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FOXC2基因与肥胖
FOXC2基因是新近发现的与脂肪细胞代谢有关的转录因子,属翼状螺旋/叉头转录因子家族.转基因小鼠高表达FOXC2可避免发生肥胖、高甘油三酯血症和饮食诱导的胰岛素抵抗.在人体中,FOXC2可调节脂肪细胞代谢,改善胰岛素敏感性.FOXC2基因多态性存在种族及性别差异.FOXC2可能是肥胖和胰岛素抵抗的候选基因.
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Foxc2基因修饰骨髓间充质干细胞修复实验性兔股骨头坏死
背景：通过髓芯减压能有效延缓早期骨坏死的自然进程，但是并没有彻底解决股骨头坏死的修复问题，终仍可能导致股骨头塌陷，发生骨坏死。目的：探讨 Foxc2基因修饰骨髓间充质干细胞复合明胶海绵移植对兔实验性股骨头缺血性坏死的治疗效果。方法：取40只新西兰大白兔制备股骨头坏死模型，MRI筛选制备成功模型24只，随机分为4组，空白对照组4只不作任何处理，髓芯减压组4只单纯减压，GFP治疗组8只在减压同时植入GFP基因转染骨髓间充质干细胞与明胶海绵复合材料，Foxc2治疗组8只在减压同时植入Foxc2基因转染骨髓间充质干细胞与明胶海绵复合材料。植入后第1，2，4周用ELISA方法测定植入局部组织中Foxc2蛋白表达水平。植入后4，8，12周进行髋部MRI扫描，然后取股骨头标本组织切片行苏木精-伊红染色，观察骨长入情况，并对12周标本行骨形态计量学测定及透射电镜观察。结果与结论：①植入后1，2，4周Foxc2治疗组股骨头局部有Foxc2蛋白的高表达，明显高于GFP治疗组。②植入后4，8，12周髓芯减压组、GFP治疗组只有较少新骨形成，12周时减压孔道有纤维性骨痂形成；Foxc2治疗组均有明显成骨，12周时坏死区被完全修复。③植入后12周Foxc2治疗组MRI表现为股骨头形态及信号均正常，髓芯减压组、GFP治疗组股骨头可见信号减低。④通过体外转染使骨髓间充质干细胞过表达Foxc2目的基因，利用髓芯减压移植到激素性股骨头坏死动物体内具有较好疗效。
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Foxc2稳定转染对C3H10T1/2细胞成骨性能的影响
目的:探讨Foxc2基因过表达对体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞系C3H10T1/2细胞生物学行为及分化能力的影响.方法:通过慢病毒转染构建Foxc2过表达C3H1OT1/2细胞系,采用实时定量PCR和Western免疫印迹法检测转染后Foxc2蛋白的表达.应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,实时定量PCR和Western免疫印迹法检测过表达Foxc2对成骨、成脂相关基因(Runx2、OPN、OCN、PPARγ)表达的影响,分别通过碱性磷酸酶(ALP)染色和油红染色检测细胞成骨和成脂分化能力.采用SPSS 17.0软件包对数据进行t检验.结果:成功构建Foxc2稳定过表达的C3H10T1/2细胞系,发现Foxc2过表达阻滞细胞于G1期,抑制细胞增殖.在成骨诱导过程中,过表达Foxc2可以显著上调Runx2、OPN、OCN等成骨相关基因的表达.ALP染色显示,Foxc2稳定过表达细胞较对照组细胞染色深.在成脂诱导过程中,过表达Foxc2显著下调PPARγ基因的表达;油红染色显示,成脂分化进程被部分抑制.结论:Foxc2过表达抑制细胞增殖,促进细胞分化.其机制是上调Runx2、OPN、OCN成骨相关基因的表达,下调PPARγ的表达,促进C3H10T1/2细胞的成骨分化,抑制其成脂分化.
关键词： FOXC2基因 成骨分化 成脂分化 C3H10t1/2细胞 -
基因芯片技术筛选2型糖尿病胰岛素抵抗脂肪代谢相关差异表达基因
目的:应用基因芯片技术比较2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)患者和正常人大网膜组织脂肪代谢相关基因表达谱的差异,探讨IR可能的发病机制.方法:分别用Cy5 和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将IR组(n＝5)和正常对照组(n＝5)脂肪组织的mRNA标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因.然后对芯片筛选结果中差异表达的FOXC2基因用Northern印迹法进行验证.结果:IR组和正常对照组之间共筛选出82条差异表达已知基因;其中脂肪代谢相关基因10条,表达增加的基因5条,表达降低的基因5条.Northern印迹证实IR组FOXC2 mRNA表达明显升高,与基因芯片检测结果一致. 结论:IR的发病与脂肪代谢相关,FOXC2可能是2型糖尿病IR的候选基因.
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插头框旋转录因子C2转染BMSCs后成骨作用的研究
[目的]观察过表达Foxc2基因对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响.[方法]构建携带Foxc2和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒表达载体,分离、培养兔BMSCs,分别以Lenti-GFP (GFP组)、Lenti-Foxc2(Foxc2组)转染BMSCs,另设未转染BMSCs对照组.MTT法检测过表达Foxc2对细胞增殖能力;Western blot、Real time PCR检测转染后7d各组细胞Foxc2蛋白、mRNA表达;以及转染后1、2、4周各组细胞骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、一型胶原(COLⅠ)蛋白及mRNA表达;转染后2周,各组行碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性检测.[结果]Foxc2组Foxc2 mRNA和蛋白高效表达;对照组、GFP组无Foxc2 mRNA及蛋白表达;MTT法检测示过表达Foxc2对BMSCs的增殖未产生显著影响;Foxc2组OCN、OPN、COL Ⅰ mRNA和蛋白表达显著高于其他组(P＜0.01),余组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);Foxc2组ALP染色阳性区域大于其余两组;ALP活性显著高于其他各组(P＜0.01).[结论]过表达Foxc2不影响细胞增殖,可持续表达基因产物,并可促进BMSCs向成骨细胞分化.
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等位特异PCR检测FOXC2检测基因多态性实验方法研究
目的 研究等位特异PCR方法检测FOXC2基因5'非编码区512C/T多态性的实验条件.方法 对实验研究中的主要影响因素设置各系列浓度梯度,进行PCR反应后观察电泳结果选取适条件.结果 适温度为58°C,适Mg2+浓度为3.0mmol/L,适dNTP浓度为2.5 mmol/L.结论 摸索适实验条件是进行批量实验的前提和关键.
