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抗人巨细胞病毒重组抗原gp52单克隆抗体的研制及应用研究
目的:为了获得抗人巨细胞病毒(HCMV)单克隆抗体(McAb),并将其用于人HCMV感染后的抗体检测.方法:采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp52蛋白的McAb.并用抗人μ链抗体包被、rhCMV gp52蛋白作抗原和HRP-McAb作标记抗体,建立了检测抗HCMV抗体的捕获ELISA.用该法检测献血员、病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合征患者血清共计939份.结果:终获得4株(3E9,5A6,4G12,2H2)能稳定分泌高效价抗rhCMV McAb的杂交瘤细胞.它们分别识别gp52蛋白上的2个不同抗原表位,2H2识别gp52蛋白上的一个表位,3E9,5A6和4G12则共同识别另一个表位.用其建立的捕获ELISA,gp52蛋白抗原佳浓度为1μg@mL-1,酶标单抗的工作浓度为1:1 600,批内平均变异系数3.7%,批间平均变异系数7.9%.634例献血员IgM抗体阳性17例(2.7%);288例病毒性肝炎患者,阳性10例(3.5%);17例肝炎综合征患者,阳性11例(64.7%).均经免疫印迹法证实.结论:用gp52蛋白及其单抗建立的捕获ELISA,特异性强,灵敏度高,不受类风湿因子的影响,结果可靠,优于全病毒抗原构成的检测试剂,适用于临床诊断和流行病学调查.
关键词： 人巨细胞病毒 重组gp52蛋白 单克隆抗体 捕获酶联免疫吸附试验 -
捕获ELISA检测人巨细胞病毒IgM抗体
人巨细胞病毒(HCMV)属疱疹病毒科,其感染极为普遍,在免疫抑制患者及孕妇中常可导致严重后果.本实验采用重组HCMV(rhCMV)gp52蛋白[1]作抗原和辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗gp52单克隆抗体[2],建立了捕获ELISA,检测血清中的HCMV IgM抗体.现将结果报告如下.
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人巨细胞病毒重组抗原及单克隆抗体在ELISA中的应用
用重组人巨细胞病毒(rhCMV)gp52蛋白作抗原及相应的单克隆抗体酶标记物建立捕获ELISA,检测人血清中的HCMV特异性IgM抗体.其工作浓度均由方阵滴定法确定.并进行精密度、特异性和干扰实验.用该法检测体检献血员病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合症患者血清共计939份.结果gp52蛋白抗原佳浓度为lμg/ml,酶标单抗的工作浓度为1:1600,批内平均变异系数CV3.7%,批间CV7.9%.634例献血员IgM抗体阳性17例(2.7%);288例病毒性肝炎患者,阳性10例(3.5%);17例肝炎综合症患者,阳性11例(64.7%).均经免疫印迹法证实.该组合特异性强,灵敏度高,不受类风湿因子的影响,结果可靠,优于全病毒抗原构成的检测试剂.适用于临床诊断和流行病学调查.
