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泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎性因子的影响
目的 研究泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎性因子的影响.方法 ①动物实验:选择50只健康新西兰大白兔,根据计算机统计软件产生的随机数分为5组,每组10只.采用经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液的方法复制竹叶青蛇伤动物模型;对照组经兔右后腿皮下注射等量生理盐水.制模后6h,低、中、高剂量蛇伤胶囊组给予蛇伤胶囊,剂量分别为174、348和522 mg· kg-1·d-1,使用时以生理盐水稀释为17.4、34.8和52.2 g/L的药液,灌胃量则均为10 mL· kg-1·d-1;对照组和模型组灌胃等量生理盐水;各组均每日灌胃1次,连续1周.于末次灌胃后24 h经耳缘静脉取血,分离血清,用五分类血细胞计数仪检测血中白细胞计数(WBC)和单核细胞(MO)数;用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-1、IL-2、IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.②细胞实验:用MEM培养液培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 24 h后更换培养液并按随机数字表法分为5组,每组10个样本.采用细胞中加入5 mg/L竹叶青蛇毒液的方法复制竹叶青蛇毒细胞模型.培养6h后,空白对照组和模型组给予10％正常兔血清培养液,低、中、高剂量蛇伤胶囊组分别加5％、10％和15％含中药兔血清继续培养.培养72 h后,收集细胞培养液,用ELISA试验检测HUVEC培养液中IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平.结果 模型组血WBC、MO、IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α和HUVEC培养液中IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平均较对照组明显升高,随着药物剂量增加,低、中、高剂量蛇伤胶囊组上述指标均较模型组下降,以中剂量蛇伤胶囊组降低更显著[血清:WBC(×109/L)为9.03±2.16比12.11±4.38,MO(×109/L)为0.44±0.18比0.63±0.16,IL-1 (ng/L)为92.46±9.46比110.80±29.78,IL-2(ng/L)为92.11±17.55比112.0±18.83,IL-6 (ng/L)为481.73±147.12比667.26±226.41,TNF-α(ng/L)为7.12±2.96比9.41±1.76;HUVEC培养液:IL-1 (ng/L)为56.76±10.37比75.80±22.49,IL-2 (ng/L)为76.77±13.73比92.80±17.82,IL-6(ng/L)为231.70±107.91比413.25±178.65,TNF-α(ng/L)为223.98±30.31比252.86±30.75,均P＜ 0.05].结论 竹叶青蛇毒可造成血管内皮细胞炎性损伤;泻火解毒法可治疗竹叶青蛇伤血管内皮炎性损伤.
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泻火解毒法对竹叶青蛇伤致炎相关趋化因子及黏附分子的影响
目的 观察泻火解毒法对竹叶青蛇毒导致血管内皮炎症损伤相关趋化因子及黏附分子的影响.方法 ①动物实验:取健康新西兰大白兔50只,按计算机产生的随机数字分为正常对照组、模型组,以及蛇伤胶囊低、中、高剂量组,每组10只.采用经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液的方法复制竹叶青蛇伤动物模型;对照组给予等量生理盐水.制模后6h,蛇伤胶囊低、中、高剂量组分别给予蛇伤胶囊溶液174、348、522 mg· kg-1·d-1(用生理盐水稀释为17.4、34.8和52.2 g/L的药液,灌胃量均为10 mL· kg-1·d-1);模型组和正常对照组灌胃等量生理盐水;均每日灌胃1次,连续灌胃1周.于末次灌胃后24 h经耳缘静脉采血,离心取血清备用.同时取兔腹主动脉全段,保存于液氮中备用.②细胞实验:以改进的Eagle培养液(MEM)培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h,按计算机产生的随机数字分为空白对照组、模型组和蛇伤胶囊药物血清低、中、高剂量组,每组10孔.于细胞培养液中加入5 mg/L竹叶青蛇毒液复制竹叶青蛇毒中毒细胞模型.培养6h后,模型组和空白对照组给予10％正常兔血清,药物组给予5％、10％和15％含药血清.培养72 h后,收集细胞提取总RNA.用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测兔腹主动脉及HUVEC白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)的mRNA表达水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测兔血清E-选择素(CD62E)含量.