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肝动脉化疗栓塞术联合胸腺肽α1治疗对中晚期原发性肝癌免疫细胞自噬的影响
目的 探讨肝动脉化疗栓塞术(TACE)联合胸腺肽α1(Tα1)治疗对中晚期肝癌患者免疫细胞自噬水平的改变.方法 收集2015年9月至2016年6月在丽水市中心医院住院的中晚期肝癌患者30例,年龄16~75(56±12)岁,所有研究对象均行TACE治疗,随机分为TACE组和TACE+胸腺肽组(每组15例),TACE组术后予常规处理;TACE+胸腺肽组在TACE术后当天即刻给予1.6 mg Tα1皮下注射,每周2次,给药间隔3~4 d,共4周为1个疗程.用流式细胞仪检测两组患者TACE术前、术后1、4周及随访3个月时T细胞亚群百分比.采用密度-梯度离心法分离患者外周血单个核细胞(PBMC),并用蛋白免疫印迹技术(WB)和PCR技术检测PBMC的Beclin-1、LC3蛋白和mRNA水平.结果 两组TACE术前CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群百分比,Beclin-1、LC3蛋白和mRNA差异均无统计意义学(均P>0.05).TACE+胸腺肽组在术后1周时(58.45%±16.34%、38.33%±15.16%、27.31%±12.54%)、术后4周时(62.38%±18.62%、43.19%±13.86%、29.54%±10.33%)和随访3个月时(64.15%±13.76%、41.28%±14.65%、29.38%±15.65%)的CD3+、CD4+、CD8+ T细胞亚群百分比均明显增高于TACE组在术后1周时(53.71%±11.17%、32.12%±10.53%、24.45%±13.72%)、术后4周时(52.12%±14.26%、31.16%±15.43%、23.39%±15.33%)和术后3个月时(54.28%±13.15%、32.17%±14.98%、24.34%±14.12%)的百分比 (均P<0.05) .TACE+胸腺肽组在术后1周时(蛋白表达:0.57±0.08、2.26±0.36,mRNA表达:0.62±0.11、2.69±0.27)和术后4周时(蛋白表达:0.66±0.09、3.11±0.45,mRNA表达:0.78±0.13、3.43±0.61)Beclin-1、LC3蛋白和mRNA表达均明显高于TACE组在术后1周时(蛋白表达:0.45±0.16、1.43±0.30,mRNA表达:0.52±0.15、1.15±0.37)和术后4周时(蛋白表达:0.51±0.13、1.81±0.35,mRNA表达:0.56±0.10、1.98±0.41)的表达(均P<0.05);但随访3个月时表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 TACE 联合Tα1可明显增加中晚期原发性肝癌患者免疫细胞自噬水平.
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姜黄素下调mTOR诱导人肺癌A549细胞自噬的研究
[目的]研究姜黄素诱导人肺癌A549细胞自噬现象及与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的关系.[方法]采用CCK-8法检测姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用;采用吖啶橙染色(AO)及转染GFP-LC3质粒荧光显微镜下观察姜黄素处理后A549细胞的自噬现象;采用Westernblot法检测微管相关蛋白轻链Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链Ⅰ(LC3 Ⅰ)、mTOR表达的变化.[结果]姜黄素对人肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且成明显的剂量—时间依赖关系.AO染色结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组及Rapa组细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组及3-MA组亮红色荧光比例下降.细胞转染GFP-LC3后姜黄素40μ mol/L组和Rapa组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L+3-MA组及3-MA组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显比例有所下降.Westem blot法检测结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组作用24h后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著升高(P＜0.05),姜黄素40μmol/L+3-MA组LC3Ⅱ/LC3-Ⅰ表达低于姜黄素40μmol/L组(P＜0.05).姜黄素40μmol/L组mTOR表达显著下降(P＜0.01),姜黄素40μmol/L+3-MA组mTOR表达高于姜黄素40μmol/L组(P＜0.05).[结论]姜黄素能够明显抑制A549细胞增殖并诱导A549细胞发生自噬,同时还能够明显抑制mTOR蛋白的表达水平,其机理可能与mTOR的信号通路有关.
关键词： 姜黄素 自噬 微管相关蛋白轻链 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 肺肿瘤 -
雷帕霉素对甲状腺癌细胞株K1的增殖、迁移能力影响及其机制
目的 观察雷帕霉素对人甲状腺乳头状癌细胞株K1增殖、迁移能力的影响,并探讨其可能机制.方法 配制雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液,选择雷帕霉素作用浓度(对K1细胞的半抑制浓度)10μmol/L、3-MA作用浓度1 mmol/L进行后续实验.将K1细胞分为对照组、雷帕霉素组、雷帕霉素+3-MA组.对照组不做任何处理,加入2 mL培养基;雷帕霉素组加入100μmol/L雷帕霉素0.2 ml及培养基1.8 mL;雷帕霉素+3-MA组先加入100μmol/L雷帕霉素0.2 ml及培养基1.79 mL,1 h后加入1 mmol/L 3-MA溶液10 uL.培养24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖能力,Transwell法检测各组细胞的迁移能力,Western blotting法检测各组细胞中的自噬相关蛋白LC3、p62.结果 培养48、72、96 h后,雷帕霉素组细胞增殖能力低于对照组,雷帕霉素+3-MA组细胞增殖能力高于雷帕霉素组(P均<0.01).雷帕霉素组穿膜细胞数少于对照组,雷帕霉素+3-MA组穿膜细胞数多于雷帕霉素组(P均<0.01).雷帕霉素组LC3蛋白相对表达量高于对照组,p62蛋白相对表达量低于对照组(P均<0.01);雷帕霉素+3MA组LC3蛋白相对表达量低于雷帕霉素组,p62蛋白相对表达量高于雷帕霉素组(P均<0.01).结论 雷帕霉素可抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移能力,其机制可能与诱发自噬有关.
