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血管内皮生长抑制因子在散发性肾透明细胞癌细胞中的表达及意义
目的 了解血管内皮生长抑制因子(VEGI)在散发性肾透明细胞癌(CCRCC)中的表达情况,分析其与CCRCC病理分级和分期等的关系.方法 应用Western印迹及免疫组化技术分析肾透明细胞癌细胞(786-O细胞)、CCRCC组织以及配对正常肾脏组织中VEGI的表达情况.研究包括CCRCC患者50例,男37例,女13例；年龄(53±12)岁；肿瘤直径＜7 cm 33例,≥7 cm 17例；病理分级G114例,G2 22例,G3 14例；病理分期T132例,T210例,T3 8例.结果 VEGI主要于细胞质中表达；且在正常肾小管上皮细胞质中表达水平,平均吸光度(A)值为0.40±0.16,明显高于CCRCC组织(A值为0.11±0.06),P＜0.01；CCRCC病理分级与VEGI的表达阳性率、表达强度及平均光密度值间均呈负相关关系(r=-0.640,P＜0.01;r=-0.831,P＜0.01;r=-0.781,P＜0.01)；VEGI在≥7cm肿瘤(平均A值为0.08±0.04)的表达水平明显低于＜7 cm肿瘤(平均A值为0.12±0.06,P＜0.05)；但其表达与患者年龄、性别以及肿瘤分期无关(P＞0.05).结论 VEGI主要表达于正常肾小管上皮细胞和肾细胞癌细胞胞质中,正常肾组织中VEGI的表达水平明显高于肿瘤组织,且这种差异随肿瘤病理分级的升高更为显著,两者呈负相关关系,提示VEGI在肾细胞癌的发生和发展中可能起着负向调控作用.
关键词： 肾肿瘤 血管内皮生长抑制因子 肿瘤分级 -
高纯度可溶性嵌合蛋白VEGI+的表达纯化
目的:制备纯化的新型血管生长抑制剂可溶性嵌合蛋白VEGI+,为进一步研究其活性奠定基础.方法:应用PCR方法制备血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI)与寡肽CTTHWGFTLC相嵌合的融合基因VEGI+,将PCR产物克隆至pGEM-T载体中,经酶切及测序鉴定后,与原核表达载体pET30a(+)重组,构建重组表达载体pET30a-VEGI+,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,纯化并鉴定表达产物.结果:成功扩增融合基因VEGI+,构建的重组质粒pET30a-VEGI+酶切鉴定结果与预期一致,诱导后表达产物以包涵体为主.SDS-PAGE电泳及Western印迹结果表明,复性纯化后的嵌合蛋白VEGI+相对分子质量约为23 000,纯度约为90%.结论:成功构建了重组表达载体,并在大肠杆菌诱导表达,亲和层析纯化后获得纯度较高的可溶性嵌合蛋白VEGI+.
关键词： 血管内皮生长抑制因子 寡肽类 基因融合 -
大鼠心肌梗死后血管内皮生长抑制因子的时程变化
目的:研究大鼠心肌梗死模型后不同时间血管内皮生长抑制因子(vascular endothelial cell growth inhibitor,VEGI)表达及意义.方法:通过结扎SD大鼠左冠状动脉前降支远端1/3建立心肌梗死模型,通过心电图变化判断是否成功.分别于术后1、2、3、4、5、6、7、8周开胸取左心室梗死区、梗死边缘区、非梗死区心肌,应用荧光定量PCR与Western blot检测VEGI基因及蛋白表达变化.结果:心电图变化提示造模成功,大鼠术后早期(1～3周)VEGI m RNA表达下调(P＜0.05),而后期(5～8周)则表达显著增加(P＜0.05).与m RNA水平变化类似,VEGI蛋白水平在心肌梗死组大鼠术后早期(1～3周)表达水平下调(P＜0.05),后期(5～8周)显著上升(P＜0.05).结论:VEGI作为一种血管再生抑制因子,在心肌梗死早期通过表达下调促进血管再生,进行梗死心肌代偿修复;而在心肌梗死后期通过表达抑制心肌梗死区血管再生,提示VEGI在心脏血管再生调节中有重要作用,有望成为缺血性心脏病治疗的新靶点.
关键词： 心肌梗死 血管内皮生长抑制因子 实时荧光定量PCR 大鼠 -
糖尿病视网膜病变合并白内障患者血清及房水中VEGI和VEGF的含量分析
目的：通过测定血清及房水中VEGI、VEGF的含量，评估其与糖尿病视网膜病变严重程度的相关性。方法：73例确诊为糖尿病视网膜病变的白内障患者，根据术后眼底检查结果分为4组：A组轻度非增生性糖尿病视网膜病变组18例，B组中度非增生性糖尿病视网膜病变组17例，C组重度非增生性糖尿病视网膜病变组18例，D组增殖型糖尿病视网膜病变组20例。另外随机选取20例无糖尿病的白内障患者作为实验对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验测定5组患者外周血清及房水中VEGI和VEGF的质量浓度并作比较分析。结果：糖尿病视网膜病变患者血清VEGI浓度早期较实验对照组明显升高，但随着病程进展，其浓度逐渐降低；A组VEGF浓度与对照组无显著性差异，随着病程加重，B、C、D组VEGF浓度逐渐升高。房水中VEGI含量在A组便较对照组降低，且随着病情加重继续下降，组间比较差异有统计学意义；而V EG F在各实验组随着病情加重浓度呈增加趋势。结论：血清及房水中VEGI与VEGF含量与糖尿病视网膜病变的严重程度显著相关，其可能通过相互作用共同参与了糖尿病视网膜病变的发病过程。
关键词： 糖尿病视网膜病变 血管内皮生长因子 房水 血清 血管内皮生长抑制因子
