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小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究
目的 了解体外转录法合成的小干扰RNA(siRNA)沉默MAT1基因对胰腺癌的体内体外抗癌效应.方法 用siPORT-脂质体(lipid)中性阳离子脂质体转染由体外转录法合成、Cy3荧光标记的双链siRNA人胰腺癌BxPC3细胞,观察对胰腺癌细胞生长和细胞周期曲线的影响,检测MAT1基因被siRNA沉默后mRNA和蛋白质的表达水平.在裸鼠胰腺癌皮下移植瘤瘤体内直接注射siRNA观察抑瘤效应.结果 合成的4条MAT1-siRNA序列中有一半可显著抑制BxPC3细胞的生长.体外转染MAT1-siRNA 72 h后,BxPC3细胞生长抑制率达34.9%(P＜0.01);83.9%的BxPC3细胞滞留于G0/G1期,而空白对照组仅59.86%(P＜0.01).体外转染MAT1-siRNA 48 h后MAT1-mRNA水平下调了80.12%,72 h后MAT1蛋白质水平下调了50.12%,与各对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.01).MAT1-siRNA注射组裸鼠移植瘤重量和体积均明显低于对照组(均P＜0.05),抑瘤率达42.53%.结论 siRNA介导的MAT1基因沉默在体外实验中显著抑制了胰腺癌细胞的生长,在体内实验中对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤产生明显的抑瘤效应.
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MAT1-siRNA体外转染抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的研究
目的:观察siRNA沉默 MAT1基因对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响,探讨 MAT1基因作为胰腺癌基因治疗标靶的可行性.方法:在脂质体介导下将 MAT1基因序列特异性siRNA体外转染人胰腺癌BxPC-3细胞,采用RT-PCR和Western印迹法分析 MAT1基因的表达,锥虫蓝染色计数法和Boyden小室模型分别测定细胞的增殖和体外侵袭能力变化.结果:与对照各组相比,实验组BxPC-3细胞MAT1 mRNA和蛋白在一定时间内均表达下调,其中mRNA表达在24 h和48 h分别下调达55.2%和64.3%(P＜0.01);细胞体外增殖和侵袭能力均明显受抑,差异具统计学显著性(P＜0.01).结论:针对 MAT1基因的siRNA可抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭能力,MAT1可能是胰腺癌基因治疗的靶点.
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TFⅡH参与调控RNA聚合酶Ⅱ介导的mRNA转录的研究进展
通用转录因子TFⅡH (transcription factor ⅡH)在RNA聚合酶Ⅱ (RNA Pol Ⅱ)介导mRNA的转录中起着非常重要的作用,且主要是通过磷酸化RNA Pol Ⅱ大亚基的羧基末端结构域(CTD)的各个位点来调控转录过程.转录启动前,TFⅡH及其他转录因子与RNA Pol Ⅱ结合形成转录起始前复合物(preinitiation complex,PIC),而后TFⅡH的亚基CAK通过磷酸化RNAP Ⅱ CTD的第五位丝氨酸(Ser5)和第七位丝氨酸(Ser7)促进转录的起动.而CAK磷酸化Ser5的同时也能够促使另一个激酶CDK9磷酸化RNAP Ⅱ CTD的第二位丝氨酸(Ser2),该过程参与调控转录的延伸以及终止.
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"分子开关"MAT1基因的研究进展
MAT1作为三聚体CAK激酶的重要组成部分,对CAK的活性起着"分子开关"的作用,因而在调节信号分子转导、控制细胞周期的进程、影响细胞的增殖和凋亡等方面起着关键作用.作为肿瘤相关基因,MAT1是肿瘤基因治疗靶目标中值得期待的一个突破口.
关键词： 细胞周期素依赖性蛋白激酶 CDK激活激酶 MAT1 细胞周期