结果 模型组腹主动脉和细胞IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平及CD62E含量均较对照组显著升高[以正常对照组和空白对照组IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平均为1,动物模型组上述指标的mRNA表达水平(2-△△Ct)分别为3.96±0.39、3.07±0.27、3.71±0.26、3.94±0.26,细胞模型组上述指标的mRNA表达水平(2-△△Ct)分别为3.53±0.70、2.24±0.48、3.13±0.44、2.80±0.13,均P＜0.01],模型组血清CD62E含量亦较正常对照组显著升高(μg/L:1.31±0.22比0.82±0.13,P＜0.01),蛇伤胶囊低、中、高剂量组腹主动脉和细胞IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平均较模型组明显降低[腹主动脉:IL-8 mRNA(2-△△Ct)为1.13±0.19、1.26±0.16、1.27±0.17比3.96±0.39,MCP-1 mRNA(2-△△Ct)为1.79±0.24、2.22±0.38、1.76±0.19比3.07±0.27,ICAM-1 mRNA (2-△ △Ct)为2.05±0.11、1.68±0.09、2.37±0.48比3.71±0.26,VCAM-1 mRNA (2-△△Ct)为1.59±0.08、1.40±0.11、1.84±0.11比3.94±0.26;细胞:IL-8 mRNA(2-△△Ct)为2.33±0.59、2.82±0.82、2.51±0.77比3.53±0.70,MCP-1 mRNA (2-△ △Ct)为1.59±0.35、1.48±0.36、1.54±0.29比2.24±0.48,ICAM-1 mRNA (2-△ △Ct)为1.46±0.38、1.77±0.65、1.73±0.50比3.13±0.44,VCAM-1mRNA (2-△△Ct)为2.49±0.24、2.18±0.19、2.45±0.24比2.80±0.13,均P＜0.05],蛇伤胶囊中、高剂量组血清CD62E含量均较模型组明显降低(μg/L:1.01±0.14、1.04±0.13比1.31±0.22,均P＜0.01),但3个剂量组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 泻火解毒法能通过抑制竹叶青蛇伤引起的炎症反应治疗竹叶青蛇伤血管内皮损伤.
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泻火解毒治疗红斑狼疮性肾炎1例
系统性红斑狼疮性(SLB)多发于青年女性的累及多脏器的自身免疫性炎症性结缔组织病,累及肾脏病变就为狼疮性肾炎.系统性红斑狼疮性肾炎病情时常反复,并且容易出现各种并发症,红斑狼疮性肾炎为一临床难治重病,目前,针对该疾病常规西医治疗以免疫抑制剂为主,但单用此类药物临床疗效欠佳,副作用较大.近年来,中医药在治疗红斑狼疮性肾炎方面的临床优势逐渐显现.鉴于此,本研究将五味消毒饮应用于红斑狼疮性肾炎治疗中进行疗效观察症见火热炽盛,营血燔灼者多,采用泻火解毒法治疗,效果良好.
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泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞NF-kB信号通路相关因子的影响
目的:观察泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞核转录因子-kB(NF-kB)信号通路相关因子的影响.方法:根据前期研究复制竹叶青蛇伤动物及细胞模型.均设置空白组(KB)、模型组(MX)和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY)5组,每组10样本.在动物实验中,KB经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg生理盐水,6h后灌胃10 mL/kg生理盐水.MX、DY、ZY和GY经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液,6h后分别灌胃10 mL/kg生理盐水及低、中、高剂量药液.各组每日灌胃1次,连续灌胃1周后采血并分离出血清待测.细胞实验中,KB加入10％正常兔血清培养,MX在KB的基础上加入5μg/mL竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY和GY在MX基础上培养6h后分别加入5％、10％和15％的含中药兔血清继续培养.各组培养72 h后,收集人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)及培养液检测.酶联免疫吸附法检测兔血清中NF-kB、IkBs激酶(IKK)、NF-kB诱导激酶(NIK)的含量.蛋白免疫印迹法测定各组细胞IKK、NIK、NF-kB p65的蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NF-kB p65在各组细胞的表达.结果:动物实验中,MX组IKK、NIK和NF-kB p65含量较KB组均出现了显著升高(P＜0.01);ZY组和GY组的IKK、NIK和NF-kB p65含量较MX组均出现显著降低(P＜0.05或P＜0.01).细胞实验中,MX组HUVEC中IKK、NIK和NF-kB 165的蛋白表达较空白组显著升高(P＜0.05或P＜0.01),DY组和ZY组HUVEC中IKK、NIK和NF-kB p65蛋白表达较MX组显著减少(P＜0.05或P＜0.01);激光共聚焦显微镜下MX组HUVEC中NF-kB p65的表达显著高于KB组(P＜0.01),而DY组和ZY组HUVEC中NF-kB p65的表达较MX组显著下降(P＜0.01).结论:NF-kB信号通路是竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎症损伤的关键,泻火解毒法可通过调控该信号通路来治疗竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎症损伤.
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陈阳春主任医师运用泻火解毒法治疗三叉神经痛经验
火热毒邪炽盛上冲头面是三叉神经痛重要病因病机,陈阳春主任医师在针对三叉神经痛的治疗中遵循《黄帝内经》“热者寒之”之要旨,对三叉神经痛患者治以泻火解毒大汗,并自拟“泻火解毒定痛饮”,取得较好疗效.
