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人巨细胞病毒临床株UL133基因序列遗传变异分析
目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)临床感染株的UL133基因序列特征. 方法 采集HCMV-DNA阳性者的临床标本,PCR扩增UL133基因全序列,阳性扩增产物克隆到pEASYTM载体后进行序列测定,结合来自于NCBI数据库的15条序列进行UL133基因多态性分析. 结果 获得20例HCMV感染者的UL133全长序列.多态性分析显示HCMV临床株UL133基因核苷酸变异率为0～9.7％,氨基酸变异率为0～40.2％;不同感染者UL133序列5′端的第32-45位发生了相对集中的非同义突变,其他部分序列较少出现氨基酸缺失及错义突变.其中1例临床感染者UL133序列在163-166位核苷酸出现移码突变.综合NCBI数据库的15株序列分析显示,UL133序列分为G1、G2、G3、G4、G5、G6等6个型,但未发现基因型与HCMV感染的临床表现具有显著关联性.编码蛋白翻译后修饰位点包括酪蛋白激酶磷酸化位点(CKP),蛋白激酶C位点(PKC)以及NLS_BP核定位信号(NLS_BP).与Toledo株相比,有1株发生移码突变,其他临床株UL133基因编码产物翻译后修饰位点相对保守. 结论 HCMV UL133基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列高度保守,但仍具有一定的多态性.这种多态性与HCMV感染临床症状的关系尚待进一步研究.
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新疆地区汉族高血压患者人巨细胞病毒gB基因型分析
目的 调查新疆地区汉族人群及高血压患者人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株,研究其糖蛋白B(gB)基因型分布. 方法 采用病例—对照研究方法,采集300例高血压患者和200例非高血压(对照)中的HCMV活动性感染外周血标本.使用Real-time PCR、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及测序技术检测HCMV-DNA,鉴别gB基因型并构建进化树. 结果 18例HCMV活动性感染患者中高血压患者占77.8％(14/18),健康对照组22.2％(4/18),差异有统计学意义(x2 =5.556,P＜0.05).汉族人群中存在4种gB基因型,其中gB1占5.6％(1/18),gB2占50％ (9/18),gB1+2占38.9％ (7/18),gB2+3占5.6％ (1/18),差异有统计学意义(x2=11.333,P＜0.05);高血压患者中存在3种gB基因型,其中gB1占7.1％ (1/14),gB2占57.1％ (8/14),gB1+2占35.7％ (5/14),差异无统计学意义(x2=4.069,P＞0.05).男性高血压患者存在两种基因型,其中gB2占87.5％ (7/8),混合基因型gB1+2占12.5％(1/8);女性高血压患者存在3种基因型,gB1和gB2各占16.7％ (1/6),混合基因型gB1+2占66.7％ (4/6).男、女患者gB基因型分布差异有统计学意义(x2 =6.725,P＜0.05).生物信息学分析10例单一gB基因核苷酸序列差异性为0～3.9％,氨基酸序列差异性为0～3.8％. 结论 新疆地区汉族居民HCMV感染流行株gB基因型存在单一及混合gB基因型,人群以gB2型为主,高血压男性以gB2型为主,高血压女性以gB1+2型为主;尚未发现gB3和gB4型,该人群中单一gB基因序列变异不大.本研究中感染HCMV的高血压患者所占比例高于健康对照组,提示HCMV感染可能为新疆汉族人群高血压易感的诱因之一.
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人巨细胞病毒潜伏感染相关基因研究进展
人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染非常普遍,在免疫功能正常的个体,HCMV初次感染大多数能够被宿主的免疫系统有效清除,少部分通过建立长期的潜伏感染生存下来.HCMV基因组庞大,表达许多病毒基因产物,其中一部分可能促进病毒潜伏存宿主细胞中.目前对于HCMV在宿主体内潜伏感染的机制及相关基因的表达知之甚少,本文将对近年来有关HCMV潜伏感染时相关病毒基因的表达及功能研究作一综述.
