TNF-α抑制剂在细胞水平上抑制丙型肝炎病毒的感染

目的:探索TNF-α抑制剂对丙型肝炎病毒感染肝细胞的影响.方法:体外培养肝癌细胞株Huh7细胞,分为未处理组、NFκB抑制剂[6-amino-4-(4-phenoxyphenylethylamino) quinazoline,QNZ]处理组、咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)处理组和TNF-α抑制剂来那度胺(Lenalidomide)处理组,每组设置浓度梯度为100 μmol/L至1.28 nmol/L,5倍倍比稀释,通过CCK8法检测各抑制剂对细胞增殖的影响;Huh7细胞经抑制剂处理后,再以丙型肝炎病毒感染,通过荧光定量PCR和免疫荧光法检测细胞内病毒的感染水平.结果:100 μmol/L QNZ处理组(0.730±0.056)和100μmol/L CAPE处理组(1.040±0.014)细胞在450 nm处的吸光度(absorbance,A)值均低于未处理组(1.190±0.040,P=0.000).Lenalidomide各浓度处理组(100μmol/L处理组,1.250±0.016)细胞增殖水平与未处理组相当(P=0.306).在抗病毒活性方面,100 nmol/L Lenalidomide处理组[(3.79±0.88)×105]和QNZ处理组[(6.64±1.11)×105]HCV RNA水平明显低于未处理组[(1.51 ±0.45)×106,P=0.000],而CAPE处理组[(1.61±0.15)×106]与未处理组HCV RNA水平相当(P=-0.383).结论:TNF-α抑制剂Lenalidomide对细胞毒性较小,能够在细胞水平上抑制丙型肝炎病毒的感染.

茶树油灭活脊髓灰质炎病毒的试验观察

目的观察茶树油(teatree oil,TTO)对脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的杀灭效果,了解TTO对病毒的灭活能力.方法根据消毒技术规范指定的方法,采用细胞感染试验测定病毒与各浓度TTO溶液作用前后感染细胞的滴度.结果0.5%TTO作用40min和60min能分别灭活PV 4.33 log10和5.5 log10;1.0%TTO作用40min和60min能灭活PV 5.33 log10和5.5 log10.结论TTD对悬液中的PV有明显的杀灭作用.

乙型肝炎病毒YMDD的检测与分析

乙型肝炎(简称乙肝)乙肝病毒是一种DNA病毒,主要用拉米夫定治疗,其主要机制是拉米夫定在细胞内经磷酸化后生成三磷酸拉米夫定,与脱氧胞嘧啶核苷(dCTP)竞争,进入合成中的脱氧核糖核酸链,使乙肝病毒不能继续延伸而终止复制.乙肝病毒YMDD变异主要与拉米夫定治疗有关,其产生机制是乙肝病毒在拉米夫定药物诱导下发生DNA聚合酶基因变异,使氨基酸空间结构发生改变,拉米夫定无法与之结合,丧失了抗病毒活性,从而在治疗过程中产生耐药性.

蚯蚓体腔液抗病毒活性及其机制的研究

[目的]以赤子爱胜蚓为原料,研究其体腔液的抗病毒活性及可能伪机制,为新型抗病毒药物的开发提供思路.[方法]用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法测定蚯蚓体腔液蛋白酶活性和核酸酶活性;用鸡胚培养检测其抗流感病毒的活性,乙型肝炎病毒表面抗原及e抗原诊断试剂盒检测其对乙型肝炎病毒表面抗原及e抗原的破坏作用.[结果]蚯蚓体腔液具有蛋白酶活性、核酸酶活性每抗病毒活性;各种不同浓度的蚯蚓体腔液对流感病毒的增殖都有显著的抑制作用,且可以抑制乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原表达,呈浓度依赖关系.[结论]蚯蚓体腔液具有抗病毒活性,其可能机制是蛋白酶、核酸酶及各种活性成分单独和/或协同作用的结果.

