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凝固酶阴性葡萄球菌重新鉴定及耐药分析
目的:研究凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的临床分布特点及耐药特性.方法:用传统的生化鉴定方法,对临床各种标本分离出的577株CNS进行种的鉴定和药敏试验.结果:分离到18种CNS,其中表皮葡萄球菌占44.5%,溶血葡萄球菌占21.0%,人葡萄球菌占8.1%,头葡萄球菌占7.6%.青霉素耐药率85.1%.甲氧苯青霉素耐药葡萄球菌占46.8%(270/577),没有发现耐万古霉素菌.结论:临床各种标本CNS中,表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌为优势菌.用新生霉素和木糖进行分组试验,可简化鉴定程序.治疗MRCNS感染首选万古霉素为宜.
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山西临汾地区葡萄球菌临床分布及耐药性分析
目的 了解山西临汾地区临床感染葡萄球菌的分布特点及耐药趋势.方法 采用API系统鉴定细菌,用ATB STAPH5板条进行药物MIC敏感试验,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)用头孢西丁纸片扩散法(K-B法)筛选,并用WHONET 5.4 软件进行统计学分析.结果 338株葡萄球菌中,检出金黄色葡萄球菌196株,占58.0%,凝固酶阴性葡萄球菌142株,占42.0%.MRSA和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(methicillin-resistant coagulase-negtive Staphylococcus,MRCNS)的平均检出率分别为30.1%、81.0%.葡萄球菌主要分布在泌尿外科(19.8%)和ICU(13.0%).感染标本中葡萄球菌则以伤口分泌物(47.6%)、痰(31.7%)中分离率较高.对甲氧西林敏感的葡萄球菌对除青霉素、红霉素外的多数测试的药物仍较敏感,而MRCNS对复方磺胺甲噁唑、克林霉素、诺氟沙星耐药率分别达73.0%、67.0%、62.6%.MRSA对β-内酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类、氨基糖苷类、克林霉素和四环素的耐药率均大于80%,但对复方磺胺甲嗯唑耐药率低(15.2%).未发现对万古霉素、替考拉宁、达福普汀、呋西地酸耐药的葡萄球菌.结论 临汾地区MRSA分离率低,耐甲氧西林的葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococus,MRS)耐药严重且呈多重耐药,必须加强MRS耐药监控,大限度降低其耐药性.
关键词： 葡萄球菌属 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐药性 药物敏感性试验 -
新型防污染注射器的制作与应用
输液是目前医院常见的治疗方法之一,大多数护理人员加药时不知不觉地采用了“右手抓握式”操作手法,此手法省时省力,提高了工作效率,临床使用的加药注射器活塞杆为正十字筋板形状,周边大直径略小于针管的孔径,在使用20ml以上的注射器抽药时活塞杆中后段极易被手指污染,推进药物时与针管内壁接触,从而污染无菌药液.有研究[1]表明,注射器活塞杆污染细菌种类多为微球菌属、葡萄球菌属、毛霉菌、枯草芽胞杆菌.注射器活塞杆污染的致病菌如通过输液进入人体,尤其是儿童、年老体弱者就会引起输液反应,造成医院内感染,增加患者的痛苦.
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葡萄球菌克林霉素耐药状况分析及微稀释法诱导表型检测方法评价
目的 评估葡萄球菌克林霉素耐药状况,评价微稀释法检测诱导型克林霉素耐药的临床应用价值.方法 葡萄球菌进行菌种鉴定,采用双纸片扩散法和微稀释法检测诱导型克林霉素耐药,分析克林霉素耐药分布,比较评价诱导型耐药检测方法.结果 159株葡萄球菌中,克林霉素的直接耐药率为33.3%(53/159),敏感率为22.60%(35/159);红霉素耐药、克林霉素敏感率为44.6%(71/159),其中克林霉素诱导型耐药率为25.8%(41/159).甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)克林霉素总耐药率高达94.4%.金黄色葡萄球菌克林霉素总耐药率(包括诱导型耐药菌株)、红霉素耐药、克林霉素敏感中克林霉素诱导型耐药率均明显高于凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)(49/71 vs.45/88,χ2=4.483,P<0.05;21/23 vs.20/48,χ2=13.733,P<0.001),MRSA克林霉素总耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)(17/18 vs.32/53,χ2=5.786,P<0.05),而甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)与甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MSCNS)克林霉素总耐药率比较差异未见统计学意义(P>0.05).双纸片扩散法和微稀释法检测诱导型克林霉素耐药两种方法符合率100%,一致性检验:Kappa=1.000,P<0.001.结论 葡萄球菌克林霉素总耐药率及诱导型耐药率均很高,特别是金黄色葡萄球菌,提示常规微生物检验工作中必须进行克林霉素诱导试验,笔者推荐采用微稀释法参与药敏自动化检测,快速排除克林霉素潜在性耐药,为指导临床正确使用抗生素提供参考,减少临床克林霉素治疗失败.
