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口腔鳞癌组织中P15和P21的表达研究
目的 探讨p15和p21基因的蛋白产物在口腔鳞癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化P-V法检测108例口腔鳞癌和10例正常口腔黏膜组织中P15和P21蛋白的表达,并将结果进行统计分析.结果 口腔鳞癌组织中P15蛋白的阳性表达率低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05),而P21蛋白的阳性表达率两组间无明显差异(P＞0.05);口腔鳞癌中,Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌P15蛋白的阳性表达率明显低于Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌的表达率(P＜0.01),无颈淋巴结转移组P15蛋白表达水平比有转移组高(P＜0.05);P21阳性表达率在不同性别组中的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 P15蛋白的表达与口腔鳞癌的临床分期及淋巴结转移有关,P15蛋白表达水平可作为临床评估口腔鳞癌恶性程度、转移和预后的参考指标.
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Clusterin和p21在膀胱癌中的表达及临床意义
目的:研究Clusterin和p21基因在膀胱癌中的表达和临床意义及二者的相关性.方法:采用免疫组织化学检测20例正常膀胱组织(NB)、60例膀胱癌组织(BTCC)中Clusterin和p21蛋白的表达情况,根据染色强度和阳性细胞数作半定量分析.结果:Clus-terin、p21蛋白在膀胱癌中的阳性表达率明显高于正常膀胱组织,阳性表达率分别为70.0%、63.3%;20.0%、15.0%(P<0.05);二者在低分化、浸润性肿瘤的阳性表达率明显高于高分化、浅表性肿瘤(P<0.05),Clusterin和p21在膀胱癌中的表达存在正性相关(P<0.05).结论:Clusterin、p21蛋白的表达与膀胱癌病理组织学分级、临床分期相关,二者联合检测可为膀胱癌的诊断及预后提供一定参考价值.
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PBRM1和P21蛋白在子宫内膜癌的表达及意义
目的:探讨PBRM1和P21蛋白在子宫内膜癌中的表达和临床意义.方法:应用免疫组化方法对105例子宫内膜癌组织进行PBRM1和P21蛋白检测.结果:子宫内膜癌中PBRM1和P21的阳性表达率分别为62.86％和80％;癌旁组织PBRM1和P21阳性表达率分别为45.71％和34.2％,子宫内膜癌组织表达高于癌旁组织(P＜0.05);PBRM1和P53阳性表达与组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、组织学分级、临床TNM分期相关(P＜0.05),与患者年龄无关(P＞0.05) PBRM1和P21的表达呈正相关(P＜0.05)结论:PBRM1和P21表达水平与子宫内膜癌组织的病理分级和临床分期的增高而增高,对其进行监测对子宫内膜癌的诊断、治疗及预后有指导意义.
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温阳化瘀法对月经周期紊乱患者p53,p21,MDM2蛋白表达的影响
目的:通过对月经周期紊乱患者的细胞周期相关基因的表达水平进行分析,得出温阳化瘀法在此病上的治疗效果.方法:选取我院妇科收治的月经周期紊乱患者120例,参照随机原则共分为2组,其中西医治疗组59例,给予醋酸甲羟孕酮片和克罗米芬口服;实验组61例,在西医治疗基础上给予温阳化瘀中药治疗,每日1剂;另外随机选取同期体检健康的60名女性作为正常对照组,在治疗结束后,应用免疫组化方法对全部受试者进行p53、p21以及MDM2蛋白表达检测,同时应用统计学软件对相关结果进行分析.结果:①p53和p21蛋白的阳性表达主要在细胞核,MDM2蛋白阳性表达定位在细胞核和(或)胞质;②正常子宫内膜组织中p53蛋白阳性表达率为(36.67％),p21表达率为(33.33％),显著高于月经周期紊乱患者,中药治疗组的p53蛋白阳性表达率为(19.67％),p21达率为(18.03％),显著高于西医治疗组,P＜0.05,差异有统计学意义;③正常子宫内膜组织中MDM2蛋白阳性表达率为(1.67％),显著低于月经周期紊乱患者,中药治疗组的MDM2蛋白阳性表达率为(32.77％),显著低于西医治疗组(50.85％),P＜0.05,差异有统计学意义.结论:与健康妇女相比,月经周期紊乱患者的p53和p21蛋白阳性表达率显著降低,MDM2蛋白阳性率显著升高,应用温阳化瘀法能够显著改善月经周期紊乱患者细胞周期相关基因的表达水平.
