食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法的建立

目的 建立食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法.探索该方法的细胞采集途径、细胞输注部位和流式检测技术参数.方法 从外周血和腋窝淋巴结分别提取分离出单个核淋巴细胞,经CFSE染色后分别将荧光细胞输注食蟹猴外周血和手掌大鱼际下;经过1、2、3h后从外周血和淋巴结再次提取其中的单个核淋巴细胞,用流式细胞仪检测此样本中荧光细胞数量比例,并优选染色浓度、时长和流式检测技术参数.结果 CFSE佳染色浓度为1 μmol/L,佳染色时长为15 min;细胞悬液输注1、2、3h后血管通道组中荧光细胞比例平均值依次为2.37％、0.48％、0.01％,而淋巴管通道中荧光细胞比例显著高于血管通道,平均值依次为12.77％、3.31％、0.07％.结论 使用淋巴管道系统进行淋巴细胞的采集示踪,与传统的从血液系统示踪方法比较,可以显著提高可监测靶细胞的数量,可以直观、量化、动态地了解淋巴细胞在体内的变化状态,此方法可重复性高,是一种稳定的食蟹猴体内免疫标记示踪方法.

CT灌注成像诊断超急性期脑梗死的实验研究

目的 探讨CT灌注成像技术(CTP)对超急性期脑梗死诊断的应用价值.方法 选择21只健康的食蟹猴,运用介入技术建立急性脑栓塞动物模型,分别在栓塞前及栓塞后2 h行脑血管造影、CT平扫及CTP检查.使用CT Perfusion软件分别计算出患侧CBF,CBV,MTT及健侧镜像区CBF,CBV,MTT的比值rCBF,rCBV,rMTT,后应用统计学软件对数据进行分析.结果 21只动物中,17只栓塞成功;在CT灌注参数图像能够明确显示出病灶区,表现为病灶区MTT延长和CBF、CBV的下降.缺血坏死区和半暗带区与健侧镜像区的rCBF分别为0.35±0.13,0.57±0.18(P＜0.05).rCBV分别为0.61±0.15,0.89±0.24(P＞0.05);rMTT分别为4.77±2.34,2.51±1.00(P＜0.05).结论 介入栓塞技术建立的猴超急性脑栓塞动物模型具有操作简单且栓塞准确、可靠的优点;CTP检查可快速、准确、无创地评价猴局部脑缺血模型的脑血流动力学变化,显示梗死、缺血的部位和范围,为溶栓治疗提供诊断依据.

食蟹猴肝纤维化不同阶段对丙泊酚代谢的影响

目的:通过制备食蟹猴肝纤维化模型观察不同程度肝纤维化对丙泊酚代谢的影响.方法:雄性食蟹猴14只,采用四氯化碳皮下注射、高脂饮食和饮酒精造模,于造模前、造模后第4、8、12、16周末将动物分为M0、M1、M2、M3、M4组,以氯胺酮+东莨胆碱+咪达唑仑肌注麻醉动物30 min后输注丙泊酚8 mg/(kg·h)60 min,B超引导下肝脏穿刺,HPLC法测丙泊酚血浆浓度,记录苏醒时间.结果:S0、S1、S2、S3、S4期分别为14、12、10、8、7只,S4期与S3、S2、S1、S0期比较,TP、A/G改变明显(P＜0.05)；食蟹猴苏醒时间在S4期比前四期明显延长(P＜0.05)；丙泊酚血浆浓度在苏醒时无变化(P＞0.05),其余时间的血浆浓度随肝纤维化程度加重而增大,S4期与前4期比较明显增加(P＜0.05).结论:食蟹猴早期肝纤维化不影响丙泊酚的代谢;但是肝纤维化S4期,丙泊酚的代谢减慢,停药后食蟹猴苏醒时间延长.

一起进食含黄曲霉毒素饲料引起食蟹猴急性中毒死亡病例报告

目的了解某实验动物养殖场食蟹猴(非人灵长类实验动物)发生急性中毒死亡与进食该批饲料的相关性,从中能查找出死亡原因,吸取教训.方法通过流行病学调查,临床观察,尸解及病理切片观察,原粮玉米做真菌毒素的检测等.结果当去除该批饲料喂养猴群,中毒死亡即逐渐仃止;尸解所见肝脏明显肿大,浅黄色稍硬,切片观察肝小叶呈炎症性坏死、脂肪变性,肝小胆管显慢性炎症;黄曲霉毒素B1检测结果2000μg/kg.结论证实这是一起典型的高含量黄曲霉毒素玉米饲料引发的食蟹猴急性中毒死亡事件.通过这起事件,对今后各养殖场如何防止这类事件的发生提供了有益的参考意见,值得借鉴.