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SEA和喉癌MAGE-A3构建的真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA经过电穿孔转染在小鼠体内的转录
目的：检测真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA经过电穿孔转染在小鼠中的转录。方法将葡萄球菌肠毒素A（staphylococcal endotoxin A，SEA）和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated antigen A3， MAGE-A3），构建成基因共表达的真核质粒 pMAGEA3-IRES-SEA。将pMAGEA3-IRES-SEA用电转染的方法免疫BALB/C小鼠单侧股四头肌，每2周1次，每次注射50μg，共免疫3次。末次免疫2周后，取注射部位组织，用荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测目的基因在注射部位肌肉中的转录情况。结果在实验小鼠注射部位的骨骼肌内检测到 SEA、MAGE-A3基因转录mRNA。结论所构建的pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒，可通过电转染的方式，在小鼠体内能有效地转录。这为研究该质粒通过小鼠的体内转录蛋白的表达，诱导机体细胞免疫、体液免疫来清除喉癌，奠定了理论基础。
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43株利奈唑胺耐药葡萄球菌耐药机制研究
目的：了解我国耐利奈唑胺葡萄球菌的耐药形势，探讨耐利胺唑胺菌株的耐药形成机制，为临床合理使用抗生素提供理论依据。方法收集2009至2012年全国9家医院分离的所有非重复的利奈唑胺耐药葡萄球菌共43株。通过微量肉汤稀释法测其MIC值，PCR方法检测是否携带cfr基因以及是否发生23S rRNA基因Ⅴ区突变，Southern blot验证cfr基因是否在质粒上，质粒全基因组测序分析cfr基因周围环境。结果43株利奈唑胺耐药葡萄球菌大部分为多重耐药菌株，大部分菌株携带cfr基因和发生23S rRNA G2576T突变，cfr基因位于质粒上且其周围基因环境存在IS256或IS21－558插入序列、Tn558转座子可移动基因元件。结论获得cfr基因或23S rRNA G2576T突变是导致葡萄球菌对利奈唑胺耐药的主要机制，cfr基因位于质粒上，并且其周围存在可移动基因元件，可导致cfr基因在不同菌株或菌种间传播。（中华检验医学杂志，2016，39：848－851）
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葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究
目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素对克林霉素诱导耐药率及诱导耐药基因.方法按美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散方法测定并判读金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,并以D试验测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型,聚合酶链反应检测诱导耐药基因.结果甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素同时耐药分别占62.7%和54.8%.D试验阳性占所检测葡萄球菌的17.7%. 在单一纸片红霉素耐药而克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中,D试验阳性即对克林霉素具有诱导耐药性者分别为67.6%和45.3%. 红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,占74.5%.结论临床微生物室开展D试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素.
