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短发夹状RNA沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响
目的 探讨H-ras基因对涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)生物学特性的影响以及作为SACC基因治疗靶点的可行性.方法 构建H-ras靶向H-ras-shRNA质粒及阴性对照HK-shRNA质粒,经脂质体介导转染SACC-M细胞,G418筛选建立稳定转染细胞株,将细胞分为H-ras-shRNA转染组、HK-shRNA转染组及未转染细胞组.绘制细胞生长曲线检测细胞体外增殖能力;反转录聚合酶链法分析各组细胞中H-ras基因mRNA表达变化;荧光蛋白定量分析H-ras蛋白表达水平;流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡情况;裸鼠成瘤实验检测细胞在体内的成瘤能力,分析H-ras沉默对细胞增殖及凋亡的影响.结果 成功构建重组质粒并导入SACC-M细胞,建立稳定表达质粒的细胞株.H-ras-shRNA质粒能有效降低SACC-M细胞中H-ras表达,H-ras基因抑制率为61.80%,H-ras蛋白表达抑制率为62.76%.细胞增殖活性明显受抑,G0G1期比例增加;流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率为30.82%,显著高于阴性对照组及空白对照组的4.29%和4.16%.H-ras沉默细胞的裸鼠体内成瘤能力降低.结论 H-ras靶向shRNA干扰质粒能持续有效的抑制SACC-M细胞中H-ras基因及蛋白水平的表达,降低细胞体内外的增殖活性,并能有效诱导细胞凋亡.
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ras、p16、p53和幽门螺杆菌感染与胃癌发生关系的研究
采用聚合酶链反应-单链构象多肽性分析法(PCR-SSCP)及HP尿素酶快速检测法,随机对46例慢性浅表性胃炎、39例慢性萎缩性胃炎、39例胃溃疡、36例胃癌的胃粘膜活检标本进行了ras、p16、p53及HP检测,并对其在胃癌致癌机制中的相互关系进行研究.结果表明, ① ras及p53在胃癌标本中的检出率明显高于萎缩性胃炎、胃溃疡及浅表性胃炎(P<0.05);② p16在胃癌标本中的检出率远远低于基本正常胃粘膜及其他胃良性病变(P<0.05);③HP在胃癌标本中的检出率明显高于萎缩性胃炎、胃溃疡及浅表性胃炎(P<0.05);④ras和p53阳性表达的各种胃良、恶性疾病中的HP阳性检出率均高于p16阳性表达的各种胃良、恶性疾病中的HP阳性检出率(P<0.05).提示ras、p53、p16和HP感染在胃癌致病机制中可能具有重要作用,并可能有相互协同作用.
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N-ras基因在K562细胞中的表达研究
目的探讨N-ras基因突变及表达水平与慢性粒细胞白血病发病的关系.方法以慢粒细胞株K562细胞为研究对象,采用RT-PCR和直接测序的方法对N-ras的表达水平及突变进行检测.结果 RT-PCR结果示N-ras基因在K562细胞中表达升高,直接测序结果表明N-ras基因在K562细胞中不存在突变.结论 N-ras基因在K562细胞中高表达,而其高表达机制与突变无关.
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改良法对NSCLC患者癌组织及外周血K-ras基因常见突变位点的检测
目的 建立改良的酶切富集PCR-焦磷酸测序技术,检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中K-ras基因的突变情况.方法 配对提取43例NSCLC患者的癌组织和血浆DNA,采用酶切富集PCR-焦磷酸测序技术检测K-ras基因第2外显子12及13密码子点突变,利用混合突变/野生型K-ras基因的细胞系(A549/HCC827)测定该方法的灵敏度.结果 NSCLC患者癌组织中K-ras突变率为9.3％(4/43),血浆中K-ras突变率为7.0％(3/43),均为12密码子突变,突变一致性达75％.混合细胞系检测显示,酶切富集PCR-焦磷酸测序技术的检测灵敏度达0.1％.结论 酶切富集PCR-焦磷酸测序技术具有快速、准确、灵敏度高等优点,可用于临床NSCLC患者K-ras突变的筛查.
