞内ROS水平在6h内升高(t=16.65,P＜0.05),存活率则在24 h后降低(t=15.89,P＜0.05);而姜黄素预处理可以显著减轻UVB导致的ROS水平升高(t=11.88,P＜0.05)和存活率降低(=3.77,P＜0.05).UVB照射提高了Nrf2、HO1和磷酸化JNK、ERK的蛋白水平;姜黄素预处理则进一步增加了辐射诱导的Nrf2和HO1蛋白水平,但抑制了UVB照射导致的磷酸化JNK、ERK水平增加,而对p38没有明显影响.在Nrf2敲除的MEF中,UVB照射诱导的Nrf2和HO1蛋白水平被显著抑制,同时50 mJ/cm2的UVB照射导致ROS水平升高15倍(t=16.73,P＜0.05),细胞存活率降低至对照组的42.7％(t=-8.23,P＜0.05),且姜黄素的保护作用也显著降低.结论 Nrf2对UVB导致的细胞氧化损伤有保护作用,姜黄素可通过激活Nrf2信号来减轻UVB导致的细胞ROS水平升高和存活率降低.
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姜黄素对Ⅱ相酶GST及NQO酶活性的诱导及其机制
研究姜黄素对Ⅱ相酶谷胱甘肽转移酶(GST)及NADP(H)醌氧化还原酶(NQO)活性的影响及其诱导机制.用光谱法检测细胞GST酶和NQO酶的活性,以及还原型谷胱甘肽(GSH)的含量;利用蛋白印迹法检测核转录因子Nrf2在胞浆与胞核的分布;采用凝胶电泳迁移率分析法(EMSA)检测Nrf2与Ⅱ相酶基因抗氧化反应序列(ARE)结合活性.不同浓度的姜黄素(10～30 μmol·L-1)刺激结肠腺癌HT-29细胞后,能显著诱导GST酶及NQO酶活性的增加,同时能迅速提高细胞内GSH的含量;蛋白印迹和凝胶电泳迁移率结果显示,姜黄素诱导细胞核内转录因子Nrf2积聚,Nrf2-ARE的结合活性增加.姜黄素诱导的Ⅱ相酶GST酶及NQO酶活性增加与促进转录因子Nrf2由胞浆向胞核发生转位分布和增强Nrf2-ARE结合活性有关.
