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抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7作用机制的初步研究
目的测定抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7体外抗肿瘤谱,初步研究其抗肿瘤机制.方法用MTI法测定PHⅡ-7体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪、电子显微镜和琼脂糖凝胶电泳观察PHⅡ-7对肿瘤细胞凋亡的诱导作用,用Northern印迹分析检测PHⅡ-7对耐药相关基因mdr1和sorcin的影响.结果 PHⅡ-7对多种人肿瘤细胞的生长有抑制作用,IC50为0.34～18.61μmol/L,更为突出的是,对于MDR类抗肿瘤药无效的多药耐药肿瘤细胞,PHⅡ-7同样具有生长抑制作用;1 μg/ml的PHⅡ-7可诱导HL60、HL60/ADR细胞凋亡;PHⅡ-7可抑制K562/A02细胞中耐药相关基因的表达.结论 PHⅡ-7是一种有较好前景的抗耐药肿瘤新药,其可能通过抑制耐药相关基因mdr1和sorcin的表达而提高多药耐药细胞内药物浓度,从而引起肿瘤细胞凋亡.
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Sorcin在鳗鱼免疫器官的组织化学研究
目的:探究sorcin蛋白在鳗鱼主要免疫器官中的分布情况,为应用sorcin蛋白研制药用新靶点和应用鱼用疫苗奠定理论基础.方法:运用组织学和组织化学技术,在鳗鱼的主要免疫器官中进行sorcin蛋白的免疫组化定位研究.结果:sorcin蛋白在鳗鱼的心脏、肠、肝脏中均有分布.结论:sorcin蛋白在鳗鱼免疫器官中的分布情况与其功能密切相关.
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LoVo/Adr细胞中sorcin基因的表达与细胞Ca2+浓度的关系
目的:探讨在人结肠癌耐药株LoVo/Adr细胞中可溶性耐药相关钙结合蛋白(soluble resistance related calciumbinding protein,sorcin)与Ca2+浓度的关系.方法:以Fluo-3/AM标记细胞内Ca2+,用共聚焦显微镜观察其浓度变化;采用RT-PCR和免疫组化的方法检测细胞中sorcin基因的mRNA水平和蛋白水平.结果:与亲本LoVo细胞相比,耐药LoVo/Adr细胞中Ca2+浓度显著增高(P＜0.01);sorcin基因在LoVo细胞中几乎不表达,而在耐药LoVo/Adr细胞中,无论mRNA水平还是蛋白水平均显著高表达(P＜0.01).结论:耐药LoVo/Adr细胞中sorcin高表达没有引起细胞内Ca2+浓度的降低.
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Sorcin在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达及定位
目的:研究抗药蛋白sorcin(又称可溶性抗药相关蛋白)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F/Hca-cP中的定位及表达差异,进一步探讨其在肿瘤淋巴道转移中的作用.方法:以小鼠腹水肝癌高淋巴道转移株Hca-F和小鼠腹水肝癌低淋巴道转移株Hca-P为研究对象,采用实时定量PCR技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中基因水平的表达差异;采用Western免疫印迹技术检测sorcin在Hca-F/Hca-P细胞中蛋白水平的表达差异;采用免疫荧光技术检测sorcin在细胞中的定位情况;采用细胞计数试剂盒-8检测肿瘤细胞的增殖能力;应用Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力.结果:Hca-F细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力都明显高于Hca-P细胞;sorcin在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的1.5和1.8倍;sorcin在两种小鼠腹水型肝癌细胞株中的定位主要位于细胞质.结论:sorcin在Hca-F中呈高表达,主要定位于细胞质,可能在其增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,为进一步探讨其作用机制和功能奠定了基础.
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Sorcin高表达与胃癌细胞株SGC7901多药耐药的关系
背景与目的:长春新碱耐药胃癌细胞SGC7901/VCR是具有P-糖蛋白(P-gp)高表达的典型多药耐药细胞.但P-gp抑制剂维拉帕米(VRP)不能完全逆转其耐药,说明还存在其它耐药机制.我们运用差异蛋白质组学技术研究发现,可溶性耐药相关钙结合蛋白(Sowin)在SGC7901/VCR中表达较SGC7901细胞明显上调.为进一步阐明Sorein与胃癌细胞耐药的关系,本研究构建了FLAG-Sorein融合表达载体,探讨Sorein在胃癌多药耐药中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transeription-polymerse chain reaction.RT-PCR)扩增Sorein cDNA片段编码区序列全长,DNA重组技术构建FLAG-Sorein融合表达载体,经脂质体介导稳定转染SGC701细胞,RT-PCR及Western blot分别检测转染细胞Sorein mRNA表达的变化;噻唑蓝(MTT)法测定转染细胞及对照细胞对化疗药物的敏感性.用Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞,RT-PCR检测Sorcin表达水平的变化.MTT法测定转染后细胞对VCR敏感性的变化.结果:RT-PCR法扩增出616 bp全长Sorein cDNA片段,成功构建了FLAG-Sorcin融合表达载体;BT-PCR及Western blot证实,Sorcin在SGC7901转染细胞中高表达;Sorcin高表达的SGC7901细胞对长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、紫杉醇(Taxol)、氟尿嘧啶(5-FU)分别产生了8.87倍、6.13倍、6.67倍和2.80倍耐药.Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞后.RT-PCR验证Sorcin表达被抑制,MTT结果显示细胞对VCR敏感性增加.结论:Sorcin高表达可致SGC7901细胞产生低倍数的多药耐药,说明Sorcin与SGC7901细胞多药耐药密切相关,有望成为逆转胃癌多药耐药的靶点.