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Cyclin B1和p21在妊娠期高血压产妇胎盘组织中的表达及其临床意义
目的:观察CyclinB1和p21在妊娠期高血压产妇胎盘组织中的表达并探讨其临床意义.方法:采用免疫组化MaxVision法检测正常胎盘组织(20例)、妊娠期高血压胎盘组织(30例)、轻度子痫前期胎盘组织(30例)和重度子痫前期(30例)产妇胎盘组织中的cyclin B1和p21蛋白表达,并分析其与妊娠期高血压病情严重程度的相关性.结果:妊娠期高血压、轻度子痈前期、重度子痈前期胎盘组织中cyclinB1蛋白的表达均显著低于正常胎盘组织,差异均有统计学意义(P＜0.05),妊娠期高血压、轻度子痈前期、重度子痈前期胎盘组织中p21蛋白表达均显著高于正常胎盘组织,差异有统计学意义(P＜0.05).妊娠期高血压患者病情的严重程度与其胎盘组织中cyclinB1的蛋白表达呈显著负相关(r=0.641,P=0.000)；而与其胎盘组织中p21蛋白的表达呈显著正相关(r=0.635,P=0.000).结论:Cyclin B1蛋白的表达下调和p21蛋白的表达上调可能参与了妊娠期高血压的发生发展,且二者在胎盘组织中的表达水平与妊娠期高血压病情的严重程度显著相关.
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红藻氨酸诱导原代培养皮质神经元兴奋毒中p21变化及机制的研究
目的:探讨p21在红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元兴奋毒中的变化及可能机制.方法:原代培养大鼠皮质神经元经红藻氨酸(KA)处理24h后,激光共聚焦显微镜透射光下观察细胞损伤,应用Western blotting方法检测p21与p53蛋白表达的变化,用染色质免疫共沉淀(ChIP)-聚合酶链反应(PCR)方法检测p53与p21基因启动子上p53反应元件1结合情况.结果:KA处理后神经元明显损伤,部分细胞胞体缩小、变圆,突起变短、减少或消失,p21与p53蛋白表达上调,并且p53与p21基因启动子上的p53反应元件1结合增加.结论:在KA诱导的原代培养皮质神经元兴奋毒作用中p21蛋白表达上调,而p53直接参与了p21的激活.
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p21 RNAi的pSUPER载体的构建及功能鉴定
目的:构建抑制p21基因表达的pSUPER RNAi载体(pSUPER-p21)并鉴定其功能.方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向大鼠p21基因的寡核苷酸链,各60个碱基,退火,克隆到经Bg1 Ⅱ、HindⅢ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER-p21).通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果.将正确构建的质粒转染大鼠原代培养皮质神经元,western blotting检测经红藻氨酸处理的神经元中p21蛋白表达.结果:pSUPER-p21载体经双酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致.Western blotting结果证实pSUPER-p21载体可特异性抑制红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元中p21蛋白表达的上调.结论:靶向p21的pSUPER RNAi载体构建成功,该载体可特异性抑制p21基因表达.
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miR-155通过p53/p21调控前列腺癌细胞周期
目的:探讨miR-155对前列腺癌细胞周期的影响及其分子机制.方法:通过转染anti-miR-155抑制前列腺癌DU145和PC-3细胞中miR-155水平后,采用流式细胞术观察细胞周期的变化,western blot和RT-PCR观察p53和p21蛋白及CDK2和cyclin蛋白和mRNA表达的变化.结果:与对照组相比,DU145和PC-3细胞转染anti-miR-155后,G2/M期细胞阻滞,S期细胞数比例显著增加(P＜0.05),p53和p21蛋白和mRNA表达水平显著增加(P＜0.01),CDK2和cyclin E蛋白和mRNA表达均显著降低(P＜0.01).结论:miR-155可影响人前列腺癌细胞的周期,可能与其调节p53、p21及其下游的CDK2和cyclin E的表达相关.
