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载脂蛋白M基因启动子的克隆及荧光素酶报告基因载体的构建
目的为深入研究载脂蛋白M（ApoM）基因的表达调控机制，对ApoM基因启动子序列进行克隆，并构建不同长度启动子荧光素酶报告基因载体。方法在NCBI人类基因组数据库中截取并下载ApoM基因转录起始位点5’侧翼区约2 kb的基因组序列设计PCR扩增引物，从健康外周血中扩增获得该片段，以此序列为基础进行亚克隆，分别获得6条5’端不等、3’端平齐的片段，后插入pGL3-Basic表达载体。结果获得了6条长度差别约为200bpApoM启动子片段，并构建了不同长度的pGL3-ApoM真核表达载体。结论上述载体的成功构建及序列分析为进一步研究ApoM基因的启动子活性及基因表达调控奠定了基础。
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载脂蛋白M基因启动子区域-778C→T置换对其表达的影响
目的 构建含载脂蛋白M(ApoM)基因启动子区的荧光素酶报告基因的真核表达载体,探讨ApoM基因启动子区域- 778C→T置换对ApoM表达的影响.方法 采用PCR法扩增人染色体中合ApoM基因-1316bp 至+73 bp的DNA片段,筛选出含ApoM - 778TT基因型(-778 bp无变异)及ApoM - 778CT/CC基因型(-778bp变异)的DNA片段,构建含以上两个基因片段的PGL3重组载体.并采用阳离子脂质体转染法将携带萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染HepG2细胞,经48 h培养,检测荧光素酶的活性,以反映ApoM的表达水平.结果 荧光素酶报告基因活性显示,ApoM - 778C基因型携带者引起荧光素酶相对活性明显低于ApoM - 778T基因型者.结论 ApoM基因启动子- 778C→T对ApoM转录活性起抑制作用,它可能是影响ApoM基因表达的重要因素.
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中国汉族人群载脂蛋白M基因-778T/C多态与2型糖尿病合并冠心病的关联研究
目的 探讨中国汉族人群载脂蛋白M (apolipoprotein M,Apo M)基因-778T/C单核苷酸多态性与2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的相关关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对238例糖尿病合并冠心病的患者及236例对照组进行检测,分析ApoM基因-778T/C多态的基因型和等位基因频率的分布情况.结果 ApoM基因-788T/C多态三种基因型(TT型,TC型和CC型)在2型糖尿病合并冠心病组分布频率分别为73.9％、24.3％和1.7％,在对照组分布频率分别为86.0％、13.1％和0.9％;两组比较差异有统计学意义(P=0.001).ApoM基因-788T/C多态T、C等位基因的频率在2型糖尿病合并冠心病组及对照组中分布分别为86.1％、13.9％和92.6％、7.4％,两组比较差异有统计学意义(P=0.001).Logistic回归校正性别、年龄、体质量指数、吸烟、原发性高血压、高脂血症等2型糖尿病合并冠心病的易患因素后,ApoM基因-778T/C多态与2型糖尿病合并冠心病的发病仍存在相关关系(0R=2.0,95％ CI:1.3～3.0).结论 ApoM基因-778T/C多态可能是中国汉族人群2型糖尿病合并冠心病患者发病的独立危险因子.
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中国北方汉族人群中载脂蛋白M基因多态性分布特征及连锁不平衡分析
目的 研究中国北方汉族人群中载脂蛋白M基因(apolipoprotein M, APOM)多态性分布特征及其连锁不平衡关系.方法 采用PCR扩增基因组DNA直接测序法结合PCR-限制性片段长度多态方法对330名中国北方汉族健康人群的APOM基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)进行分析.结果 中国北方汉族人APOM基因存在1号内含子rs805264位点、5号内含子rs707922位点及 rs707921位点3个多态位点,不同种族及地区APOM基因SNP差异有统计学意义.APOM基因rs805264位点、rs707922位点及rs707921位点SNP在中国北方汉族人群中呈现明显的连锁不平衡,主要有G-G-C、A-T-A两种单体型.结论 APOM基因SNP在中国北方汉族人群中存在显著连锁不平衡.