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Spred的结构及生物学特性
Spred家族是一组Sprouty相关的酪氨酸激酶结合蛋白,它对多种生长因子诱导的Ras-ERK信号途径有负调控作用.Spred家族各成员在染色体上定位和体内表达均不相同,但都具有保守的结构域:C端Sprouty相关结合域(SPR)、中央c-Kit结合域(KBD)和N端Enabled/VASP同源结构域(EVH-1).Spred调节细胞发育、运动以及增殖等生命活动,参与肿瘤的转移、造血调控、过敏反应以及骨的形成等病理生理学过程.本文主要综述Spred家族的结构及功能特点以及对细胞增殖信号途径的调节作用.
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大鼠过度训练时RAS的变化意义及Captopril的保护作用
雄性Wistar 大鼠随机分成4组:(1)对照(C)组;(2)一般游泳训练(NS)组;(3)过度负荷(O)组;(4)过度负荷+Captopril(OC)组.游泳训练共8周,建立模拟过度训练动物模型.测定了各组肾素-血管紧张素(RAS)活性,并对心肌细胞线粒体钙含量、丙二醛(MDA)含量、膜荧光偏振度值、血清肌钙蛋白(TnT)含量以及心肌组织HE染色光镜等指标进行了探讨.对RAS各主要成分研究表明,在过度训练状态下,循环和心脏局部RAS异常活跃,大鼠心肌发生严重损害是个别现象,大鼠心肌存在钙过载和线粒体膜自由基损伤,上述三者之间有密切相互关系.提示RAS在过度训练心肌损害中有重要意义,使用Captopril后对心肌损害有保护作用.
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MHRA警告阿利克仑的不良反应
阿利克仑(aliskiren)是诺华公司开发的具有新型药理作用机制的抗高血压药,为作用于肾素血管紧张素醛固酮系统(RAS)的第二代肾素抑制剂[1].2007年分别在美国和欧盟批准上市.2008年1月,由阿利克仑与氢氯噻嗪组成的复方制剂也获得了FDA的上市许可.目前SFDA已批准阿利克仑进入新药临床研究阶段.
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Rho激酶在中枢神经系统疾病中的作用
Rho激酶是一群小分子单体的Ras(an abbreviation of RAt Sarcoma)相关蛋白[1].Rho蛋白根据其结构域和功能的不同可以分为6个亚家族,其中主要包括Rac(Ras -related C3 botulinum toxin substrate)、RhoA(Ras homolog gene family member A)和Cdc42( cell division control protein 42 homolog)这3个亚家族.在哺乳动物体内,Rac又可以分为Rac1(Ras - related C3 botulinum toxin substrate 1),Rac2(Ras -related C3 botulinum toxin substrate 2),Rac3( Ras - related C3 botulinum toxin substrate 3)3种同工酶的形式.其中Rac1和Rac3在人体内分布比较广泛,Rac2则特异性地存在于造血细胞中[2].Rac有二种存在形式:即有活性的三磷酸鸟嘌呤核苷(guanosine triphosphate)结合形式与无活性的二磷酸鸟嘌呤核苷(guanosine diphosphate)结合形式.Rac和其他小G蛋白一样,可被鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor)、鸟嘌呤核苷酸释放抑制因子(guanine nucleotide release inhibition factor)以及鸟嘌呤-5＇-三磷酸酶激活蛋白(GTPase - activating protein)调节.Rac是Rho激酶的一个重要成员,它在许多信号通路中发挥了非常关键的作用.早期对于Rac蛋白的研究主要集中于它对细胞骨架的调控上.后来随着研究的深入,发现了许多其他方面的功能,包括对囊泡转运,细胞极性和细胞周期的调控等[3].近10年发现,Rac在学习与记忆中也发挥了许多作用.
