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鹅去氧胆酸对有丝分裂原刺激的小鼠免疫细胞功能的影响
鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA),是多种动物胆汁均含有的初级胆汁酸,其化学成分为3α,7α-二羟基-5β胆烷酸,相对分子量为392.58×103,是一种白色针状结晶.CDCA具有利胆、降低胆固醇分泌和溶解胆固醇结石等功能,目前临床上主要用于治疗胆固醇型胆结石.
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甜菜碱促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用的钙通道机制研究
目的:研究甜菜碱促进小鼠脾淋巴细胞的增殖作用与钙通道的关系.方法:采用清洁级BALB/c小鼠分离小鼠脾淋巴细胞后体外培养的方式获得小鼠脾淋巴细胞,分为阴性对照组、Con A组、甜菜碱0.04,0.4,4,20 mmol·L~(-1)组.分别采用MTT法观察甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用,流式细胞术测定甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞周期的变化,激光共聚焦扫描显微镜观察甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞内钙浓度的变化及加入不同钙通道阻滞剂后细胞内钙浓度的变化.结果:4,20 mmol·L~(-1)甜菜碱体外作用于小鼠脾淋巴细胞12 h促进小鼠脾淋巴细胞增殖,0.04,0.4,4,20 mmol·L~(-1)甜菜碱分别体外作用于小鼠脾淋巴细胞24,48 h均促进小鼠脾淋巴细胞增殖,以4 mmol·L~(-1)甜菜碱作用24 h效果好;4 mmol·L~(-1)甜菜碱作用小鼠脾淋巴细胞4,6,18,24 h能促使小鼠脾淋巴细胞由G_0/G_1期进入S期,并以18 h效果为明显;4 mmol·L~(-1)甜菜碱作用于淋巴细胞6,12,18 h,脾淋巴细胞内Ca~(2+)浓度明显升高(P<0.01),以6 h效果明显;钙通道阻滞剂硝苯地平、地尔硫卓、咪贝地尔、金雀异黄素对甜菜碱升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度没有影响,而维拉帕米、新霉素、肝素、普鲁卡因能阻断甜菜碱升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度.结论:甜菜碱通过升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度而促进小鼠脾淋巴细胞由G_0/G_1期进入S期,促小鼠脾淋巴细胞增殖的作用.细胞内钙离子浓度升高主要通过2个途径:影响G蛋白介导的L-型电压门控钙通道的α_1亚单位而引起外钙内流;影响胞内钙库的IP_3R钙通道和RyR钙通道而引起内钙释放.
关键词: 甜菜碱 小鼠脾淋巴细胞 细胞周期 细胞内Ca~(2+) 钙通道 -
克感利咽口服液对流感病毒感染小鼠脾淋巴细胞释放氧自由基和NO水平的调节作用
流感病毒作为外源性抗原侵入机体,激活巨噬细胞和嗜中性白细胞产生氧自由基已被我们和其他学者的实验所证实[1],而流感病毒感染对次级免疫器官脾脏T、B淋巴细胞产生活性氧和一氧化氮(NO)自由基的体内实验尚未见报道.我们依据本项课题的研究目标和中药复方的作用特点,从中医整体观出发,研究了流感病毒FM1呼吸道感染对小鼠脾淋巴细胞释放氧自由基和NO的影响及其克感利咽口服液对流感病毒感染引起脾淋巴细胞应激升高的调节作用.
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Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选及鉴定
本研究以人B细胞淋巴瘤Daudi细胞免疫的小鼠脾淋巴细胞RNA出发,用基因克隆技术将B细胞全套κ轻链和重链Fd片段基因克隆出来,组装到表达载体pComb3H-SS内并表达到噬菌体表面,构建出Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库.以Daudi细胞为抗原对抗体库筛选后,获得针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系膜抗原的抗体.
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Zn诱导金属硫蛋白(MT)合成对小鼠脾淋巴细胞放射性凋亡的影响
MT是一类富含巯基和金属的小分子蛋白质.因其结构的独特性和功能的多样性,已引起了国内外学者的普遍关注.既往研究证实,Zn可诱导小鼠肝等组织表达MT,但Zn对小鼠胸腺和脾脏等免疫器官MT表达及其生物学作用的研究国内外仅见少量文献报道.为此我们利用胸腺和脾脏MT基因表达的差异性,探讨了MT合成对辐射所致脾脏及胸腺淋巴细胞凋亡的影响.
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碎米花杜鹃的化学成分及其对小鼠免疫细胞影响的研究
目的 研究碎米花杜鹃Rhododendron spiciferum叶的化学成分及其免疫活性.方法 利用多种色谱技术进行化合物的分离纯化,通过各种波谱方法鉴定其化学结构,并用MTT法测定化合物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果 分离鉴定了12个已知的黄酮类化合物,分别为槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷(1)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(2)、二氢槲皮素-3-O-α-阿拉伯吡喃糖苷(3)、落新妇苷(4)、5,7,4'-三羟基一二氢黄酮醇-3-O-α-L-鼠李吡哺糖苷(5)、柚皮素(6)、(2S)-5,7,4'-三羟基-8-甲基黄烷酮(7)、epicatechin-(2β→7,4β→8)-ent-epicatechin (8)、花青素A-1(9)、bis-8,8'-catechinylmethane(10)、儿茶素(11)、表儿茶素(12).化合物8、9、11在一定浓度范围内单独或者协同非特异性丝裂原(ConA或LPS)作用均能显著增强小鼠脾淋巴细胞增殖能力(P<0.05,0.01或0.001).结论 碎米花杜鹃的化学成分为首次报道.相关免疫活性实验表明,化合物8、9、11具有一定的免疫增强作用.