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凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定与苯唑西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌检测准确性
目的 评价凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)菌种鉴定与苯唑西林耐药凝固酶阴件葡萄球菌(MRCNS)检测的准确性.方法 139株临床分离CNS,经ID 32 STAPH鉴定到种,用头孢西丁(FOX)、苯唑西林(OXA)纸片扩散法检测MRCNS,以Slidex MRSA detection乳胶凝集法检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)作为参考方法.结果 139株CNS鉴定为8个种,依次为溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、耳葡萄球菌、模仿葡萄球菌、沃氏葡萄球菌.FOX纸片法总的敏感度和特异度为99.0%和86.0%;OXA纸片法总的敏感度和特异度为91.7%和74.4%.影响FOX纸片法敏感度的菌种为1株表皮葡萄球菌;影响其特异度的菌种包括木糖葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌;而影响OXA纸片法敏感度的菌种包括溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、模仿葡萄球菌、耳葡萄球菌;影响其特异度的菌种包括人葡萄球菌、模仿葡萄球菌、木糖葡萄球菌、耳葡萄球菌、腐生葡萄球菌、沃氏葡萄球菌.结论 FOX纸片法检测MRCNS准确性因菌种不同有所差异,尤其应关注木糖葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌的影响.建议检测MRCNS时,尽可能将CNS鉴定到种,视菌种必要时用PBP2a或mecA基因予以确认.
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利奈唑胺对肠球菌属和葡萄球菌属的体外抗菌活性研究
利奈唑胺为一种合成的(口恶)唑烷酮类抗菌药物,通过阻碍核糖体形成起始复合物从而抑制细菌蛋白质合成起始阶段,发挥抗菌作用,对革兰阳性球菌包括多重耐药的葡萄球菌有较好的抗菌活性,具有口服生物利用度高的特点.利奈唑胺自2000年临床使用以来,在治疗多重耐药的阳性球菌引起的感染方面起到了非常重要的作用[1].
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甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌的RAPD分型研究
目的建立随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌(MRSH)的分型方法.方法收集本院2002年4月至2003年4月临床分离的MRSH 81株.共设计了5组引物进行RAPD,电泳条带采用SPSS 13.0软件分析,根据树状图分型.结果除引物H12和M13组无法扩增出条带外,其余的4种引物均可以将81株MRSH进行分型.其中引物ERIC2将其分为13型,而引物ERIC1R将其分为8型.两种引物均可以辨别出主要流行株.结论 RAPD技术采用引物ERIC2对MRSH分型具有快速、敏感、稳定性高等特点.在有适合引物的条件下,RAPD可以作为判断MRSH医院感染流行的初筛工具.
关键词： 甲氧西林抗药性 随机扩增多态DNA技术 葡萄球菌属 -
基因多态性分析在凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定中的应用
目的建立快速凝固酶阴性葡萄球( CNS)菌种的基因鉴定方法.方法对培养获得的、经Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph鉴定系统鉴定为CNS的100株临床分离菌株和质控菌株应用tRNA基因间长度多态性PCR分析(tDNA-PCR)和肠杆菌基因间相同序列(ERIC)两种分子生物学方法进行常见的CNS菌种鉴定,同时改良实验条件,并将tDNA-PCR及ERIC-PCR两种分子生物学方法的鉴定结果与传统的Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph鉴定系统进行比较.结果 tDNA-PCR及ERIC-PCR两种分子生物学方法对质控菌株及经Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph系统鉴定的12种临床分离CNS菌株均可以得到各自不同的电泳图谱,它们可以快速、准确地对常见12种CNS,包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、华纳葡萄球菌、模仿葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、心耳葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、头状葡萄球菌、施氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌和里昂葡萄球菌进行菌种鉴定.从图谱的肉眼观察看,12种CNS均可以很好地鉴别开.tDNA-PCR及ERIC-PCR与Auto Scan-4和API Staph鉴定系统的一致率为95%.经Taq酶聚合后进行电泳,tDNA-PCR在100～600bp产生6～10条DNA片段;ERIC-PCR在100～1200 bp仅产生1～8条DNA 片段.结论 tDNA-PCR及ERIC-PCR是快速、敏感的CNS菌种鉴定的方法,具有高度的特异性.