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细胞毒性T淋巴细胞治疗人巨细胞病毒感染在造血干细胞移植中的应用
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染是造血干细胞移植后的常见并发症,是造成移植后患者死亡的主要原因之一.细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)是控制HCMV感染的重要免疫细胞,过继输注病毒特异性CTL对预防及治疗HCMV感染均安全有效.目前针对HCMV特异性CTL的制备方法仍在探索中.利用抗原递呈细胞刺激外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)制备CTL的方法操作简单,易于开展大规模临床实验;利用肽特异性四聚体或病毒特异性γ-干扰素抗体直接从供者PBMC筛选CTL的方法需要大量的供者外周血,且制备成本高;第三方CTL作为一种产品可以随时使用,但仍需解决HLA不相合的问题.另外,不同方法的临床疗效及安全性也存在差异.本文对目前采用的制备HCMV特异性T淋巴细胞的方法及其疗效进行综述.
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中国北京市无偿献血者人巨细胞病毒筛查目标人群的选择
目的:在北京市无偿献血人群中寻找人巨细胞病毒(HCMV)抗体阴性比例高的群组,为特殊临床用血需求建立数据库.方法:随机抽取2518份国家强制性血液筛查项目检测结果合格的无偿献血者血液标本,采用酶联免疫法(ELISA)进行HCMV-IgG抗体检测.对检测结果按献血者不同性别、年龄、文化程度、出生地区进行分析比较.结果:北京市合格无偿献血者HCMV-IgG抗体阴性率为10.68％ (269/2518);不同性别相比较,HCMV-IgG抗体阴性率男性为11.84％(210/1774),女性为7.93％ (59/744);不同年龄段相比较,HCMV-IgG抗体阴性率18-25岁为13.51％(181/1340),26-30岁为8.68％(62/714),31-35岁为5.60％ (26/464),随着年龄的增长HCMV-IgG抗体阴性率逐渐降低;不同出生地区相比较,HCMV-IgG抗体阴性率以华北地区京津高18.59％(50/269);不同文化程度相比较,HCMV-IgG抗体阴性率以本科及其以上高13.52％(86/636).结论:在北京市无偿献血人群中进行HCMV抗体筛查时,需优先选择出生于华北京津地区、本科及其以上文化程度、18-25岁男性人群.该群体的建立为HCMV抗体筛查策略的建立提供了依据.
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人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡
本研究探讨人巨细胞病毒(hCMV)体外感染是否可引起早幼粒细胞的增殖、分化抑制、诱导其凋亡,并探讨其作用机制.采用hCMV AD169株体外感染早幼粒细胞白血病细胞HL-60,用PCR检测hCMV DNA,用形态学观察、DNA片段化检测及Annexin V/PI染色流式细胞仪检测等方法分析细胞凋亡情况.结果表明:hCMV AD169株在体外能明显抑制早幼粒细胞白血病细胞HL-60的生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;PCR检测发现病毒感染组HL-60细胞中有hCMV IEA的表达;形态学观察和DNA片段化检测证实了细胞凋亡的存在;流式细胞仪检测结果显示HL-60细胞凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染时间的延长而增高,二者呈依赖关系.结论:hCMV AD169株在体外可直接感染HL-60细胞;hCMV AD169株在体外感染HL-60细胞后,可抑制HL-60细胞的分化和增殖;hCMV AD169株体外感染HL-60细胞后可诱导其凋亡,且凋亡率与病毒剂量及作用时间呈依赖性关系.