食蟹猴沙门氏菌带染率及生物学特性的实验观察

沙门氏菌是灵长类实验动物 (猴 )及人类共患的一种腹泻病的病原。实验动物常因感染沙门氏菌引起腹泻而导致实验的失败。为保证实验用猴的质量，对饲养的食蟹猴进行了沙门氏菌带染率、生物学特性、血清型别及对不同种抗菌素的敏感度作了实验观察，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1998～ 1999年采集本中心饲养的食蟹猴粪便 5500份。沙门氏菌属“ O” A～ F多价诊断血清及 30种分型因子血清，购自兰州生物制品所，有效期至 2000年 12月。抗菌素药敏纸片为浙江省军区后勤卫生防疫所生产的市售成品，有效期至 2000年 12月。

复方石斛解酒护肝口服液对食蟹猴急性酒精性肝损伤的保护作用

目的:观察复方石斛解酒护肝口服液对食蟹猴急性酒精性肝损伤的影响.方法:食蟹猴随机分为4组:模型组(蒸馏水,2 ml/kg),复方石斛解酒护肝口服液高剂量组(4 ml/kg)、中剂量组(2ml/kg)和低剂量组(1 ml/kg),每组5只.各组动物在实验室适应性饲养1周后,根据对应剂量连续灌胃14 d,每日1次.于末次灌胃给药1h后给酒1.5 g/kg造成急性酒精性肝损伤模型.用乙醇检测分析试剂盒测定各组动物血液中的乙醇浓度;用全自动生化分析仪测定血浆中谷丙转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)和谷丙酰转肽酶(GGT).结果:复方石斛解酒护肝口服液高、中剂量组不仅能显著降低血液中乙醇的达峰浓度(P＜0.01),还能加快机体对乙醇的消除(P＜0.01);低剂量组虽对血液中乙醇的达峰浓度影响不大(P＞0.05),但也能加快机体对乙醇的消除(P＜0.01).复方石斛解酒护肝口服液高、中、低剂量组的ALT、GGT明显低于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),而对AST影响不大(P＞0.05).结论:复方石斛解酒护肝口服液具有良好的解酒、护肝作用.

局部脑缺血食蟹猴动物模型的建立

目的:构建局部脑缺血食蟹猴动物模型,从而为局部脑缺血的研究提供必要的条件.方法:选择10只健康的食蟹猴,采用血管介入法从股动脉插管,将微导管超选至大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)M1分支,注入自体血栓堵塞其血管、阻断其血流.结果:栓塞后,通过数字影像血管造影系统(DSA)照影MCA M1分支血管显影不良;栓塞1 h后CT灌注成像可见急性局部脑缺血病灶;48 h后进行CT平扫可见低密度陈旧性局部脑缺血病灶.对2例尸体进行解剖,取出大脑组织TTC染色呈阳性;其余动物清醒后均表现出不同程度的脑缺血症状与体征.结论:用超选MCA自体白色血栓可建立稳定的猴局部脑缺血模型,因该动物模型是目前接近临床病例的模型,对脑卒中的发生发展机制的研究、诊断及治疗,特别是溶栓治疗有着切实的临床前期应用价值.

免疫抑制剂干预对食蟹猴感染HBV的血清学影响

[目的]研究免疫抑制剂干预对食蟹猴感染乙型肝炎病毒(HBV)的血清学影响.[方法]筛选健康的成年食蟹猴24只,随机分为空白对照组、氢化可的松组、环孢素组、环磷酰胺组,每组6只.空白对照组注射HBsAg阴性正常血清,氢化可的松组、环孢素组和环磷酰胺组使用相应免疫抑制剂处理2次后开始接种HBV携带者血清,每日观察动物行为变化,干预4周后,取血样检测乙肝病毒全套、HBV-DNA、肝功能,并取肝脏组织行病理检测.[结果]空白对照组未见HBsAg、HBsAb、HBV-DNA阳性发生.环孢素组、环磷酰胺组中,部分动物检测出HBsAg阳性,部分食蟹猴出现HBV-DNA阳性表达并持续,与空白对照组比较有统计学意义(P＜0.05);感染动物均出现ALT、AST显著升高.[结论]经环孢素及环磷酰胺免疫抑制剂干预后可以提高食蟹猴感染HBV的成功率.

