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基因芯片技术快速检测水中常见致病菌
致病菌污染饮用水可导致多种疾病的暴发与流行,严重威胁着人类的健康.因此,若想有效控制介水传染病的发生,致病菌的快速检测是关键.传统的细菌检测方法,操作繁琐、且需要数天才能得到结果.核酸探针杂交技术也存在特异性或敏感性的问题.常规PCR 1次只能检出1种致病菌,对水中分离的未知菌,或有多种细菌污染的样品则显得无从下手.为了实现对水中致病菌的快速检测,我们建立了以基因芯片技术为基础的水中常见致病菌的检测与鉴定技术.
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实时荧光PCR结合探针熔解曲线检测亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性及其与肝硬化的相关性研究
聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)是当前常用的检测基因多态性的方法之一,该法不仅操作时间长,且在采用限制性内切酶对PCR产物进行酶切后,通常采用溴乙锭或银染的方法观察结果.溴乙锭严重危害人体健康,而银染试剂相当不稳定.因此有必要建立一种快速且对人体危害性较低的多态性检测方法.实时荧光聚合酶链反应(PCR)是一种将先进的光学技术、温控技术、荧光素标记技术以及计算机软件有机结合的新型PCR,能够对PCR每一个循环的荧光强度进行监测,故称为实时荧光PCR.双探针杂交技术是一种重要的实时荧光PCR技术,通常用于基因的定量检测,但是如果结合探针熔解曲线则可用于基因多态性和突变的检测[1-3].
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聚合酶链反应直接检测粪便中志贺菌的临床意义
近年来志贺菌在众多的腹泻病致病菌中仍然具有较高的发病率[1].在基层部队常常引起急性细菌性痢疾(急性菌痢),并时呈集体暴发流行.应用聚合酶链反应(PCR)检测志贺菌已早有报道,但应用于临床实际诊断的研究报道不多.本文采用PCR和长臂光敏生物素探针杂交技术对2起急性菌痢,共17例进行了检测,进一步探讨PCR用于临床腹泻病诊断的实用性.
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国内基因扩增技术的进展
国内近两年开始正式受理国内PCR试剂盒的申报工作,新药评审专家对试剂盒的技术规范达成共识,就是申报的PCR试剂盒必须采用探针杂交技术和防污染技术,禁止使用产物的电泳分析技术,使试剂盒技术水平达到国际水准.现就这两种技术的发展介绍如下.
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SLE患者原癌基因C-myc表达与临床相关性的研究
系统性红斑狼疮(SLE)是一种由于自身免疫反应引起的有多器官损伤和多种自身抗体的疾病,其发病与B细胞活化增殖异常活跃有关[1].但导致这些免疫细胞异常的原因尚未完全明确.鉴于本病具有遗传倾向,考虑免疫细胞异常可能与遗传有关[2].近年来,随着探针杂交技术的应用,国外一些学者开始探讨原癌基因对免疫调节的影响,并发现SLE患者原癌基因C-myc表达率高于正常人[3].
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FQ-PCR检测解脲支原体及其药物敏感试验的临床应用
PCR技术应用方式有多种,在一般试验检测中,对PCR反应后产物的分析主要还是以琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳为主,操作繁琐费时,FQ-PCR检测技术近年来才研制成功,融汇了PCR技术的核酸高效扩增,探针杂交技术的高敏感高精确定量的优点,完全闭管操作,仪器直接读取PCR荧光信号的变化以获得定量的结果,并能克服常规PCR仅能定性不能定量,采用溴乙锭对人体有害及污染环境等缺点.