关键词： 人巨细胞病毒 早幼粒细胞白血病细胞 细胞凋亡 病毒感染 -
当归多糖在体外抑制HCMV感染所致巨核系细胞凋亡中的作用探讨
本研究探讨当归多糖(angelica polysaccharide,APS)在体外抑制HCMV感染致人巨核系细胞凋亡中的作用.HCMV AD169体外感染巨核系细胞CHRF-288-11,在病毒感染后第3天向试验体系中加入APS.用PCR扩增检测HCMV DNA,用形态学、DNA片段化、细胞表面标志检测APS对HCMV感染所致巨核系细胞凋亡的影响.结果表明:APS在上能抑制HCMV体外感染诱导的巨核系细胞CHRF-288-11凋亡,且呈剂量依赖性.感染巨通讯作者核系细胞CHRF-288-11中有hCMV IEA的表达,形态学和DNA片段化分析证实了细胞凋亡的存在,Annexin V/PI双染流式细胞仪分析显示受感染的CHRF细胞中随着加入APS剂量的减少,凋亡率呈上升趋势.结论:HCMV AD169株在体外可直接感染巨核系细胞并降低其存活率;HCMV AD169株在体外感染巨核系细胞后可诱导其加重凋亡,凋亡率与时间呈正相关.在HCMV AD169株体外感染巨核系细胞后,向培养细胞中加入APS,可以提高受染细胞的存活率,表明APS对HCMV感染的巨核系细胞有一定的保护作用;APS在一定程度上能抑制HCMV体外感染诱导的巨核系细胞凋亡,且呈剂量依赖性.
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人巨细胞病毒体外感染巨核系细胞加重凋亡
为了研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对巨核系细胞加快凋亡的作用机制及HCMV感染引起血小板减少症的机制,采用巨核细胞株CHRF 288-11和HCMVAD169株共同培养,用PCR检测HCMV IEA,用形态学观察、DNA Ladder形成及Annexin V/PI流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况.结果显示:HCMV AD169株的不同浓度病毒组(10-3,10-2,10-1)均能显著抑制CHRF细胞的生长.在感染7天后,3组细胞的活率水平分别是77%,73%和68%,而对照组为98%.用流式细胞仪检测Annexin V/PI,在感染7天后,10-3,10-2和10-1病毒组凋亡细胞的百分数是(21.3±2.49)%,(25.8±3.65)%和(31.4±3.91)%,对照组则为(3.68±1.47)%.凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染后时间的延长而增高,二者呈依赖关系.形态学观察和DNA Ladder的形成进一步证实了凋亡细胞的存在,用PCR确定了在CHRF细胞内有HCMV IEA的表达.结论:HCMV可直接感染巨核系细胞并加重它的凋亡.
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巨细胞病毒感染在抽动障碍中的临床意义初探
目的：探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在抽动障碍中的临床意义。方法：应用PCR基因扩增技术对66例抽动障碍患儿进行血液HCMV检测，并测定74例正常儿童作为对照。结果：抽动障碍患儿HCMV检出阳性率(26%)明显高于对照组(3%)，差异有显著性(p＜0.01)，抽动障碍三种类型间HCMV感染阳性率无显著性差异(p＞0.05)。结论：HCMV感染与抽动障碍发病有关。
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人巨细胞病毒感染与孕妇脐血ADAMTS13蛋白酶活性相关性研究
目的 研究人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染与晚孕妇女脐血血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13)活性的相关性.方法 选择2014年10月份至2015年10月份在河南省人民医院产科住院分娩的470例健康晚孕孕妇,于分娩时采集脐血,PCR法检测脐血HCMV DNA和mRNA水平,残余胶原结合试验法检测脐血中ADAMTS13的活性,ELISA法检测脐血血友病因子(vWF)抗原水平.结果 470例孕晚期孕妇中,脐血HCMV DNA阳性率7.65％(36/470),其中21例HCMV mRNA阳性,阳性率58.3％ (21/36);HCMV DNA阴性孕妇(正常对照组,n=70) ADAMTS13活性为82.4±12.3％,显著高于宫内感染组(60.4±16.7％,P＜0.001);HCMV mRNA阳性病例ADAMTS13活性为(51.3±15.9％),显著低于HCMV mRNA阴性病例(65.8±19.1％,P＜0.01);正常对照组脐血vWF水平为(105.6±25.4) ng/ml,显著低于宫内感染组[(147.2±29.1)ng/ml;P ＜0.05];HCMV mRNA阳性病例脐血vWF水平为(161.3 ±23.3)ng/ml,显著高于HCMV mRNA阴性病例[(130.5±26.4) ng/ml;P =0.034];宫内感染组病例ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平呈显著负相关(r=-0.343,P=0.014).结论 孕妇脐血ADAMTS13活性下降与HCMV宫内感染密切相关.