肾动脉狭窄性高血压食蟹猴模型的建立和评价

目的 建立肾动脉狭窄性高血压食蟹猴模型,并制定其评价标准.方法 选取7只正常成年雄性食蟹猴,使用丝线及针头狭窄肾动脉,运用两肾一夹(2K1C)法,制作肾动脉狭窄性高血压食蟹猴模型,并对模型进行评价,同时检测血生化相关指标.结果 食蟹猴血压变化:术后1周血压开始升高,4周后达到稳定水平,平均血压为(18.70±1.30)/(10.62±0.91)kPa,食蟹猴术后血压显著高于术前(P<0.05),并且可维持至本实验持续时间8周.食蟹猴血生化变化:尿素、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶术后7 d明显升高,与术前比较差异有统计学意义(P<0.05);总胆固醇与葡萄糖升高不明显,与术前比较差异无统计学意义(P>0.05).造模成功率约为71.43％.结论 运用2K1C法成功建立肾动脉狭窄性高血压食蟹猴模型,该模型经济、操作简单易行、成功率高、稳定性好.

壮医方白花丹消蛊汤对肝纤维化食蟹猴的干预作用及其机制

目的 探讨壮医方白花丹消蛊汤对肝纤维化食蟹猴的干预作用及其机制.方法 12只食蟹猴随机分为空白组、模型组、白花丹消盅汤低剂量组、高剂量组,每组3只.采用四氯化碳复合高脂饮食诱导法建立食蟹猴肝纤维化模型,造模成功后空白组及模型组给予生理盐水灌胃,白花丹消蛊汤低剂量、高剂量组分别给予1.0 g/(kg·d)、4.0 g/(kg·d)的汤剂.8周后检测各组食蟹猴外周血ALT、AST、AKP、TBIL、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)及Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)水平,肝穿获取肝组织标本,行天狼猩红染色后观察肝组织胶原变化.结果 与模型组相比,白花丹消蛊汤高剂量组食蟹猴血清ALT、AKP、TBIL水平更低,且血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及COL-Ⅳ含量更低,肝纤维化胶原异常增生程度得到改善.结论 壮医方白花丹消蛊汤具有抗肝纤维化作用,可能是通过减少胶原异常增生发挥作用.

STZ诱导的中老年食蟹猴糖尿病模型的初步分析

目的：初步探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的中老年食蟹猴糖尿病模型造模前后的体重、血糖和血脂等指标的变化。方法5只健康中老年食蟹猴，根据年龄分为两组：低剂量组(按体质量计，50 mg/kg STZ)4只和高剂量组(按体质量计，100 mg/kg STZ)1只。通过静脉快速推注STZ的方法来诱导中老年食蟹猴发生糖尿病，造模前后对动物体重、血糖和血脂等指标进行跟踪检测。结果通过静脉快速推注STZ能够在短时间内快速升高血糖并持续保持高血糖的状态，在外源胰岛素注射干预的情况下造模动物长存活可达233 d，发病过程中出现了“三多一少”的糖尿病典型症状，并伴有高甘油三酯血症的发生。结论尽管与人类糖尿病的病理过程存在一定差异，造模发病较为急促，成模率较高，但STZ静脉注射诱导中老年食蟹猴发生糖尿病能够为人类糖尿病的基础研究及相关药效学评价提供食蟹猴动物疾病模型，仍具有一定的科研应用价值。

食蟹猴外周血淋巴细胞亚群的流式法分析验证和正常参考值测定

目的：建立并验证流式细胞法检测食蟹猴外周血淋巴细胞亚群（辅助性 T 细胞、细胞毒性 T 细胞、B细胞、NK 细胞）的方法，建立正常参考值范围，比较性别和年龄差异。方法 EDTA‐K2抗凝管采集食蟹猴血样，采用两组三色荧光抗体组合 CD3‐FITC／CD4‐PerCP／CD8‐PE 、CD3‐PE‐CYTM 5．5／CD16‐PE／CD20‐FITC 进行细胞分类检测。测定批内差异和批间差异以考察方法精密度；并分别对血样室温放置6 h ，4℃放置24 h ，检测处理后样本4℃放置24h 的样品稳定性进行考察。进一步扩大检测样本数量，确立不同性别、年龄段的正常参考值范围，并比较性别和年龄差异。结果精密度检测各指标批内变异度为2．51％～12．51％，批间变异度为1．32％～8．63％。血样经不同处理和放置不同时间后的测定结果与新鲜采集血样后的检测结果偏差均小于10％。确立了1．5～2岁和3～5岁两个年龄段，雌雄食蟹猴淋巴细胞亚群的正常参考值。比较发现，3～5岁与1．5～2岁相比，外周血 NK 细胞（CD3－ CD16＋）亚群比例升高；B 淋巴细胞（CD3－ CD20＋）亚群有年龄和性别差异。结论食蟹猴外周血淋巴细胞亚群检测的血液样本在室温放置6 h ，4℃放置24 h 内检测，或处理后4℃放置24 h 内检测，结果稳定性良好。不同年龄段和性别食蟹猴的淋巴细胞亚群正常值范围具有差异，提示选择食蟹猴进行相关研究评价时应予以注意。