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铅诱导小鼠脾细胞DNA损伤的彗星试验研究
铅作为主要工业和环境污染物之一,对机体免疫细胞DNA损伤及免疫功能具有一定的影响.近年来,慢性低水平铅暴露引起体内细胞DNA损伤及免疫功能的改变从而导致机体许多相关免疫疾病发生及免疫毒性作用已引起越来越多的关注.本研究探讨铅对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤及对脾淋巴细胞增殖转换功能的影响.
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胚胎胸腺移植对BXSB小鼠干扰素γ和白介素4的影响
BXSB小鼠是一种自发产生系统性红斑狼疮(SLE)的动物模型.已有研究表明,将正常胚胎小鼠的胸腺移植于2月龄BXSB雄性小鼠的右肾被囊下后,能明显改善BXSB雄性小鼠肾功能,降低血抗核抗体滴度,延长小鼠寿命,其疗效与地塞米松治疗类似[1].为探讨其作用机制,我们检测了移植后BXSB小鼠脾淋巴细胞培养上清中干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)的含量.
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抗白介素2受体α链单抗及AK细胞治疗肝癌的实验研究
目的:探讨一种新的过继免疫治疗肝癌方法.方法:将肝癌细胞株(H22)接种于近交系BALB/c小鼠皮下,制成荷瘤小鼠模型,用IL-2/AK细胞/抗白介素2受体α链单抗(aIL-2Rα MAb)治疗,以发现其抗肿瘤作用.结果:荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK活性无明显变化,LAK和CTL活性及淋巴细胞刺激指数在联合治疗组均高于其他各组(P<0.01);肝癌皮下结节在联合治疗明显受到抑制,肿瘤小鼠生存期明显延长.结论:
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普氏立克次体120 kDa表面抗原N端和C端重组蛋白的免疫原性研究
将普氏立克次体全细胞抗原和120kDa表面蛋白的N端和C端重组蛋白进行纯化,将纯化后的重组蛋白分别免疫小鼠和家兔.酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫动物血清特异性IgG,发现N端和C端重组蛋白均能有效地诱导小鼠和家兔产生较高水平的特异性IgG,C端重组蛋白刺激小鼠和家兔产生的特异性IgG水平比N端重组蛋白刺激后的特异性IgG水平高.对免疫动物的脾脏细胞作体外淋巴细胞增殖试验发现N端和C端重组蛋白均能诱导较高水平的脾淋巴细胞增殖.对免疫小鼠作足垫肿胀试验,C端重组蛋白比N端重组蛋白诱导更明显的特异性迟发型变态反应.采用RT-PCR方法检测全细胞抗原免疫小鼠脾淋巴细胞被不同抗原刺激后的细胞因子的表达,发现两个重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞均表达了IFN-γ和IL-2两种细胞因子,说明它们可以促使THO细胞向TH1细胞分化.本研究结果证明120kDa表面蛋白的N端和C端重组蛋白均具有良好的特异性体液免疫和细胞免疫原性,可以作为流行性斑疹伤寒亚单位疫苗的候选蛋白.
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PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖药物筛选模型的建立及应用
目的 通过构建重组的小鼠pcDNA3.1(+)-PD-L1质粒,并在真核细胞中进行高表达,建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖药物筛选模型用于免疫调节药物的筛选.方法 以RT-PCR方法扩增得到小鼠的PD-L1全长片段;以pcDNA3.1(+)真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pcDNA3.1(+)-PD-L1;脂质体转染到小鼠成纤维细胞(L929),通过G418筛选得到高表达PD-L1的稳定细胞株并经免疫荧光鉴定;用丝裂霉素处理过的PD-L1高表达细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养;成功建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的模型之后向其中加入不同种类、不同浓度的天然产物提取物,并设复孔.结果 通过Eco RI/Xho I双酶切及测序证实构建的重组质粒pcDNA3.1(+)-PD-LI正确.RT-PCR和免疫荧光方法鉴定重组质粒在L929细胞中高效表达,应用流式细胞术成功建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的模型,并筛选出阻断PD-L1活性的有效药物.结论 获得了稳定高表达PD-L1的细胞,并且用于免疫调节的药物筛选,为免疫调节药物的筛选奠定了实验基础.
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辽东本草牌参灵片增强免疫力功能实验研究
依据卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的“辽东本草牌参灵片”在辽宁省疾病预防控制中心进行了增强免疫力功能实验.结果表明:送检样品对实验动物体重、体重增重、胸腺重/体重比值、脾重/体重比值无明显影响.0.25g/kgBW实验组能促进二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应形成,0.50g/kgBW实验组能提高小鼠脾淋巴细胞增殖能力,各实验组均未能提高小鼠的抗体生成细胞数量及血清的抗体积数,各实验组均未能增强小鼠碳廓清能力,0.50/kgBW实验组能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力,各实验组均能增强小鼠NK细胞活性.
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辽东本草牌人参片增强免疫力功能实验研究
依据卫生部2003年版 《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的"辽东本草牌人参片"在辽宁省疾病预防控制中心进行了增强免疫力功能实验. 结果表明:送检样品对实验动物体重、体重增重、胸腺重/体重比值、脾重/体重比值无明显影响. 各实验组均能促进二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应形成,各实验组均未能增强ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖能力,各实验组均未能提高小鼠抗体生成细胞数量,0.50g/kgBW、0.25/kgBW实验组能提高小鼠血清的抗体积数, 各实验组均未能增强小鼠碳廓清能力,各实验组均未能增强小鼠碳廓清能力,各实验组均未能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力, 0.50g/kgBW、0.25/kgBW 实验组能增强小鼠NK 细胞活性.