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16S～23SrDNA内转录间隔区序列聚合酶链技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌
目的采用分子生物学技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌(CNS).方法用16S～23SrDNA内转录间隔区序列PCR(ITS-PCR)技术,对6株质控菌和171株已通过AutoScan-4微生物分析仪鉴定过的CNS临床分离株进行分型鉴定.结果质控菌株及经API Staph系统确证的11种CNS得到各自不同的ITS-PCR电泳类型,建立了该技术在本实验室的CNS初级数据库,包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、华纳葡萄球菌、头部葡萄球菌、孔氏葡萄球菌解脲亚种、松鼠葡萄球菌、耳葡萄球菌和模仿葡萄球菌.只有松鼠葡萄球菌表现了多态性.该ITS-PCR数据库对所研究的临床株的识别率为93.57%(160/171),准确率达93.75%(150/160).API Staph系统证明,ITS-PCR法鉴定结果较为准确,AutoScan-4微生物分析仪检测CNS至少有9.36%(16/171)是不确切的.结论 ITS-PCR证明是一项有价值,对CNS可选用的简便、快速、可靠,廉价的分子生物学鉴定技术.
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表皮葡萄球菌附属基因调节子对生物膜形成的调节作用
目的研究表皮葡萄球菌agr对其生物膜形成的调节作用,并探讨其调节机制,以期发现新的生物膜形成调节途径,完善agr调节网络.方法用同源重组方法构建表皮葡萄球菌agr阴性突变株,从体外、体内不同角度观察agr阴性突变株与其agr阳性野生株生物膜形成能力和致病力的差异.结果表皮葡萄球菌agr阴性突变株与其agr阳性野生株相比,黏附能力、致病力均明显增强;在agr阴性突变株中许多蛋白表达是增加的,如ClpP(ATP-dependent Clp protease)、DadL(D-alanine-D-alanine ligase)等;在agr阴性突变株中基因clpP、atlE 和 dadL mRNA的表达分别是agr阳性野生株的6.4、7.6和3.9倍.而fbe、ica mRNA的表达在agr阴性突变株和agr阳性野生株中差异无统计学意义.结论 agr基因可以下调表皮葡萄球菌生物膜的形成,是生物膜形成的抑制因子.agr基因对生物膜的下调作用可能不但通过下调atlE的表达,还可能同时下调clpP的表达; agr对生物膜的下调作用并不通过调节fbe和ica途径;首次发现agr可以通过调节dadL来调节细菌细胞壁的合成.
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葡萄球菌属16S-23S rRNA基因区间的图谱研究
为了探索快速敏感检测细菌的方法,我们利用细菌16S-23S rRNA基因区间的特点对临床常见的31个菌种进行了研究,发现标准的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均呈特异的1 200、600 bp两条带,为了了解葡萄球菌的16S-23S rRNA基因区间的条带分布情况,我们对75株代表11个菌种的葡萄球菌进行了研究,现将结果报告如下.一、材料和方法
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临床分离肠球菌属耐药性及耐药基因的研究
肠球菌属是医院感染的重要病原菌,可造成泌尿系统感染、伤口感染、腹膜炎、心内膜炎和败血症等.据中国全国医院感染监控网及美国医院感染监测系统(No socomial Infections Surveillauce System,NISS)监测显示,肠球菌属已成为医院感染的重要病原菌,在中国是革兰阳性菌感染中除葡萄球菌属外的第二大菌属.
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等温扩增检测耐药基因mecA方法的建立及其临床应用
目的建立环介导的等温扩增快速检测葡萄球菌耐药基因mecA的方法.方法利用包被有SPA单克隆抗体的磁珠富集样品中的金黄色葡萄球菌,快速提取其DNA, 用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因mecA,扩增条件为65°C 保温1 h.在反应过程中,荧光探针与mecA基因的扩增产物互补序列结合,产生荧光,通过检测反应管中的荧光值来判定结果.结果该方法的低检测限为10 CFU/ml,与M-H培养基苯唑西林药敏试验结果相比较,灵敏性99%,特异性90.9%;而与PCR方法比较,灵敏性100%,特异性100%;试验时间缩短为1 h.结论该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,适用于检测临床标本中的MRSA.