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miR-106b-93-25簇对子宫内膜癌细胞的调控作用研究
目的:检测miR-106b-93-25基因簇对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法:qRT-PCR检测临床子宫内膜癌标本及癌旁正常组织中miR-106b、miR-93和miR-25及其宿主基因MCM7的表达情况.将microRNA及其拮抗剂转染ECC-1细胞后,MTT实验检测ECC-1细胞增殖情况,流式细胞术检测ECC-1细胞周期及细胞凋亡情况.荧光素酶报告系统验证miR-106b和miR-25分别直接调控p21和Bim.结果:临床标本子宫内膜癌组织与癌旁正常组织相比miR-106b-93-25簇及其宿主基因MCM7的表达明显增高.miR-106b-93-25簇能够促进ECC-1细胞增殖,减少凋亡.转染miR-106b和miR-93的细胞出现明显的S期阻滞,过表达miR-25的细胞凋亡明显减少.miR-106b-93-25簇通过抑制靶基因p21和Bim的表达,引起促增殖、抗凋亡作用.结论:miR-106b-93-25簇能够促进子宫内膜癌细胞增殖,抑制凋亡,并使细胞发生S期阻滞.miR-106b-93-25簇在子宫内膜癌的发生与发展中具有重要的作用.
关键词： miR-106b-93-25簇 p21 BIM 细胞凋亡 周期阻滞 -
胃远端癌口侧癌旁粘膜p53、p21的表达与残胃断端复发癌的关系
目的探讨建立胃远端癌"分子切缘"概念的可行性.方法应用免疫组化法对122例胃远端癌切除标本(其中30例术后随访有残胃断端复发癌)的癌周口侧粘膜的p53、p21的表达进行研究.结果①60例胃癌上切端组织中复发组的p53、p21的阳性率及联合阳性表达均明显高于对照组(P＜0.005).②62例胃远端癌的癌周口侧粘膜的p53、p21阳性率的变化趋势是自小弯和前(后)壁的近癌端向上切端逐步降低,并以小弯纵轴为主干向两侧逐步降低,其表达分布类似正态分布,顶峰位于小弯侧距癌肿边缘4～5cm处.结论胃远端癌上切端的p53、p21阳性表达,尤其是联合阳性表达与残胃断端复发癌存在显著的相关性.建立"分子切缘"概念,即在通常的HE染色光镜下无癌组织为阴性判定的基础上,应用免疫组化法检测上切端,以p53、p21皆为阴性表达作为上切端阴性的可行性标准.
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肿节风分散片对非小细胞肺癌增殖的影响及其分子机制的研究
目的 研究肿节风分散片(ZJF)对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞的影响,及其具体的分子机制.方法 首先采用MTT法研究不同浓度肿节风对A549、H1299细胞生长的抑制作用并计算其细胞增殖抑制率;然后通过Western blot方法检测不同浓度肿节风处理后,A549、H1299细胞内p21和p-Smad3的蛋白表达以及TGF-β通路抑制剂(SIS3 HCL)处理后,A549、H1299细胞内p21和p-Smad3的蛋白表达;采用流式细胞仪检测肿节风对A549、H1299细胞周期的影响.结果 随着肿节风浓度的升高,A549、H1299细胞的增殖抑制率均上升(P<0.05);Western blot结果表明,肿节风可通过上调p-Smad3的表达来上调p21的表达(P<0.05);肿节风诱导细胞24 h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,说明肿节风能促进肺癌细胞发生G0/G1期阻滞.结论 肿节风通过TGF-β信号通路诱导细胞周期蛋白激酶抑制剂p21的表达,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而促进肺癌细胞的凋亡,抑制肺癌细胞的增殖.
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菟丝子醇提液对衰老模型大鼠肝细胞 p21和 cyclinE基因表达的影响
目的研究菟丝子醇提液对D－半乳糖致衰老大鼠肝细胞p21和cyclin E基因表达的影响，探讨中药菟丝子抗衰老作用的机制。方法实验以40只wistar大鼠为研究对象，采用D－半乳糖致衰法制作衰老动物模型，每日经胃灌服菟丝子按0．8g／kg动物给药，采用半定量RT－PCR法测定大鼠p21和cyclin E mRNA的表达，免疫组化法检测p21和cyclin E蛋白水平的表达，同时检测菟丝子醇提液对其表达的影响。结果模型对照组大鼠p21 mRNA及蛋白表达较青年组显著升高（P＜0．01），而cyclin E mRNA及蛋白表达均降低（P＜0．05）。菟丝子醇提液可使p21基因表达降低（P＜0．01），cyclin E基因表达升高（ P＜0．05）。结论菟丝子的醇提液可通过影响细胞调控因子p21、cyclin E的表达而延缓肝细胞的衰老。
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p21蛋白在食道癌及食道良性增生性病变中的表达
目的 控讨ras-p21蛋白在食道癌及食道良性增生性病变中的表达.方法 对75例食道癌标本和12例食道良性增生性病变标本的石蜡块进行连续切片,做常规HE染色和免疫组化,用S-P法检测p21蛋白的表达水平.结果 p21蛋白的表达水平与食道癌的分化程度密切相关,p21在高分化组、中分化组与低分化组的表达阳性率分别为80.85%、85%和100%.结果 表明肿瘤分化程度越低,p21蛋白表达的阳性率越高;ras-p21在正常组织中无表达:在良性增生性病变中阳性率为33.33%,在食道癌组织中阳性率为85%,由此表明p21蛋白的表达水平反映食道病变的严重程度.结论 通过检测ras-p21蛋白的表达水平,不仅可以了解食道癌组织的分化程度,指导临床治疗和判断预后,而且p21蛋白可以作为一种可靠的标记物,对食道癌的早期诊断具有重要价值.
