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一种改进的星形胶质细胞原代培养方法
目的：改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养，旨在通过较简便的方法获得高纯度形态典型的星形胶质细胞，为研究星形胶质细胞的生物学作用提供实验模型。方法以新生大鼠为星形胶质细胞来源，利用不同规格的吸头相互叠套，逐步机械吹打，使细胞分散，制备单细胞悬液；获得的单细胞悬液用差速黏附处理去除成纤维细胞，原代培养14d后，恒温振荡法去除小胶质细胞等杂质细胞；胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）和S100β免疫荧光共染色，鉴定细胞纯度。结果这种改进的星形胶质细胞培养方法，分离培养出星形胶质细胞，阳性率达95%以上。结论采用机械吹打方法建立原代星形胶质细胞培养体系，是一种比较简便、值得推广的可用于体外细胞培养研究工作的有效方法。
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机械吹打法、胰酶消化法分离新生大鼠脑组织神经干细胞效果观察
目的 对比观察机械吹打法、胰酶消化法分离培养新生大鼠脑组织神经干细胞(NSCs)的效果.方法 取出生3天的新生SD大鼠大脑皮质,分别用机械吹打法、胰酶消化法分离培养(分别记为机械吹打组和胰酶消化组),通过免疫荧光法对NSCs进行鉴定和诱导分化;分别于培养第2、5、7天计数细胞球直径及数目;通过MTT法检测两组原代及第3亚代细胞的克隆增殖能力;选取第3亚代细胞进行冻存、复苏,计算细胞复苏后的存活率.结果 两组均可从新生SD大鼠大脑皮质分离得到NSCs,并均可诱导分化为神经元、神经胶质细胞.培养5、7天时,机械吹打组获得的细胞球数量和直径均高于相同培养时间的胰酶消化组(P均＜0.05).机械吹打组原代细胞培养2、5、7天细胞克隆增殖能力均高于相同培养时间的胰酶消化组(P均＜0.05),第3亚代细胞培养2、5天细胞克隆增殖能力均优于相同培养时间的胰酶消化组(P均＜0.05).两组第3亚代细胞冻存、复苏后存活率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 机械吹打法、胰酶消化法均可成功分离培养、诱导分化新生大鼠NSCs,机械吹打法分离培养的NSCs克隆增殖能力高于胰酶消化法.
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C57BL/6J胚鼠听皮层神经干细胞分离培养的研究
目的 探讨酶消化法和机械吹打法对胚鼠听皮层神经干细胞分离培养的影响和作用.方法取孕14 d的C57BL/6J小鼠12只,分成两组,每组6只,于解剖显微镜下分离胚鼠大脑听皮层区域,分别用酶消化法和机械吹打法进行原代培养.用免疫荧光技术对培养后的神经干细胞进行Nestin鉴定,并进行神经干细胞分化能力鉴定,利用CCK-8检测两种方法培养的细胞的增殖情况.结果 利用酶消化法分离下来和增殖形成的神经干细胞明显多于机械吹打法,且形成的神经干细胞球比较规则,酶消化法分离下来的细胞数目为(1.57±0.05)×105个/ml,而机械吹打组分离下来的细胞数目为(1.07±0.04)×105个/ml,差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8检测酶消化法增殖快于机械吹打法,差异有统计学意义(P<0.05).两种方法培养的细胞免疫荧光鉴定Nestin表达均为阳性,诱导分化形成表达β微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)阳性的神经元和表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形胶质细胞.结论 用酶消化法对C57BL/6J胚鼠听皮层神经干细胞进行分离培养优于机械吹打法.听皮层神经干细胞具有自我增殖克隆和多向分化能力.
