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组蛋白去乙酰化酶6抑制剂Tubastatin A对酒精依赖小鼠的条件性位置偏爱行为及海马基质金属蛋白酶-9 mRNA表达的影响
目的 研究选择性组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)抑制剂tubastatin A对酒精依赖小鼠的条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)行为及海马组织中HDAC6和基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinases,MMP-9) mRNA表达的影响.方法 采用CPP基础值前测试剔除对某侧过度偏爱的小鼠.将36只8周龄SPF级雌性C57BL/6J小鼠随机均分为4组,分别为对照[生理盐水(含1％ DMSO)]组、酒精依赖(2.0 g/kg)组、单纯tubastatin A(10mg/kg)组和tubastatinA干预(2.0 g/kg酒精+10 mg/kg tubastatinA)组,每组9只.小鼠于训练阶段第2、4、6、8、10天腹腔注射酒精(2.0 g/kg)后放入伴药箱,第3、5、7和9天腹腔注射等量生理盐水后放入非伴药箱,各停留30 min;采用腹腔注射方式进行染毒,染毒容量为0.01 ml/g;腹腔注射后小鼠放入中间箱,记录15 rmin在每侧停留时间.采用实时荧光定量PCR法检测小鼠海马组织HDAC6及MMP-9 mRNA的表达水平.结果 在测试阶段,酒精依赖组和tubastatin A干预组小鼠在酒精侧停留时间显著高于对照组和单纯tubastatinA组(P＜0.01).与对照组相比,酒精依赖组小鼠出现明显CPP效应(P＜0.05),单纯tubastatinA组小鼠CCP效应更加显著(P＜0.01).与对照组比较,单纯tubastatinA组和tubastatinA干预组小鼠海马区HDA C6 mRNA的表达水平显著下调(P＜0.01).与前测阶段比较,酒精依赖组小鼠海马区MMP-9的mRNA表达水平显著上调(P＜0.05),tubastatinA干预组小鼠海马区MMP-9的mRNA表达水平的上调更为显著(P＜0.01).结论 酒精可明显诱发C57BU6J小鼠的CPP效应,给予Tubastatin A可增强这种效应.tubastatin A可能通过抑制海马组织HDAC6的表达来增强小鼠酒精依赖性CPP行为,这可能与HDAC6对MMP-9表达的调控有关.
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组蛋白去乙酰化酶6在脑出血模型小鼠神经功能损害及神经元凋亡中的作用
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在小鼠脑出血后神经元凋亡中的作用及潜在机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脑出血组和HDAC6抑制剂Tubastatin A(Tub A)治疗组(Tub A 10 mg.kg-1治疗组和Tub A30mg.kg-1治疗组).采用自体血注射法构建小鼠脑出血模型.采用改良神经功能缺损评分(mNSS)量表进行神经功能损伤评分,干湿比重法测量脑水肿含量,免疫荧光染色检测神经元凋亡情况,应用Western blot法分别检测HDAC6、激活型半胱氨酸蛋白酶-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 脑出血后,HDAC6的表达明显升高,Tub A能显著降低神经功能缺损评分,减轻脑组织水肿程度,减少神经元凋亡数量,增加Bcl-2蛋白表达,抑制激活型半胱氨酸蛋白酶-3和Bax蛋白表达.结论 小鼠脑出血后,Tub A特异性抑制HDAC6活性可上调Bcl-2,降低Bax和激活型半胱氨酸蛋白酶-3的表达,减少神经元凋亡,从而改善脑出血模型小鼠的神经功能缺损症状.
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Tubastatin A在小鼠脑梗死中的保护作用及其可能机制
目的 探讨选择性组蛋白去乙酰化酶6 (HDAC6)抑制剂Tubastatin A在小鼠脑梗死中的保护作用及其可能的机制.方法 第1部分:采用健康成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组和脑梗死组,其中梗死组再分为梗死后1、3、5天3个亚组,应用Western blotting方法检测各组小鼠梗死灶周围HDAC6表达变化.第2部分:将健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脑梗死组、溶剂对照组及Tubastatin A组,采用光化学法建立脑梗死模型,于造模后1、3、5天采用mNSS评分对各组小鼠进行行为学测试,并在造模后3天采用western blot-ting检测各组小鼠梗死灶周围核因子-κ B(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达变化.结果 与假手术组比较,脑梗死组梗死灶周围HDAC6表达升高,其中梗死后第3天HDAC6表达升高明显(P＜0.05).与脑梗死组比较,Tubastatin A组神经功能评分下降,Western blotting检测梗死周围NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05),溶剂对照组较脑梗死组无显著差异(P＞0.05).结论 选择性HDAC6抑制剂Tubastatin A在小鼠脑梗死中可能通过减少NF-κB、TNF-α、IL-6的表达减轻炎症反应,从而发挥神经保护作用.
