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HOE642对减轻缺氧／复氧致未成熟兔心肌细胞内钙超载的作用
目的：观察Na+/H+交换抑制剂HOE642（Cariporide）对缺氧／再复氧前后未成熟兔心肌细胞内游离钙离子浓度(［Ca2+］i）的影响，探讨HOE642对未成熟心肌保护机制。方法：6枚新西兰幼兔心脏，用酶解法分离成单个未成熟兔心肌细胞悬液，每份细胞悬液均随机分为基础组、对照组和实验组，基础组未经缺氧直接测量细胞内Ca2+及心肌酶含量（CK、LDH），而后两组均经受缺氧60 min，再复氧30 min后测量，其中实验组于缺氧时加入HOE642（1 μmol／L）。用Flou-3／AM标记，激光扫描共聚焦显微镜测定单个未成熟免心肌细胞内游离钙浓度。另测定三组心肌细胞悬液中心肌酶含量（CK、LDH）。结果：缺氧／再复氧后对照组未成熟兔心肌细胞内［Ca2+］i（2814±236/1375±102）及心肌酶漏出量明显高于缺氧前基础值(P＜0.01);再复氧后HOE642处理组心肌细胞内［Ca2+］i较缺氧前基础值增加不显著（1446±128/1375±102,P>0.05);而较未用药对照组明显减少（1446±128／2814±236，P<0.01）。而HOE642处理组细胞悬液心肌酶漏出量较基础值有所增加，但其相差不显著，而较对照组有心肌酶漏出量明显减少，两者相差非常显著（P＜0．01）。说明HOE642对缺氧／再复氧后未成熟兔心肌细胞内游离钙超载具有明显的抑制作用。结论：HOE642对未成熟心肌的保护机制可能是抑制心肌细胞内游离钙超载引起的心肌缺血／再灌注损伤。
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Bcl-2结合抗凋亡基因沉默对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响
目的 探讨Bcl-2结合抗凋亡基因(BAG-1)对缺氧/再复氧损伤后人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用,以及对热休克蛋白70 (HSP70)表达的影响.方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞,采用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术抑制BAG-1表达.将筛选好的细胞分为细胞对照组、慢病毒对照组(仅含荧光蛋白的慢病毒感染组)、BAG-1小干扰RNA (siRNA)组(即BAG-1基因沉默组,感染含BAG-1基因干扰序列及荧光蛋白的慢病毒),根据沉默序列不同分为BAG-1 siRNA-α组、BAG-1 siRNA-β组.感染重组慢病毒后72 h采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测SH-SY5Y细胞中BAG-1和HSP70蛋白表达;缺氧处理后采用CCK-8测定各组细胞活性;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞HSP70转录水平.结果 慢病毒感染后72 h,Western Blot检测结果表明BAG-1 siRNA-β组干扰效果优于BAG-1siRNA-α组.各组细胞活性均随缺氧时间延长而呈先增强后减弱的趋势,且于8h时达峰值.经缺氧处理8h后,BAG-1 siRNA-β组细胞活性[吸光度(A)值]明显低于细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1siRNA-α组(0.59±0.09比0.94±0.12、0.90±0.11、0.91±0.14,均P＜0.01);BAG-1siRNA-β组凋亡细胞率明显高于细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组[(34.63±3.46)％比(14.83±3.75)％、(19.93±6.49)％、(16.40±1.18)％,均P＜0.01].BAG-1 siRNA-β组HSP70蛋白及mRNA转录水平与细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1siRNA-α组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 BAG-1基因在缺氧神经细胞中能够发挥保护作用,减少细胞凋亡,其保护作用可以独立于HSP70基因.
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内源性内皮衍生超极化因子对缺氧/再给氧致大鼠海马神经细胞凋亡的抑制作用
目的研究乙酰胆碱( ACh)诱导内源性内皮衍生超极化因子( EDHF)对缺氧/再给氧大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法取原代培养的大鼠海马神经细胞制备缺氧/再给氧损伤模型；大鼠大脑中动脉( MCA)血管段用一氧化氮合酶抑制剂NG-nitro-L-argininemethyl ester ( L-NAME)和前列环素抑制剂indomethacin ( Indo)预处理，用ACh诱导血管内皮细胞合成释放内源性EDHF；分别用流式细胞仪法和Ho-echst荧光法检测海马神经元凋亡。结果流式细胞仪法和Hoechst荧光法检测均表明假缺氧组海马神经细胞的凋亡率很低，分别为3.1%和2.2%左右，而缺氧/再给氧的模型组细胞凋亡率有显著升高；与缺氧/再给氧模型组相比，内皮完整血管段合用1μmol/L ACh 或合用1μmol/L ACh、30μmol/L L-NAME及10μmol/L Indo均可明显抑制缺氧/再给氧所致的细胞凋亡，而单用ACh或内皮完整的血管或ACh合用去内皮的血管段对细胞凋亡无明显影响。结论 ACh诱导大鼠脑血管内皮细胞释放的内源性EDHF对缺氧/再给氧海马神经细胞凋亡有明显的抑制作用。
关键词： 内皮依赖性超极化因子 海马神经细胞 细胞凋亡 缺氧/再复氧
