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抗人红细胞血型糖蛋白A非凝集性单克隆抗体的研制及其生物特性研究
目的研制优质的抗人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体(MCAB-GPA),因为该抗体是研制快速全血凝集试剂中双功能抗体的关键成份.为在我国研制能诊断多种疾病的快速全血系列诊断试剂创造条件.方法首先用MN亚型GPA(购于美国Sigma公司)免疫小鼠,采用常规杂交瘤细胞技术进行融合和克隆.用EIA和血凝方法进行生物特性鉴定.结果建立了12个MCAB-GPA株.12个抗体株与GPA发生特异性反应,但对A、B、AB和O 4个不同血型的红细胞不产生自凝,属于人红细胞GPA的特异性抗体.在12株抗体中,7株为IgG1亚型,4株为IgG2a亚型,1株为IgG2b亚型.结论本文研制的7株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备,为研制快速全血凝集系列试验奠定了重要的基础.
关键词： 抗体 单克隆/分离和提纯 血型糖蛋白/分离和提纯 红细胞 小鼠 -
抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性
目的:制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性.方法:用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测.结果:3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应.株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合.结论:抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性.
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ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备
目的 制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法 将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法 判断融合蛋白的表达量及纯度.将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株.体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb.用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定.结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5～1×10-7之间.且均有较好的特异性.结论 已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础.
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重组人类神经元14-3-3zeta信号蛋白的纯化及抗体制备
目的制备抗人脑14-3-3 zeta蛋白(31 ku)的多克隆抗体与单克隆抗体,为神经系统退行性疾病的诊断提供标志物.方法用纯化的rh14-3-3zeta蛋白免疫家兔,制备抗14-3-3多克隆抗血清;电洗脱、透析纯化rh 14-3-3/β-半乳糖苷酶融合蛋白,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗rh 14-3-3 zeta单克隆抗体;测定所得抗体效价及其特异性反应.结果得到大量纯化的表达产物;制备的多克隆抗血清双扩效价达1:8～1:64;获得 1株能稳定分泌抗rh 14-3-3 zeta单抗的杂交瘤细胞株,其亚型为IgG1型,该株单抗可与重组14-3-3蛋白发生特异性反应.结论获得了敏感、特异的抗rh 14-3-3 zeta多克隆抗血清及稳定分泌抗rh 14-3-3 zeta单抗的杂交瘤细胞株,为神经系统退行性疾病提供诊断标记.
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抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定
目的制备抗呼吸道合胞病毒(RSV)的单克隆抗体,并对其特性进行系统地鉴定.方法以活的RSV-Long株滴鼻(TCID50为1×10-6,取100TCID50 0.125 ml进行)加RSV感染Hep-2细胞(CPE达～)腹腔注射免疫Balb/c鼠,用细胞融合技术制备能稳定分泌抗RSV的单克隆抗体细胞株.结果细胞融合一次成功,融合率为96%,抗RSV抗体阳性孔率为65%.鉴定1株杂交瘤细胞F3株,染色体数为98条,抗体亚类属IgG1,对RSV抗原特异;在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为1∶128,且具融合抑制活性,腹水融合抑制效价为1∶64.结论 F3株单克隆抗体为抗RSV F蛋白的McAb.
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抗日本血吸虫童虫表膜单克隆抗体的制备
目的为制备分泌抗日本血吸虫感染保护性单克隆抗体细胞株.方法应用杂交瘤技术,将照射致弱尾蚴免疫BALB/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤的细胞融合.结果经两次以上有限稀释克隆化后,抗日本血吸虫童虫表膜抗原阳性率为100%,建立了5株稳定分泌抗童虫表膜单抗的细胞株.杂交瘤细胞诱生腹水,ELISA效价达1:0.64×105～1:1.28×105.初步鉴定单克隆抗体类型分别为IgM、IgG2a和IgG2b.抗原抗体定位于童虫表膜.结论该单抗的制备为进一步研制抗日本血吸虫童虫表膜分子疫苗奠定基础.
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乙型肝炎病毒核糖核酸酶H(HBV-RNaseH)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定
目的建立能稳定分泌抗乙型肝炎病毒核糖核酸酶H1及H2(HBV-RNaseH1及H2)重组蛋白单克隆抗体(McAb),并对其生物学活性进行实验室鉴定.方法用重组HBV-RNaseH1及H2蛋白为抗原免疫BALB/c/小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经有限稀释克隆3次后制备分泌McAb的杂交瘤细胞株,并用酶免疫(EIA)法对其分泌抗体进行初步鉴定.结果融合后的阳性克隆中筛选出4株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,命名为H1C6、D3;H2E2、F4.这4株McAb与HBV-RN aseH1及H2重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的EIA抗体滴度为1:100～1:200,其中2株诱生的同系小鼠腹水滴度为1:800,1:1000.这4株McAb均为IgG1亚型.结论该McAb的制备,可为HBV感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件.
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抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定
运用单克隆抗体技术,以结核杆菌 H37 Rv的培养滤液免疫 Balb/c 小鼠,以 H37 Rv 及 BCG 抗原同时筛选杂交瘤细胞,得到了 7 株稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株,并对它们的特性作了初步鉴定.在 7 株单克隆抗体杂交瘤中,5 株(2C5、2C11、2D1、2E11及3D3)为IgG1亚类,另两株(3C3 及 5 D8)为IgM.腹水经ELISA 检测,效价可达 10-3～10-4,同时应用 ELISA 及免疫印迹试验分析了 7 株单抗的种间反应性,结果 7 株单抗与其它结核杆菌有不同程度的交叉反应,其中 1 株单抗(5D8)与大肠杆菌超声抗原也有明显交叉反应,提示结核抗原组分十分复杂,不仅分支杆菌种间有共同抗原决定簇,甚至与其它种属也有相同或相似的抗原决定簇.将这 7 株单抗用于结核血清学诊断的价值有待进一步评估.