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益肾降压方对肾实质性高血压降压作用及血压相关物质影响的实验研究
目的:研究益肾降压方降低RPH大鼠血压、改善肾功能的作用及机制.方法:采用大鼠5/6肾切除术法建立RPH模型.动态测定血压、肌酐、尿素氮,并在给药8周后测定血浆PAR、AⅡ、TXB2、6-酮-PGF1a的含量.结果:各剂量益肾降压方均可降低RPH大鼠的BP、Cr.但对RPH大鼠BUN未见影响;各剂量益肾降压方可显著降低血浆PAR、AⅡ,同时还可显著降低TXB2含量,升高血浆6-酮-PGF1a含量.结论:益肾降压方可降低RPH大鼠的血压,并对肾脏具有保护功能;益肾降压方的降压作用和对肾脏的保护功能是通过影响RPH大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统而完成.
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K-ras 基因第1外显子点突变与37例子宫内膜癌临床情况的关系
目的:研究中国子宫内膜癌患者的瘤组织中K-ras基因第1外显子(含第12,13密码子)的突变率,以及突变与子宫内膜癌临床情况的关系,探讨K-ras基因突变在子宫内膜癌发生中的作用.方法:37例子宫内膜癌的石蜡和部分冰冻标本行PCR扩增K-ras基因第1外显子(含第12,13密码子),经PCR-SSCP银染法检测突变.结果:37例子宫内膜癌患者中有12例存在K-ras基因突变,突变率为32.4%(12/37例).FIGO分期Ⅲ期、组织类型为腺鳞癌的患者突变率较高,在细胞低分化、侵肌1/2以上和绝经后的患者中突变比例也较高.石蜡和冰冻组织标本结果一致.结论:K-ras基因突变率在日、美两国内膜癌患者中不同.该组患者中的突变率与日本相似,高于美国.说明此种差异不仅存在于日本和美国患者之间,可能也存在于亚洲人与北美洲人之间.不同的基因背景,生活条件及内源性和外源性雌激素作用可能对K-ras基因突变率有影响,并引起了不同的临床表现.
关键词： 子宫内膜肿瘤/遗传学 K-RAS 点突变 基因 RAS -
胃癌与幽门螺杆菌感染及p53、ras 基因突变的关系
目的 探讨幽门螺杆菌(Hp) 感染和p53、ras 基因突变在胃癌发生中的作用.方法 采用聚合酶链反应- 单链构象多态性分析法(PCR-SSCP) 进行p53( 外显子7) 及ras( 第12 密码子) 进行基因突变分析,并应用快速尿素酶试验(RUT) 法和HE 染色法检测Hp 感染.结果 83 例胃癌组织中,p53 基因与ras 基因发生突变阳性率分别为67.47%、63.86%,男女无差异,有远处转移中二者阳性率更高,而对照组中均无p53 与ras 突变发生.胃癌组织中Hp 感染率为71.08%,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),且Hp 阳性感染组织中p53 和ras 的突变率明显高于Hp 阴性组织,差异均具有统计学意义(P<0.01 ;P<0.05).结论 Hp 感染和p53、ras 基因突变可能是胃癌的发生机制之一,Hp 感染可导致多基因联合突变.用PCR-SSCP 法联合检测胃黏膜组织中p53、ras 基因的突变将有助于胃癌诊断和预测胃癌远处转移.
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癌基因Ras及其常见突变与P53协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的研究
目的 探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响.方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组细胞分别转染以上质粒后感染P53腺病毒.用奥沙利铂处理12 h后分别用钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)染色、实时荧光定量PCR(Real-timePCR)、免疫印迹(WB)检测各组凋亡水平.结果 Calcein-AM/PI染色显示,Ras V12转染组凋亡率[(16.8±1.7)％]显著高于Ras[(8.3±1.5)％,P＜ 0.01]和Ras N17转染组[(4.4±1.6)％,P＜0.01],Ras N17转染组凋亡率低(P=0.016);P53腺病毒处理3组凋亡率均显著增高,仍以Ras V12转染组凋亡率[(25.9±2.2)％]为高,Ras N17转染组低[(7.6±1.2)％].Real-time PCR和WB显示,P53存在与不存在条件下,Ras V12转染组Bax mRNA和蛋白表达均显著高于Ras和Ras N17转染组;Bcl-2水平则与Bax水平相反(P均＜0.05).结论 Ras突变体Ras V12过表达能够引起奥沙利铂作用下细胞凋亡的增加,而突变体RAS N17能够降低细胞凋亡;P53与Ras有协同作用,能够提高Ras的促细胞凋亡作用,提高细胞对奥沙利铂化疗药的敏感性.
