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三七总皂苷抑制毒胡萝卜素诱导Bip/GRP78和caspase-12的表达
目的：探索三七总皂苷在内质网（ER）应激条件下的细胞保护作用，分析三七总皂苷的抗肝细胞凋亡作用的机制。方法毒胡萝卜素（TG）诱导人类肝脏来源的细胞株 Huh7细胞形成内质网应激介导的细胞凋亡。设置空白对照，三七总皂苷，毒胡萝卜素，及三七总皂苷加毒胡萝卜素不同处理细胞，加入细胞培养 TG 浓度5μmol/L，三七总皂苷浓度150μmol/L，培养24 h。荧光显微镜观察细胞形态学形态学，流式细胞仪测定细胞凋亡，免疫印记法检测 Bip/GRP78和 pro caspase-12，细胞 caspase-3/7活性分析。结果毒胡萝卜素处理细胞染色质固缩，向外周聚集，周边化。形成很多颗粒物质。大量细胞核破裂形成碎片，核解体。三七总皂苷共同处理的细胞改善了细胞器的完整性，减少形态学改变，DAPI 染色颗粒物质减少了45%。流式细胞仪测定显示三七总皂苷处理减少了2.5倍毒胡萝卜素引起的细胞凋亡。三七总皂苷减少 TG 诱导内质网应激标志物 Bip/GRP78产生，降低 pro caspase-12向 caspase-12转化。减少 caspase-3/7活性50%。结论三七总皂苷具有细胞保护作用，对抗内质网应激介导的细胞凋亡。三七总皂苷的抗凋亡作用的机制与稳定内质网内环境，抵消 TG-诱导的内质网应激 Bip/GRP78产生，降低 pro caspase-12向 caspase-12转化有关。这些研究结果有助于我们了解三七总皂苷对内质网应激相关的肝脏疾病的治疗作用机制。
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强脉冲光照射对大鼠皮肤BiP/GRP78表达的影响
目的:评价强脉冲光照射对大鼠真皮胶原增生和皮肤中内质网分子伴侣(BiP/GRP7S)表达的影响.方法:强脉冲光照射背部脱毛的大鼠皮肤共4次,每次间隔2天.取照射后第14天和30天的大鼠皮肤组织进行HE染色,测量其真皮厚度；并用碱水解法检测羟脯氨酸含量.取照射后皮肤组织,采用免疫组织化学染色技术检测BiP/GRP78的表达.结果:强脉冲光照射第14天和30天的大鼠皮肤真皮厚度明显增加,胶原纤维束增粗、密集,皮肤羟脯氨酸含量增加,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).免疫组化显示BiP/GRP78在激光照射后表达明显上调,结果具有统计学意义(P＜0.01).结论:BiP/GRP78在激光照射大鼠皮肤中表达上调与非磨削嫩肤治疗密切相关.
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内质网应激反应参与强噪声诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的研究
目的:探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)的凋亡,及观察凋亡蛋白酶Caspase-12、内质网应激相关因子Bip/Grp78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC中的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC损伤中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠20只,将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1,4,14d组及对照组在处死前测ABR(每组各5只).通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组化检测Caspase12、Bip/Grp78,CHOP/Gadd153蛋白的表达.结果:透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变.实验组SGC的TUNEL染色明显增强,免疫组化检测实验组Bip/Grp78蛋白明显高于正常组,且在1,4,14d都维持在比较高的水平.Caspase-12、CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d和4d达到高峰,14d减少.结论:强噪声可以诱导SGC凋亡,Caspase-12活化引起内质网应激反应性凋亡通道是此过程的信号途径之一.
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强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞内质网应激相关因子表达的改变
目的:观察内质网应激相关因子Bip/GRP78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞损伤中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠48只,将实验组豚鼠暴露在4 k Hz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1d、4d 、14d组及对照组在处死前测ABR(每组各12只).脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术( TUNEIL) 检测耳蜗凋亡细胞.免疫组化及Western Blot方法检测Bip/GRP78,CHOP/Gadd153蛋白的表达.结果:实验组耳蜗Corti/s器、血管纹(stria vascularis,sv)和螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)存在TUNEL阳性细胞,以1d组多,而对照组未见阳性细胞.免疫组化、Western Blot检测实验组Bip/GRP78蛋白明显高于正常组,且在1d、4d、14d都维持在比较高的水平;CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d、4d达到高峰,14d减少.结论:强噪声暴露启动内质网应激反应,诱导Bip/GRP78表达,降低细胞损伤,同时激活CHOP/Gadd153途径启动细胞凋亡来清除受害严重的细胞,这可能是内耳细胞内源性保护机制之一.
关键词： 强噪声 耳蜗 内质网应激 Bip/GRP78 CHOP/GADD153 -
内质网蛋白29在大鼠脑出血继发性脑损伤中的作用研究
目的观察大鼠脑出血后脑组织中内质网蛋白29(ERp29)的表达变化，进而探讨其在脑出血继发性脑损伤中的作用。 方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为2组：对照组(10只，不做处理)和实验组(50只，在脑立体定位仪下采用自体血注入尾状核法制备脑出血模型)。实验组再分为术后6h、12h、18h、24 h、48 h5个时相点，对各个时相点的模型鼠分别采用RT-PCR和Western blotting方法检测脑组织中ERp29和内质网伴侣蛋白Bip/GRp78 mRNA及蛋白的表达。结果在脑出血大鼠模型中，BiP/GRp78 mRNA及蛋白表达在术后12h开始升高，并随着时间的推移在术后18h、24h、48 h继续逐渐升高，于术后48 h达顶峰，与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。ERp29 mRNA及蛋白表达在术后6h、12h无明显变化，与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；而在术后18h、24h、48h ERp29 mRNA及蛋白表达明显升高，与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论大鼠脑出血后18h时血肿周围脑组织细胞中发生了内质网应激反应，而ERp29在此过程中表达升高，推测其有可能作为一种保护因子并以与BiP/GRp78相互作用形成复合物的形式来抵抗细胞内质网应激反应，进而减轻血肿对周围脑组织造成的损害。