LC-MS/MS法测定辛伐他汀在食蟹猴体内的血药浓度及药动学特征研究

目的:建立以LC-MS/MS法测定辛伐他汀在食蟹猴血浆中药物浓度的方法,并研究其药动学特征.方法:取食蟹猴6只,灌胃辛伐他汀8 mg·kg-1在24 h内采集血浆样品,用LC-MS/MS法测定辛伐他汀血药浓度,并计算相关药动学参数.结果:辛伐他汀检测浓度的线性范围为0.5～50μg·L-1,定量下限为0,5μg·L-1,相对回收率为99%～109%,日间、日内RSD均小于6.67%.主要药动学参数t1/2为(4.5±1.0)h,Cmax为(9.0±5.5)μg·L-1,AUC0-∞为(52.39±12.52)μg·h·L-1.结论:所建方法灵敏、准确、专属性强,适用于辛伐他汀在食蟹猴体内血药浓度的测定,辛伐他汀在食蟹猴体内药动学符合单房室模型.

食蟹猴脑缺血过程中皮层谷氨酸水平动态变化的研究

目的 探讨食蟹猴脑缺血过程中皮层细胞外谷氨酸水平动态变化.方法 取3只(7.3±1.5)岁的食蟹猴,将大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA) M1段近端夹闭1h后放开,建立食蟹猴脑缺血性模型,并通过磁共振成像检查(MRI)、神经功能缺损评分评价临床表现.在MCA M1夹闭前、夹闭过程中、夹闭放开后和术后第1、2周于手术同侧大脑皮层运动区同一部位,运用电化学微电极传感器技术检测该部位谷氨酸水平.结果 短期夹闭MCA M1段的食蟹猴大脑皮层运动区谷氨酸水平在MCA M1夹闭过程中较夹闭前上升(P =0.003);夹闭放开后较夹闭过程中的变化差异无统计学意义(P =0.877);术后第1周较夹闭放开后下降(P =0.004);术后第2周较术后第1周的变化差异无统计学意义(P =0.085).结论 脑缺血时可能加速皮层细胞外谷氨酸的释放,再灌注后谷氨酸的释放可能有所减弱或处于动态平衡.

鱼腥草注射液对食蟹猴类过敏实验研究

目的:评价鱼腥草注射液及其辅料吐温80(Tween80)和羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的致敏性.方法:通过静脉注射不同剂量药液,观察药后食蟹猴的行为学变化,检测给药前、后血清中组胺的含量.结果:高浓度Tween80诱发显著的行为异常,组胺显著升高.含有Tween80的鱼腥草注射液原制剂在所用浓度及剂量下,给药后未出现明显的行为异常,但组胺明显升高.HP-β-CD溶液及含有HP-β-CD的鱼腥草新制剂未见明显行为异常和组胺升高.结论:Tween80具有明显的的致敏性、毒性和溶血性,特别是在提高浓度时表现更明显.给予高浓度、大剂量的HP-β-CD,未出现明显的致敏性、毒性和溶血性等不良反应.

人工饲养三种猕猴属实验动物生理指标初步测定

目的:测定并比较人工饲养条件下三种猕猴属实验动物的生理指标,为实验动物研究与应用提供参考数据.方法:分组测量人工繁育的藏酋猴(Macaca thibetana)23(♂21,♀2)只,恒河猴(Macacus Rhesus)10(♂9,♀1)只,食蟹猴(Macaca fascicularis)10(♂5,♀5)只,各自的体重、身长、腿长、臂长、尾长、胸围、腹围、呼吸频率等生理指标,使用SPSS17.0软件进行统计分析,比较各组间的差异.结果:三种猴随年龄增大,体重、胸围和腹围增大,尾长差异显著(P＜0.001),藏酋猴性格平静,呼吸频率低于恒河猴和食蟹猴(P＜0.001),其它几项测量无显著差异(P＞0.05).结论:灵长类猕猴属的同属动物生物学特性有极高一致性,也存在差异性.