组合突变提高重组人干扰素α2b的抗病毒活性

本文合理设计新型重组人干扰素α2b(rh-INF α2b)基因序列,采用组合突变策略,对第52-53-55、103-107和121-125位氨基酸残基定向突变.将突变基因连接于原核表达载体pET28a上进行诱导表达,所获得的新型rh-IFN α2b的抗病毒活性效价达9.3×107 IU/mg,比对照样品(1×106 IU/mg)高93倍.结果表明:所采用邻近多点突变方法,有效组合了位点效应,大幅度提高了干扰素的生物活性,获得高抗病毒活性的rh-IFN α2b.

23-32 新的巨细胞病毒非核苷抑制剂BAY38-4766的体内外抗病毒活性及作用机制

α-苦瓜素及α-苦瓜素-PEG体外抗HSV-1的研究

目的 研究苦瓜籽核糖体失活蛋白o-苦瓜素(α - MMC)体外抗单纯疱疹病毒(HSV -1)的活性及其聚乙二醇修饰物(α - MMC - PEG)保留这一活性的程度.方法 采用MTT法测定α- MMC和α- MMC - PEG对Vero细胞的体外毒性；通过对所培养的上清液中HSV -1囊膜糖蛋白抗原的测定、细胞和病毒的预处理试验,研究了α- MMC和α- MMC - PEG体外抗HSV -1的活性.结果 α- MMC和α- MMC - PEG对HSV -1囊膜糖蛋白抗原分泌的抑制作用均呈剂量依赖性,IC50分别为0.67、2.94 μmol· L-；相同剂量下,α- MMC - PEG可保留60％天然α- MMC的抑制活性.3.3 μmol·L-1的α- MMC和α- MMC - PEG直接作用病毒后使Vero细胞的存活率分别提高了22％、17％.结论 α- MMC经PEG修饰后可保留较高的抗HSV -1活性,修饰前后都对HSV -1有一定的直接灭活作用.

6-O-烷基阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性

目的以改善阿昔洛韦的水溶性为目的,设计并合成6-O-烷基阿昔洛韦衍生物,并测定其抗病毒活性.方法以阿昔洛韦为先导化合物,合成一系列6-O-烷基阿昔洛韦衍生物,并以阿昔洛韦为阳性对照,进行体外抗HSV-I和HSV-II病毒的活性测定.结果合成了6-O-烷基阿昔洛韦衍生物10个,结构均经过元素分析、1HNMR和MS的确认.结论部分目标化合物具有一定的体外抗HSV-I和HSV-II病毒的活性,但较阿昔洛韦作用要弱.

抗病毒抗生素16704 A的研究Ⅱ.抗病毒活性的研究

在常规细胞培养筛选中,我们发现一株由云南曲靖地区土壤分离的链霉菌的发酵液有广谱抗病毒活性,不抗细菌及真菌,经分离与纯化得到16704A纯品,结构鉴定为Bafilomycin A1.16704A在Vero细胞内对单疱病毒1型,2型及水疱性口炎病毒均有明显抑制作用,用CPE方法,IC50分别为0.65、0.78及0.39mg/L,选择指数分别为14.7、12.2及24.4;用PFU方法,IC50分别为0.36、0.47及0.11mg/L,选择指数分别为26.5、20.3及86.6.

猪干扰素-γ基因表达产物的纯化与复性研究

目的:纯化、复性猪干扰素-γ基因(poIFN-γ)表达产物并分析其抗病毒活性.方法:用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导原核表达载体pQE30/poIFN-γ,超声裂解包涵体,尿素溶解、Ni-NTA纯化和透析复性后,对所得的蛋白进行抗病毒活性检测.结果:经复性纯化的目的蛋白纯度达95%以上,在PK15细胞上抗滤泡性口炎病毒比活性为6.2×105u/mg.结论:获得PoIFN-γ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础.

