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广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型LOX-1表达的研究
目的 建立猪动脉粥样硬化(AS)模型,探讨该模型中LOX-1表达的变化.方法 将10头广西巴马小型猪分别喂正常(CD)和高脂、高糖、高胆同醇(HFSCD)饲料,每月末测定血脂水半.第5个月末处死动物,采用苏丹Ⅳ检测动脉粥样斑块病变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem Blot印迹分别检测主动脉组织中LOX-1的mRNA和蛋白质表达.结果 与CD组比较,HFSCD组血浆甘油三酯、高密度脂蛋白胆同醇(HDI-C)和总胆同醇水平异常升高;动脉有明显的脂质条纹及斑块;动脉粥样硬化小型猪主动脉组织的LOX-1的mRNA及蛋白质的表达均上=调(P＜0.05).结论 高脂、高糖、高胆同醇饲料喂养小型猪可建立As动物模型;AS小型猪主动脉组织的LOX-1表达上调.
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小型猪急性选择性肺血栓栓塞模型的建立及评价
目的 建立小型猪选择性左下肺动脉急性肺血栓栓塞症(APTE)模型.方法 实验用小型猪8只,采用介入技术,选择性左下肺动脉定量、定性注入大团块自体新鲜静脉血栓,肺动脉造影确认左下肺动脉栓塞成功.监测血流动力学参数并行肺CT扫描和肺大体解剖,以对小型猪APTE模型进行评估.结果 栓塞后即刻,平均肺动脉压(MPAP,mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa)和肺毛细血管压(PCWP,mm Hg)测定值与基线值比较均显著升高,差异均有统计学意义(MPAP,42.0±3.4比20.2±3.0,PCWP:8±2比4±3,均P＜0.05),在栓塞后2h内各时间点测定值维持在较高水平.栓塞2h内右心输出量(CO)变化不显著.体循环收缩压(SAP,mm Hg)和心率(次/min)在栓塞后测定值较基线值均显著升高,差异均有统计学意义(SAP:102±12比80±7,心率:119士22比86±14,均P =0.008).肺动脉造影、肺CT成像和肺大体解剖均显示选择性左下肺定位建立APTE模型成功.结论 本研究建立的小型猪急性APTE模型可行、可控、稳定,适用于APTE诊治相关的实验研究.
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直接心肌内注射血管内皮生长因子基因对慢性缺血心肌侧枝循环生成的影响
目的观察血管内皮生长因子基因(rAAV2-hVEGF165)直接心肌内注射促进慢性缺血心肌侧枝循环生成的作用.方法小型猪左冠状动脉回旋支放置血管缩窄环,建立慢性心肌缺血模型.5周后应用心电图、冠脉造影和心脏核磁共振成像确认左回旋支闭塞或相应心肌的缺血.动物随机分为实验组和对照组,分别在缺血心肌内直接注射rAAV2-VEGF165(1×1012virus genomeml)或同等量的磷酸盐缓冲液或rAAV2-LACZ(1×1012virus genomeml).治疗后6个月,冠状动脉造影了解有无侧枝循环生成.结果放置血管缩窄环后5周,所有动物均出现左回旋支完全、次全闭塞和旋支供血区域的心肌缺血.治疗后3个月,缺血心肌内可检测到LACZ和VEGF蛋白的阳性表达;治疗后6个月,VEGF组缺血心肌内毛细血管和小动脉密度均高于对照组(P<0.05);结论直接在小型猪慢性缺血心肌内注射rAAV2-VEGF165,VEGF165基因可转染入心肌组织内,并可在缺血部位显著促进侧枝循环形成.
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N-乙酰半胱氨酸对脑死亡巴马小型猪心脏的保护作用及其机制
目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脑死亡状态下巴马小型猪心脏形态与功能的影响.方法 应用改进的缓慢间断颅内加压法建立巴马小型猪脑死亡模型.将实验动物随机分为3组,每组5只.对照组(A组):动物麻醉后仅行开颅与开关腹手术.非药物干预组(B组):建立脑死亡模型,不进行药物干预.NAC处理组(N组):建立脑死亡模型,于脑死亡后1和12 h,按200 mg/kg的剂量将NAC加入100 ml生理盐水中,经静脉缓慢滴注.分别于脑死亡后6、12和24 h检测各组血清中肌钙蛋白T(cTnT)的水平以及干扰素α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)以及白细胞介素6(IL-6)含量.脑死亡后24 h,取各组心尖部心肌组织,光镜下观察心脏组织结构变化,电镜下观察心脏组织超微结构变化,免疫组织化学染色法观察核因子κB(NF-κB)的表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB mRNA的变化.结果 脑死亡6 h后,B组及N组的血清cTnT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均开始升高,但N组升高幅度显著低于B组.脑死亡后24 h可见心肌细胞出现损伤性改变;N组心肌细胞损伤明显轻于B组.B组及N组心肌细胞中NF-κB mRNA及其蛋白表达水平均升高,但N组显著低于B组.结论 N-乙酰半胱氨酸能够减轻脑死亡状态下心脏的形态和功能损伤性改变,其机制可能与抑制NF-κB mRNA及其蛋白的表达,减少炎症介质的释放有关.
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新生猪胰岛细胞的HLA-G1基因转染
目的探讨HLA-G1基因转染新生猪胰岛细胞的可行性,检测其表达和功能状况.方法体外分离纯化新生猪胰岛细胞,脂质体载体转染HLA-G1基因.免疫荧光法检测HLA-G1基因在胰岛细胞上的表达状况;51Cr释放实验分析其对人NK细胞细胞毒的抑制作用.结果新生猪胰岛细胞HLA-G1基因表达率大约为50%,体外转染24～48 h达高峰;混合淋巴细胞培养(胰岛细胞+NK细胞)后,空质粒转染组的胰岛细胞溶解率为71.57%,而转染组胰岛细胞溶解率为53.5%.结论利用脂质体Genejammer转染体外培养的新生猪胰岛细胞,可以获得靶基因的瞬时高效表达;HLA-G1基因转染可以有效抑制NK细胞对异种胰岛的细胞毒作用.