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葡萄球菌对利奈唑胺的耐药机制及其流行病学
葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌(SA)和凝固酶阴性的葡萄球菌属(CoNS),是临床上常见、重要的革兰阳性球菌之一.万古霉素及替考拉宁是针对耐甲氧西林的SA(M RSA)、耐甲氧西林的CoNS(MRCoNS)感染的一线抗菌药物,但随着MRSA MIC值的漂移、异质性万古霉素中介的SA(hVISA,指万古霉素MIC值为1～2 mg/L,但其中不到10-6的菌株为能在万古霉素浓度＞2 mg/L的培养基中生长的MRSA菌株,与万古霉素治疗反应差、MRSA感染患者预后不佳密切相关)、万古霉素中介的SA乃至万古霉素耐药的SA的出现,美国感染病学会推荐利奈唑胺、达托霉素及替加环素等用于这类感染的抗菌治疗[1-2].
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维持性腹膜透析患者腹膜透析相关性葡萄球菌腹膜炎的发生率及危险因素分析
目的 探讨维持性腹膜透析患者腹膜透析相关性葡萄球菌腹膜炎的发生率及相关危险因素.方法 以中山大学附属东华医院腹膜透析中心192例患者为研究对象.根据腹膜透析液培养结果分成腹膜炎组与正常组.采用多因素logistic回归分析腹膜透析相关性葡萄球菌腹膜炎的危险因素.结果 共16例(8.3％)患者发生腹膜透析相关性葡萄球菌腹膜炎.致病菌以表皮葡萄球菌为主,占50.0％(8/16).治愈12例(75.0％),死亡1例.高龄(OR=1.35,95％ CI 1.16～7.68,P=0.026)、糖尿病(OR =3.34,95％ CI 1.90～6.54,P＜0.001)、低血红蛋白(OR=1.68,95％ CI 1.21～6.48,P=0.022)及低白蛋白血症(OR=1.04,95％ CI1.02～1.07,P=0.036)是腹膜透析相关性葡萄球菌腹膜炎的相关危险因素.结论 腹膜透析相关性葡萄球菌腹膜炎发生率较高;高龄、低血红蛋白、糖尿病及低白蛋白血症是其相关危险因素.
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金黄色葡萄球菌侵袭性感染分离株细胞毒素与侵袭毒素基因研究
金黄色葡萄球菌不仅可致皮肤软组织感染,并可致败血症、骨髓炎、关节炎等侵袭性感染[1-4].为了解金黄色葡萄球菌细胞毒素基因和侵袭性毒素基因的状况以及与患者临床特征的关系,我们对南京医科大学附属淮安第一医院住院患者无菌部位体液分离的一组金黄色葡萄球菌,进行了10种细胞毒素基因与9种侵袭毒素基因检测,并对患者的临床资料进行了分析.
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阳性报警时间对成人凝固酶阴性葡萄球菌颅内感染鉴别诊断研究
目的：探讨阳性报警时间（TTP）对凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）颅内感染鉴别诊断应用价值。方法回顾性分析中南大学湘雅医院2015年1至12月脑脊液培养出凝固酶阴性葡萄球菌成人患者124例，分为颅内感染组（n ＝70）和脑脊液培养污染组（n ＝54）。比较颅内感染组和脑脊液培养污染组 TTP 的差异，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算 ROC 曲线下的面积（AUC），同时比较不同种类 CNS 阳性患者的 TTP。采用 SPSS18．0统计软件对数据进行分析。结果颅内感染组患者 TTP 为（23．5±7．5）h，而 CSF 培养污染组 TTP 为（37．6±10．5）h，两组 TTP 比较差异具有统计学意义（t ＝－8．717，P ＝0．000）。TTP 的 AUC 为0．854，当 TTP 临界值取27．94 h 时，敏感性为72.7％，特异度为91．4％，阳性预测值为90．0％，阴性预测值为72．2％。表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、头状葡萄球菌引起的颅内感染与脑脊液培养污染相比，TTP 差异有统计学意义（Z ＝－4．496、－2．322和－2．399，P ＜0．05或＜0．01）。结论TTP 有助于早期鉴别诊断 CNS 引起的颅内感染和样本污染，对于不同类型 CNS 造成的颅内感染也有一定鉴别意义。