家蝇幼虫营养价值及抗病毒活性的初步研究

目的:为在贵阳地区建立畜禽粪便养殖家蝇生产蝇蛆动物蛋白提供实验室数据,并观察用蝇蛆代替鱼粉饲养蛋鸡的效果及经济效益,确定家蝇组织匀浆液的抗病毒活性.方法:(1)在相同的实验室饲养环境下,观察人工饲料、猪粪饲养的家蝇幼虫体内脂肪酸及微量元素含量的区别;(2)用蝇蛆粉或鲜蝇代替鱼粉饲养蛋鸡,观察对蛋质的影响;(3)用鸡胚法检测蝇蛆组织匀浆液的抗病毒活性.结果:用猪粪饲养的蝇蛆体内所含的微量元素(Ca、Fe、Cu、Zn、Se)高于用人工饲料饲养的蝇蛆(P<0.05);用蝇蛆粉或鲜蝇代替鱼粉饲养蛋鸡,蛋内的脂肪酸及微量元素含量无明显改变(P>0.05);蝇蛆组织匀浆液中有抗病毒活性物质存在,性质尚待进一步确定.结论:用猪粪饲养家蝇不仅可以生产出优质的蝇蛆蛋白,还可以节约开支,净化环境及生产大量的优质生物肥;用蝇蛆代替鱼粉饲养蛋鸡不会影响鸡蛋的质量,蝇蛆生产周期短、经济、简单易行;蝇蛆组织匀浆液中存在抗病毒的活性物质,为抗病毒药物的寻找开辟了新的路径.

蓝藻抗病毒蛋白-N的制备、生物活性鉴定及其多克隆抗体的制备和修饰

目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰.方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其效价和特异性,抗血清经硫酸铵初步沉淀和DEAE离子交换层析获得纯化抗体,纯化抗体通过辣根过氧化物酶(HRP)标记获得修饰抗体.结果:纯化获得纯度达95%以上且具有明显抗流感病毒作用的非融合CVN,利用所得CVN抗原成功制备CVN多克隆抗体,酶联免疫分析显示其效价达到1:16000以上,Western blot分析表明其具明显特异性.抗血清经盐析和DEAE离子柱层析后获得效价为1:6400高纯度纯化抗体,经HRP修饰后获得具有较高生物活性的标记抗体.结论:获得高纯度,高效价兔抗CVN多克隆抗体,以及HRP标记的兔抗CVN多克隆抗体,为后续研究奠定了基础.

喷昔洛韦对单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的抑制作用

目的评估喷昔洛韦钠盐在体内外对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染的抑制作用.方法在组织培养中用CPE抑制实验测定喷昔洛韦钠盐对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ所致vero细胞病变的抑制作用;在BALB/c小鼠中测定其对HSV-Ⅰ感染BALB/c小鼠所致耳部皮损的治疗作用.结果喷昔洛韦钠盐能有效抑制100 TCID50HSV-Ⅰ(sm44株)和HSV-Ⅱ(333株)感染vero细胞所产生的细胞病变作用,半数有效剂量(IC50)分别为1.95 μg/ml和3.90 μg/ml;使HSV-Ⅰ病毒感染性滴度下降99%的药物浓度(IC99)为2.40 μg/ml.在HSV-Ⅰ(sm44)感染BALB/c小鼠中,喷昔洛韦钠盐大剂量组(250 mg/kg·d)、中剂量组(100 mg/kg·d)、小剂量组(50 mg/kg·d)均能明显降低HSV-Ⅰ感染BALB/c小鼠所致耳部皮损作用.结论喷昔洛韦钠盐在体内外具有抗HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染的作用.

新型杂多化合物抗禽流感病毒的实验研究

目的 探讨新型杂多化合物(PTW)抗禽流感病毒的作用.方法 采用细胞病变法结合MTT法检测PTW对MDCK细胞的毒性和对禽流感病毒(H5N1)的抑制作用;以H5N1感染的小鼠为实验模型,检测PTW对H5N1感染小鼠的治疗作用.结果 PTW对MDCK细胞的大无毒质量浓度为190.55 mg/L,半数致死质量浓度为909.9 mg/L;体外实验结果表明PTW对禽流感病毒半数抑制质量浓度(IC50)为13.49 mg/L,治疗指数(TI)为67.44;体内实验显示PTW对H5N1感染小鼠有明显的治疗作用,25 mg/kg剂量组对H5N1感染小鼠的肺炎抑制率达166.16%,生命延长率为28.36%.结论 PTW对H5N1禽流感病毒具有较好的抑制作用.