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EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53在非小细胞肺癌中的表达及临床病理特征
目的 探讨EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床病理特征.方法 采用荧光原位杂交技术(FISH)和免疫组织化学法(SP)检测64例非小细胞肺癌组织中EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53的表达.结果 (1)64例NSCLC中,EGFR和HER2阳性扩增率分别为39.0%和29.7%,在不同病理分级、不同临床TNM分期及有无淋巴结转移间无显著差异(P>0.05).HER2基因在腺癌的扩增率明显高于鳞癌(P<0.05).(2)c-jun、c-fos、P21、P16、P53蛋白在不同临床TNM分期有明显差异(P<0.05),在不同病理类型及分级间无明显差异(P>0.05),P53的表达水平在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.05).(3)EGFR与HER2、c-jun、c-fos、P21的表达水平在NSCLC中呈正相关.结论 联合检测EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53,有助于为NSCLC的早期诊断及个体化治疗提供新思路和新方法.NSCLC中,HER2、c-jun、c-fos、P21在EGFR介导的信号传导通路中发挥了正性调节的作用.
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EGFR、HER2、c-jun、c-fos、p21、p16、p53在非小细胞肺癌中的表达及临床病理特征
目的 探讨EGFR、HER2、c-jun、c-fos、p21、p16、p53在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床病理特征.方法 采用荧光原位杂交技术(FISH)和免疫组织化学法(SP)检测64例非小细胞肺癌组织中EGFR、HER2、c-jun、c-fos、p21、p16、p53的表达.结果 (1)64例NSCLC中EGFR和HER2阳性扩增率分别为39.0%和29.7%,在不同病理分级、不同临床TNM分期及有无淋巴结转移间无显著差异(P>0.05).HER2基因在腺癌的扩增率明显高于鳞癌(P<0.05).(2)c-jun、c-fos、p21、p16、p53蛋白在不同临床TNM分期有明显差异(P<0.05),在不同病理类型及分级间无明显差异(P>0.05),p53的表达水平在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.05).(3)EGFR与HER2、c-jun、c-fos、p21的表达水平在NSCLC中呈正相关.结论 联合检测EGFR、HER2、c-jun、c-fos、p21、p16、p53,有助于为NSCLC的早期诊断及个体化治疗提供新思路和新方法.NSCLC中HER2、c-jun、c-fos、p21在EGFR介导的信号传导通路中发挥了正性调节的作用.
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CyclinD1和P21在多形性腺瘤及癌中的表达及临床意义
目的:采用免疫组化法检测Cyclin D1和P21在PA及CPA中的表达,并以正常腮腺组织做对照,探讨二者在PA及CPA的发生发展中的作用及其相关性.方法:选取黑龙江省大庆市龙南医院口腔颌面外科手术标本45例,其中正常腮腺15例做对照,PA 20例,CPA 10例.用免疫组化法检测各组标本中CyclinD1和 P21的表达,并结合患者的临床病理资料对上述指标进行统计学分析.结果: CyclinD1和P21在CPA中的表达水平明显高于PA,且染色多呈强阳性;PA的表达明显高于正常腮腺组织,各组之间有显著性差异(P＜0.05).两种因子之间呈正相关.结论:①在CPA中CyclinD1和P21高表达.②在CPA中的阳性率明显高于PA及正常腮腺组织.③CyclinD1和P21在PA中的表达明显高于正常腮腺组织.④CyclinD1和P21的表达在CPA中与病理分类密切相关.