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应用外部引导序列切割人巨细胞病毒UL148 RNA的研究
目的 研究人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)临床病毒株UL/b'区域UL148基因功能及抗HCMV治疗新策略,应用DNA性质外部引导序列(External guide sequences,EGS)在体外抑制UL148 RNA的表达.方法 应用RNA structure生物软件模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS,并合成EGS核苷酸序列.应用PCR方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148 RNA及M1RNA,其中UL148以32p标记并进行体外转录.混合EGS、M1RNA及UL148 RNA于切割反应液中,反应1h后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果.结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58 ～72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57与UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的茎环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可切割UL148RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具.
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人巨细胞病毒UL138含多个B细胞表位病毒样颗粒的构建及鉴定
目的 利用毕赤酵母系统表达HPV16 L1-HCMV UL138含多个B细胞表位片段的嵌合病毒样颗粒,并评价其免疫效应.方法 选择富含B细胞表位的HCMV UL13896-138片段,构建毕赤酵母真核表达质粒pPIC3.5K/HPV16L1/UL13896-138.线性化后的重组质粒电转化GS115毕赤酵母,甲醇诱导HPV16 L1/UL13896-138蛋白表达,采用肝素亲和层析法纯化嵌合VLPs,并加以鉴定.将纯化的嵌合VLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠血清的UL138特异性抗体水平.结果 经PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13896-138嵌合重组质粒.经甲醇诱导后,SDS-PAGE和Western Blot证实重组酵母菌裂解产物存在目的蛋白.肝素亲和纯化后,透射电镜观察到了直径大约55nm的病毒样颗粒.免疫小鼠血清的ELISA结果显示,HPV16 L1-HCMV UL138B细胞表位嵌合病毒样颗粒能诱导小鼠产生较高水平的UL138特异性IgG抗体.结论 以HPV16 L1为载体,利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功制备了HCMV UL138含多个B表位片段的嵌合病毒样颗粒,免疫小鼠可产生较高水平的体液免疫反应.
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人巨细胞病毒IE蛋白功能的研究进展
人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HCMV)感染普遍存在,根据社会经济状况不同,人群中血清学阳性率可达40%-100%不等.HCMV基因组约250kb,可编码多种蛋白质,但UL123编码的IE1和UL122编码的IE2是表达量多且重要的.IE1被认为是HCMV及宿主细胞基因表达的反式激活因子,也是病毒感染后先合成的蛋白,对于低MOI感染时病毒基因的表达及复制不可或缺.IE2是HCMV溶解周期的主要活化因子,对病毒复制具有不可替代的作用.作为HCMV表达丰富的蛋白,IE蛋白不仅在对抗宿主细胞的固有及特异性免疫方面有重要作用,还可通过多种机制影响病毒的潜伏及活化状态.
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套式聚合酶链反应检测豚鼠巨细胞病毒宫内感染
人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染是导致出生缺陷的重要因素之一,其致病机制迄今尚未阐明.本研究建立豚鼠巨细胞病毒(GPCMV)宫内感染模型,将灵敏性和特异性均较高的套式聚合酶链反应(N-PCR)用于研究检测,报道如下.
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乌鲁木齐地区HIV感染人群中CMV-IgM和抗HCV调查
人巨细胞病毒(HCMV)在新生儿及幼小婴儿的疾病中作为病原并不少见,在成人中则很少发病,临床无任何症状,多为潜伏感染,而在艾滋病病毒(HIV)感染者和艾滋病(AIDS)患者中HCMV是威胁生命的常见的机会性感染之一.为探讨新疆HIV与CMV之间及抗HCV(丙肝抗体)的感染情况.新疆维吾尔自治区人民医院将近几年收集到的抗HIV阳性血清进行CMV-IgM,抗HCV检测其结果如下.
