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重组人血管内皮抑素联合紫杉醇化疗对人乳腺癌MDA-MB-435细胞抗凋亡基因Bcl-2的影响
目的 探讨重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇对人乳腺癌MDA-MB-435细胞抗凋亡基因Bcl-2的影响.方法 将BALB/c裸鼠32只进行细胞培养,随机分为4组,其中3个化疗组(恩度组、紫杉醇组及恩度联合紫杉醇组)和1个对照组,每组8只.化疗组为腹腔注射给药,第1、8天各给药1次,给药剂量:恩度10 mg/kg、紫杉醇注射液10 mg/kg.对照组腹腔注射生理盐水,第1、8天各注射1次.给药15d后处死小鼠并取出瘤体,将瘤体组织行HE染色和免疫组化SP法染色.原位末端标记法检测细胞凋亡,并计算癌细胞凋亡指数(AI).结果 恩度组、紫杉醇组及恩度联合紫杉醇组Bcl-2表达均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).恩度联合紫杉醇组Bcl-2表达分别显著低于恩度组、紫杉醇组,差异有统计学意义(P＜0.05).恩度组、紫杉醇组及恩度联合紫杉醇组AI均显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).恩度联合紫杉醇组AI分别显著高于恩度组、紫杉醇组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抗凋亡基因Bcl-2可能参与了乳腺癌的发生、发展过程,恩度联合紫杉醇化疗可降低Bcl-2表达,促进乳腺癌细胞凋亡,因此,Bcl-2水平检测在恩度联合紫杉醇治疗乳腺癌效果及预后评估中有重要的参考价值.
关键词： 乳腺癌 抗凋亡基因Bcl-2 恩度联合紫杉醇 化疗 -
呼吸道合胞病毒非结构蛋白1对凋亡调节机制的研究
目的 研究呼吸道合胞病毒(RSV)非结构蛋白(NS)1调节人肺Ⅱ型腺上皮癌细胞(A549)凋亡基因/抗凋亡基因表达的作用机制.方法 构建RSV-NS1表达质粒(pNS1),合成siRNA(siRNA-bcl-2、siRNA-NS1、错配序列),制作其复合物.选用A549细胞,进行质粒转染,获得pNS1 A549细胞、sibcl-2-pNS1 A549细胞、siRNA-pNS1 A549细胞、错配序列A549细胞.进行质粒对凋亡调节实验[pNS1转染组(分2亚组),错配对照组]和抑制基因实验[siNS1干预处理组、RSV感染组、错配对照组].应用Western blot检测pNS1转染A549细胞后0、24、48、72 h Bax及Bcl-2的蛋白表达水平、流式细胞仪测细胞凋亡率;流式细胞仪测NS1沉默后的细胞凋亡率.结果 Bax和Bcl-2在A549细胞均有表达,当pNS1转染A549细胞后,Bax蛋白表达随时间逐渐降低,Bcl-2表达明显上调,组内蛋白表达量差异有统计学意义(P＜0.05).pNS1转染亚1组细胞凋亡率较错配对照组显著下降(P＜0.05).经sibcl-2转染后的细胞,pNS1转染显著上调Bax的蛋白表达,24 h达到高峰,并持续表达72 h;细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).RSV感染组在72 h内显著抑制细胞凋亡(P＜0.05),而在siNS1干预处理组,细胞凋亡率虽然均较错配对照组降低,但无统计学意义(P＞0.05).结论 呼吸道合胞病毒NS1通过上调抗凋亡基因bcl-2、下调凋亡基因bax延迟A549细胞凋亡.
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DMSO对脑损伤后Bcl-2基因表达影响的实验研究
目的:探讨二甲基亚砜(DMSO)对颅脑损伤后细胞凋亡调控基因Bcl-2变化的影响.方法:采用自由落体撞击脑损伤模型造成中度颅脑损伤,治疗组伤后经尾静脉给予DMSO 50mg/kg.损伤对照组、治疗组分别于损伤后6h、12h、24h、48h、72h和168h随机点杀动物6只,空白对照组于6小时一次处死.采用免疫组织化学方法检测凋亡基因Bcl-2表达情况.结果:治疗组Bcl-2蛋白表达平均阳性细胞数明显增加,与损伤对照组对应时相比较P<0.01.结论:DMSO的应用可以阻止抗凋亡基因Bcl-2的下调,从而抑制脑损伤后所致的细胞凋亡.
关键词： 二甲基亚砜 颅脑损伤 抗凋亡基因Bcl-2 -
维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究
目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制.方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达.结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol·L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P＜0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P＜0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P＜0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异.结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一.
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胆囊病变时bcl-2和p16蛋白产物的表达和意义
对25例胆囊粘膜异型增生和40例胆囊腺癌标本用免疫组化方法观察bcl-2和p16蛋白的表达,并与正常胆囊粘膜比较.结果:在正常胆囊粘膜中均未见bcl-2和p16表达,而胆囊粘膜上皮异型增生及胆囊腺癌组织中,两者的表达阳性率较正常组织明显增高(P＜0.01),且bcl-2和p16蛋白的阳性率随着异型增生程度的增高而增加;p16的表达还与胆囊腺癌之浸润程度及淋巴结转移有关.本实验结果提示:bcl-2及p16蛋白表达在胆囊腺癌和胆囊粘膜异型增生中起了一定作用;p16可作为胆囊癌患者的一个预后指标.
关键词： 免疫组化 胆囊腺癌 异型增生 抗凋亡基因Bcl-2 肿瘤抑制基因p16