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槲皮素对HeLa细胞P21、CDK4蛋白表达的影响
目的:探讨不同浓度的槲皮素对HeLa细胞P21、CDK4蛋白表达的影响及意义.方法:采用不同浓度槲皮素处理体外培养的HeLa细胞,培养48h后免疫组织化学法检测HeLa细胞P21、CDK4蛋白表达的变化.结果:不同浓度的槲皮素均能显著增高P21和降低CDK4蛋白在HeLa细胞中的表达,且与空白对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:槲皮素可能通过上调HeLa细胞P21蛋白表达和下调CDK4蛋白表达,促进HeLa细胞凋亡.
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LincRNA-p21抑制食管癌细胞增殖的机制
[目的]探讨基因间的长链非编码RNA(long intergenic non-coding RNA,LincRNA)-p21抑制食管癌细胞增殖的调控及机制.[方法]应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)技术,检测LincRNA-p21在2株食管癌细胞(EC109和EC9706)与1株永生化食管上皮细胞(Het-1A)以及64例食管癌组织与癌旁组织中的表达情况.携带LincRNA-p21基因全长的慢病毒成功转染食管癌EC109后,通过流式细胞术检测食管癌细胞EC109的周期分布,EdU染色法分析EC109的增殖情况.同时,采用RT-qPCR和Western blot技术分别检测LincRNA-p21下游基因p21的mRNA水平和蛋白表达水平,以及cyclin D蛋白水平.[结果] EC109和EC9706中LincRNA-p21水平分别为Het-1A的18％和32％(P＜0.05);p21的mRNA水平分别为Het-1A的42％和48％.以EC109为靶细胞进行慢病毒转染后,LincRNA-p21相对表达量增加约14860倍(P＜0.05),p21的mRNA上调约1.83倍(P＜0.05).细胞周期分布结果显示,LincRNA-p21转染组其G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少(P＜0.05),增殖指数(40.4％)低于阴性对照(48.2％)(P＜0.05).EdU增殖分析结果显示上调LincRNA-p21后,细胞增值率明显降低.Western blot结果显示过表达LincRNA-p21下调cyclin D蛋白水平.[结论] LincRNA-p21促进p21表达,通过抑制cyclinD表达从而诱导食管癌EC109细胞G1/S期阻滞,抑制细胞增殖.
关键词： 食管癌 长链非编码RNA lincRNA-p21 p21 G1/S阻滞 -
益气活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响
目的:观察益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响.方法:以自然衰老大鼠为衰老模型,采用RT-PCR、Western blotting法研究益气、活血方药对老年大鼠肝脏p16、p21、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、cyclin D1和cyclin E mRNA转录和蛋白表达的影响.结果:老年大鼠肝脏p16、p21、cyclin D1 mRNA转录和蛋白的表达增加;PCNA、cyclin E mRNA转录和蛋白的表达降低.与老年大鼠比较,益气、活血方药可下调老年大鼠肝脏cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达,上调促进增殖基因cyclin E mRNA转录和蛋白表达,但对p16、p21和PCNA的调节作用不明显.结论:益气、活血方药主要通过调控cyclin D1和cyclin E mRNA转录和蛋白表达而促进细胞增殖.
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P21基因转染治疗移植静脉内膜增生的潜在临床价值研究
目的:研究复制缺陷性腺病毒携带p21基因体外孵育转染治疗移植静脉内膜增生(IH)的可行性及潜在临床价值.方法:采用直接连接法将p21基因装入5型腺病毒,得Adp21.实验动物分3组(n=36):p21基因转染组(T)、药物治疗组(D)、对照组(C),T组移植静脉段取材后置于高滴度的病毒工作液(×108pfu/ml)中,0℃～4℃下体外孵育转染45min,转染后将该静脉段经端端吻合间置于同侧颈总动脉;D组动物于术前1周给抗IH药西拉普利,C组动物无特殊处理,后2组移植静脉段取材后置于普通培养液45min(0℃～4℃下),同法吻合移植.于术后不同时间段取材,印迹杂交及免疫组化法鉴定p21基因的表达,HE及V.G染色观察移植静脉段的IH情况.结果:T组术后3d即有p21表达,另两组不表达.D组的I/M在术后3d至术后3w小于C组,有显著差异(P＜0.05),至4w时D组的I/M已接近C组,无显著差异.3d时D组I/M小于T组,但1w后各时间段的情况则相反,T组I/M小于D组,均有显著差异(P＜0.05,具体数值见表-1).结论:体外孵育法可有效实现Adp21转染移植静脉段,静脉移植人体内后能有效表达转染的目的基因,功能蛋白p21能减轻移植静脉IH,其效果优于抗IH药西拉普利,有重要的潜在临床意义.