6-O-取代阿昔洛韦衍生物的合成及其抗病毒活性研究

目的探讨6-O-取代苯基阿昔洛韦衍生物的合成及测定其抗病毒活性。方法采用先导化合物为阿昔洛韦，对其分子中的碱基进行结构修饰，进行6-O-取代阿昔洛韦衍生物的合成。将阿昔洛韦作为对照，应用体外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ测定6-O-取代阿昔洛韦衍生物的抗病毒活性。结果体外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ的病毒活性均以6-O-苯基阿昔洛韦相对于阿昔洛韦为较弱。结论6-O-取代阿昔洛韦虽然对于阿昔洛韦抗病毒活性作用较弱，但其毒性较小。

Ⅲ型干扰素减弱作为疫苗载体的水疱性口炎病毒的致病性

水疱性口炎病毒（ VSV）被广泛地用于疫苗载体及瘤细胞溶解剂的研究。但出于对安全性的考虑，大大限制了它在人体中的应用。归属于细胞因子的Ⅲ型λ干扰素（ IFN－λ）家族与IFN－α／β家族有着相同的信号转导路径，所以也能激发相似的抗病毒活性。不过，IFN－λ是通过一种细胞型特异性方式表达的独特的受体－复合物形式实现信号转导的，正是这个原因限制了它只对上皮屏障组织具有活性，尤其是呼吸道和胃肠道的上皮细胞。我们在此项研究中明确了由重组VSV表达的IFN－λ如何影响载体复制、传播及干扰素的免疫原性。此项研究表明， ；IFN－λ的表达大大减弱了细胞培养的VSV的致病性。在活体中鼻内给药后， IFN－λ限制了VSV在小鼠肺部的复制增值，也减少了病毒向其他器官的扩散。此外，尽管有这种减毒作用，在接受单次免疫后，疫苗载体获得了产生保护性CD8 T细胞及抗体应答的能力。这些发现向我们展示了一个减弱病毒性载体致病性的全新方法，并可将之运用到疫苗及瘤细胞溶解剂的研究中去。

潘生丁治疗病毒性上呼吸道感染70例疗效观察

文献报道潘生丁在试管内具有广谱抗病毒活性,其作用机理主要是抑制病毒的特异的增殖过程,我们采用小剂量(单用)潘生丁口服治疗病毒性上呼吸道感染,取得良好效果,现报告如下.

重组抗肿瘤抗病毒蛋白的三维结构预测及其与受体的相互作用分析

目的:利用计算机模拟的方法分析重组抗肿瘤抗病毒蛋白(乐复能)的抗病毒及抗肿瘤活性优于普通干扰素(IFNα-2b)的机制.方法:通过对乐复能、乐复能与干扰素受体形成复合物的结构预测,分析乐复能与其受体的相互作用.结果:与IFNα-2b相比较,乐复能和受体IFNR1的相互作用力有了明显的提高,结合更加紧密.结论:计算机模拟的方法可以有效地应用于尚无晶体信息的蛋白类药物及其与受体相互作用的结构预测.

苏拉明对流行性乙型脑炎病毒蛋白合成的抑制作用

目的:研究苏拉明对乙型脑炎病毒蛋白的抑制机制,为进一步利用该药提供理论依据.方法:在病毒吸附培养细胞(HepG2和IMR-32)后加入不同浓度的苏拉明,48h后采集培养上清液及感染细胞.通过运用致细胞病变作用(CPE)、病毒滴度测算(plaque法)及病毒构造区E蛋白质和非构造区NS3蛋白质的检查(Western blot法)等方法作为检测指标,观察苏拉明对乙型脑炎病毒的抑制效应.结果:苏拉明浓度在50μg/ml时与对照组相比,HepG2细胞内病毒繁殖率为51.8%,而IMR-32细胞内病毒量是对照组的0.03%.研究进一步明显,苏拉明影响病毒E和NS3蛋白质的合成,特别是E蛋白质的生成量显著减少.结论:苏拉明通过阻碍病毒蛋白质的生成过程而抑制乙型脑炎病毒的复制.