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肾动脉狭窄的超声规范化检测与结果分析
肾动脉狭窄(renal artery stenosis,RAS)是继发性高血压的常见原因之一.彩色多普勒超声已成为RAS患者的首选影像学检查方法.但是,由于肾动脉位置深在,相对较细,且受肠道气体和肥胖等多种因素的影响,因此彩色多普勒超声能否快捷、有效地筛查RAS仍然存在争议.作为一项理想的筛查方法,应该是准确、快捷和简便的.
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肾动脉狭窄与缺血性肾病的诊治
肾动脉狭窄(renal artery stenosis,RAS)是指肾脏动脉主干或主要分支的血管内径狭窄,当狭窄大于60%～70%,导致.肾内血流动力学改变,肾内发生缺血性病变,继发肾素血管紧张素系统激活,导致肾血管性高血压和肾功能不全.
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番茄红素对糖尿病大鼠肾脏RAS系统的调节作用
目的 研究番茄红素对糖尿病大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统(RAS)的调节作用及其机制.方法 选用12周龄的雄性瘦型及肥胖型Zucker大鼠(2型糖尿病大鼠模型)各16只,随机分为瘦大鼠+溶剂组,肥胖大鼠+溶剂组,瘦大鼠+番茄红素组及肥胖大鼠+番茄红素组.分别给予溶剂(蒸馏水)或番茄红素[40mg/(kg·d)]口服喂养6周.代谢笼分析各组大鼠24h尿液;ELISA测定各组大鼠血清氧化应激(MDA,GSH)水平变化;放射免疫法检测各组大鼠肾脏组织肾素(Renin)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量;分别采用qRT-PCR及Western blot法检测各组大鼠肾脏组织AT1受体mRNA及蛋白的表达水平.结果 与瘦大鼠相比,校正体重因素后,肥胖糖尿病大鼠24h基础尿钠排泄显著降低(P＜0.05),同时其体内氧化应激水平明显增高,即MDA活性水平显著升高,而GSH活性水平显著降低(P＜0.05).肥胖糖尿病大鼠肾脏Renin及AngⅡ水平也较瘦大鼠明显升高(P＜0.05).此外,肾脏AT1受体的mRNA及蛋白表达水平在肥胖糖尿病大鼠肾脏也显著高于瘦大鼠(P＜0.05).通过给予番茄红素处理6周后,可明显改善肥胖糖尿病大鼠上述指标的变化,降低肾脏Renin、AngⅡ水平及肾脏AT1受体的表达(P＜0.05),而番茄红素对瘦大鼠无相应作用.结论 番茄红素通过降低氧化应激水平,下调肥胖糖尿病大鼠肾脏RAS系统活性,从而促进血压的降低.
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免疫荧光及激光共聚焦技术检测热盐水致大鼠萎缩性胃炎胃黏膜组织细胞HSP60及ras蛋白表达
目的 研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(GAG)胃黏膜组织细胞HSP60及ras表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法 采用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型,选取大鼠腺胃胃窦组织行激光扫描共聚焦显微镜标本制备并对组织细胞结构的变化进行动态观察.结果 正常组胃黏膜组织细胞未见阳性表达,热盐水组在第12周,在细胞质中可见HSP60及ras表达,呈均质颗粒状,到24周、32周及65周时表达更加明显.双标记中可见HSP60和ras共同表达.结论 热盐水长期灌胃可导致胃黏膜出现萎缩,HSP60和ras表达增加,提示在胃黏膜萎缩形成过程中,HSP60与ras蛋白参与了重要的细胞分化调节过程.
