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胞外pH值通过BMP-2信号通路影响高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化
目的：探讨不同pH值环境下骨形态发生蛋白2（BMP-2）信号通路对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响。方法选取5～8周龄健康雄性SD大鼠，体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs，取第4代VSMCs进行实验，设正常对照组、pH7.4+高磷组、pH7.1+高磷组和pH7.7+高磷组。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况，酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶（AKP）活性，用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测BMP-2、Smad1及Runt相关转录因子2（Runx2）mRNA的表达。结果与正常对照组相比，pH7.4+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加、茜素红染色钙化结节增多，BMP-2、Smad1、Runx2 mRNA表达及AKP活性均增高（均P<0.05）；与pH7.4+高磷组相比，pH7.1+高磷组大鼠VSMCs的钙含量减低、茜素红染色钙化结节减少，BMP-2、Smad1、Runx2 mRNA表达及AKP活性均降低（均P<0.05），pH7.7+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加、茜素红染色钙化结节增多，BMP-2、Smad1、Runx2 mRNA表达及AKP活性均增高（均P<0.05）。结论胞外酸性环境（pH7.1）抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化，胞外碱性环境（pH7.7）促进高磷诱导的大鼠VSMCs钙化，其机制可能是通过BMP-2信号通路介导VSMCs表型转化。
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骨髓基质干细胞成骨分化过程中Wnt、骨形态发生蛋白2信号通路相关因子与辛伐他汀的作用
背景:辛伐他汀可促进体外培养的人或鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,但作用机制尚不清楚.目的:观察辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中Wnt与骨形态发生蛋白2信号途径中相关因子表达的影响.方法:取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨全骨髓进行体外成骨细胞诱导培养.实验分为对照组及SIM组.SIM组加入浓度为10-7 mol/L辛伐他汀,对照组加入等量无水乙醇和PBS.培养14 d,行碱性磷酸酶染色,28 d时,行von Kossa染色观察细胞外基质矿化情况;培养14,21 d,免疫荧光细胞化学染色观察成骨细胞中β-catenin,Smad1/5,Cbfa1的表达及分布.结果与结论:大鼠骨髓基质干细胞经体外诱导后可分化为具有碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞.辛伐他汀可显著上调骨髓基质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达.同时,与对照组比较,SIM组β-catenin,Smad1/5,Cbfa1表达明显增多(P < 0.05),且呈现明显的核内聚集趋势.说明辛伐他汀促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的作用可能与调控Wnt与骨形态发生蛋白2信号通路中相关因子的表达及细胞内分布有关.
关键词： 骨髓基质干细胞 成骨细胞 Wnt信号通路 骨形态发生蛋白2信号通路 辛伐他汀