食蟹猴血液学和生化学指标数据背景资料的建立

目的:药品非临床安全性评价研究是新药研发的核心内容之一.为安全、有效、质量可控的进行实验,必须建立起相应实验动物的血液学和生化学检测数据背景资料,特别是生物制品、基因工程类药物的研发,灵长类动物是首选的实验动物之一.对近年我室进行的食蟹猴长期毒性试验正常对照组动物的血液学和生化学指标数据进行统计整理,目的在于建立本室食蟹猴血液和生化指标数据背景资料,为新药非临床安全性评价研究工作提供准确可靠科学的参考依据.

食蟹猴皮下注射重组人甲状旁腺素rh-PTH(1-34)毒性研究

目的:采用重组人甲状旁腺素rh-PTH(1-34)对食蟹猴进行皮下注射给药六个月,停药恢复一个月长期毒性试验.旨在观察连续皮下注射给予甲状旁腺素rh-PTH(1-34)对试验动物所产生的毒性反应,中毒症状,毒性作用靶器官,确定无毒性反应剂量,为临床安全用药提供参考.

LHRH-PE40静脉注射给予食蟹猴12周的毒性试验

慢病毒介导的多基因联合转染BMSCs注射治疗食蟹猴膝关节炎的实验研究

目的 通过慢病毒介导环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)-siRNA、聚蛋白多糖酶1(Aggrecanase-1)-siRNA、IGF-1基因联合转染BMSCs,将其注射至食蟹猴骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型关节腔,探讨对OA相关炎性因子及关节软骨的影响.方法 取髋关节OA患者自愿捐赠骨髓组织,分离培养BMSCs.采用基因重组技术构建COX-2-siRNA、Aggrecanase-1-siRNA和IGF-1过表达基因的慢病毒载体,以佳感染复数40转染第3代BMSCs(病毒组),以空慢病毒转染培养作为对照(空病毒组),以正常BMSCs作为正常对照组.倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,并行细胞计数;取转染培养1周细胞,RT-PCR检测COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 mRNA的表达.取健康3岁食蟹猴9只,按照Hulth造模法于右膝制备OA模型后,随机分为3组(n=3).模型制备术后6周,病毒组及空病毒组右膝关节腔内分别注射对应的1 mL BMSCs(约1×107个),空白对照组注射1 mL生理盐水.以左膝作为正常对照组.注射后观察动物一般情况;1、4、6周取双膝关节液,ELISA检测前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、IL-1、Aggrecanase-1、IGF-1浓度;6周时MRI及大体观察检查膝关节软骨改变,并取材行组织学、免疫组织化学染色观察,以及RT-PCR检测COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 mRNA表达.结果 转染后两组细胞形态及生长曲线无明显差异.RT-RCR检测,与空病毒组、正常对照组比较,病毒组COX-2、Aggrecanase-1表达明显降低,IGF-1表达明显增加(P＜0.05).细胞注射后各组动物均存活至实验完成.注射后1、4、6周,病毒组PGE2、Aggrecanase-1、IL-1浓度明显低于空病毒组、空白对照组,但IGF-1浓度明显增高(P＜0.05);但3组以上指标浓度均显著高于正常对照组(P＜0.05).MRI检查示,与正常对照组比较,病毒组、空病毒组及空白对照组关节面均出现异常高密度影,但病毒组区域小.大体观察及组织学观察见,病毒组、空病毒组及空白对照组关节软骨符合早期OA改变,但病毒组修复程度优于空病毒组及空白对照组,根据改良Pineda评分标准的组织学评分亦较低,比较差异均有统计学意义(p＜0.05).免疫组织化学染色示,病毒组细胞质染色较空病毒组及空白对照组深,偶尔可见棕黄色颗粒,软骨细胞较多.RT-PCR检测,与空病毒和空白对照组相比,病毒组COX-2、Aggrecanase-1 mRNA表达明显降低,IGF-1 mRNA表达明显增高(P＜0.05).结论 慢病毒介导的多基因转染BMSCs可以有效抑制食蟹猴早期OA模型膝关节腔内COX-2和Aggrecanse-1的表达,增强IGF-1的表达,降低膝关节内炎性因子浓度,有效保护关节软骨.