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BRAF、TERTp、RAS、RET/PTC、PAX8/PPAR在甲状腺癌中的研究进展
甲状腺结节是内分泌系统的常见病,判别甲状腺结节的良恶性对患者的预后评估有着极其重要的意义.甲状腺细针穿刺抽吸检查对甲状腺结节性质的判断具有重要意义,但仍存在一定的局限性.随着对甲状腺癌分子机制研究的深入,相关基因突变检测有助于判定甲状腺结节的性质及对甲状腺癌进行危险分层评估.BRAF和RAS基因突变是甲状腺癌中研究较为成熟的分子标志物,对甲状腺癌诊断及预后有较高的评估价值.TERTp、RET/PTC、PAX8/PPARγ等相关基因的研究近年来逐渐增多,其为甲状腺癌的早期诊断、预后评估提供了更多的参考.
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乙肝病毒X基因对肝癌Bel7402细胞ras基因表达的影响
目的 探讨乙肝病毒X基因(HBx)对人肝癌细胞原癌基因ras表达水平的影响.方法 将pcDNA3.1载体与HBx基因连接构建真核表达载体pcDNA3.1-HBx,采用脂质体介导转染人肝癌细胞Bel7402,以转染空载体poD-NA3.1的Bel7402细胞为对照,于转染后2、4、8、16h收集细胞,提取细胞总蛋白并用Western blot技术检测肝癌细胞内n-Ras蛋白表达水平.结果 与转染空载体pcDNA3.1的Bel7402对照组相比,转染重组表达载体pcD-NA3.1-HBx的Bel7402细胞Ras蛋白表达水平在第2小时明显降低,第4小时Ras蛋白的表达水平仍有降低趋势,但比第2小时表达量有所增加;第8小时和第16小时,Ras蛋白的表达水平与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HBx对人肝癌Bel7402细胞Ras蛋白表达有明显影响,HBx持续表达可能对Ras表达有促进作用.
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BRAF表达量与神经胶质细胞瘤恶性程度的相关性研究
神经胶质细胞瘤是常见的原发性颅内肿瘤,其发病机制并不十分清楚.各种原癌基因与抑癌基因的突变或表达量的改变.BRAF基因,与神经胶质细胞瘤的发生密切相关.但BRAF表达量是否与神经胶质细胞瘤的恶性程度相关,未见相关报道,本研究在48例恶性程度不同的神经胶质细胞瘤中,通过免疫组织化学检测了BRAF基因的表达量改变.结果 显示BRAF基因在恶性程度高的神经胶质细胞瘤中表达量较高,这提示我们BRAF基因的表达量可能可作为肿瘤恶性程度和预后的一个判断指标,也为干预BRAF基因表达,抑制神经胶质细胞瘤恶变提供了实验基础.
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地尔硫卓对增殖血管平滑肌细胞的原癌基因表达的影响
目的 观察地尔硫卓(Dil)对增殖血管平滑肌细胞(VSMC)的原癌基因c-myc、c-fos、c-jun和ras mRNA表达的影响.方法 将组织贴块法培养的大鼠胸主动脉VSMC随机分为5组,即空白组、模型组和Dil 1、2、3组(浓度分别为10-5、10-6、10-7 mol/L),应用MTF检测增殖能力,用流式细胞术检测VSMC的增殖指数,用rt-PCR检测c-myc、c-fos、c-jun和ras mRNA的表达.结果 与模型组比较各浓度Dil都能抑制VSMC增殖,PI值均显著下降(各组PI值分别为21.53±1.72、28.63±0.96、15.95±0.37、19.28±0.94、20.33±0.67;P＜0.05);Dil 1、2组c-myc、c-fos、c-jun mRNA的表达显著减少(模型组和Dil 1、2组的c-myc/GAPDH值分别为2.454±0.03、1.509±0.05、1.660±0.04,c-fos/GAPDH值分别为0.0046±0.0004、0.0023±0.0003、0.0038±0.0005,c-jun/GAPDH值分别为1.950±0.03、1.077±0.03、1.725±0.03;P＜0.05),ras mRNA的表达显著增加(模型组和Dill、2组的ras/GAPDH值分别为1.941+0.03、3.811±0.02、2.501±0.02;P＜0.05).结论 Dil抑制VSMC增殖机制可能与下调原癌基因c-myc、c-fos、c-jan的表达和上调ras的表达有关.