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人巨细胞病毒与大肠癌相关关系的研究
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)与宫颈癌关系十分密切，但与大肠癌关系的报道较少。本文就HCMV感染及大肠癌p53基因与HCMV感染的相关性进行了研究。 1 材料和方法 1.1 标本来源 收集1994年～1996年白求恩医科大学中日联谊医院外科切除大肠癌组织共60例，存放于-80℃。均经病理证实，并结合临床进行了Dukes分期和组织分化程度分型。患者年龄在38～72岁之间，男42例，女18例。 1.2 DNA模板制备取-80C冻存组织约1 g，经组织研磨器研磨，加入1mlDNA裂解缓冲液置55℃ 1 h，95C 15mmin，经13 000 r／m min离心10 min，上清即为DNA模板。再0.8％～1％低电渗琼脂糖凝胶电泳，以排除降解的模板。
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人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡的实验研究
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染可以通过胎盘垂直传播,导致流产、畸形、死胎、新生儿神经系统及其他脏器的损害,已成为影响胎儿及新生儿生长发育的常见病原.现已证实,许多病毒性疾病的发生与凋亡失常有关[1].我们采用流式细胞技术对HCMV感染细胞进行细胞周期和凋亡分析,以探讨HCMV对宿主细胞的影响及机理.
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人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡的实验研究
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染可以通过胎盘垂直传播,导致流产、畸形、死胎、新生儿神经系统及其他脏器的损害,已成为影响胎儿及新生儿生长发育的常见病原.现已证实,许多病毒性疾病(如病毒性肝炎和艾滋病等)的发生与凋亡失常有关[1].但目前有关HCMV与细胞凋亡的关系报道尚少.我们采用流式细胞技术对HCMV感染细胞进行细胞周期和凋亡分析,以探讨HCMV对宿主细胞的影响及机理.
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人巨细胞病毒的病因研究进展
人疱疹病毒中有些是人类重要的病原体,这类病毒所引发的人类疾病,在临床上呈一系列症状,有些病毒宿主范围很广,另一些又比较狭窄,这是一类很古老的病毒.经科学界长期观察,发现寄生于脊椎动物宿主的各种疱疹病毒,自鱼类起与宿主一起经历了从两栖类、爬虫类、鸟类、哺乳类,历经亿万年演化,在这一系列宿主体内都选择出各自特异的疱疹病毒.在人体独特的小生态环境中,在某种人体特殊类型的细胞中,也潜伏着对人特异的人疱疹病毒亚型.
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TSG-6对HCMV感染引起的TNF-α和IL-6表达水平的抑制作用
目的 研究肿瘤坏死因子α刺激基因-6 (tumor necrosis factor α stimulated gene 6,TSG-6)在人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染所致的炎症过程中的作用及机制.方法 用HCMV感染人胚肺成纤维细胞(MRC-5)和视网膜上皮细胞(ARPE-19),并设正常细胞对照组和灭活病毒感染组.采用qRT-PCR和Western blot检测各组TSG-6 mRNA和蛋白表达水平.将重组人TSG-6蛋白(recombinant human TSG-6 protein,rhTSG-6) 100 ng/ml作用于HCMV感染的MRC-5细胞作为rhTSG-6干预组,采用ELISA方法检测细胞培养物上清中TNF-α和IL-6表达水平,用IFA及Western blot检测NF-κB核定位及其蛋白表达水平,并设正常细胞对照和病毒对照.结果 HCMV感染MRC-5细胞72h时,TSG-6 mRNA表达量为细胞对照组的19倍,在感染96h时TSG-6 mRNA表达达高峰,为细胞对照组的376倍;HCMV感染ARPE-19细胞96h时,TSG-6 mRNA表达量为细胞对照组的15倍,在120h时为细胞对照组的354倍.Western blot结果证实,TSG-6蛋白表达水平在相应时间点也随之升高.rhTSG-6作用于HCMV感染的MRC-5细胞后与病毒对照组相比,TNF-α、IL-6水平明显下降(P＜0.05),且TSG-6能抑制核转录因子(nuclear factor-kappaB,NF-κB)的核移位及蛋白的表达.结论 TSG-6参与HCMV引起的炎症反应,抑制HCMV相关炎性因子水平的表达并影响NF-κB的核定位.
关键词： 人巨细胞病毒 肿瘤坏死因子α刺激基因-6 核转录因子-κB
