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维生素D对2型糖尿病肾病大鼠肾脏中转化生长因子-β1、重组人胶原蛋白-1和结缔组织生长因子表达的影响
目的：探讨维生素D对糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和重组人胶原蛋白-1(collagen-1)表达的影响，进一步探讨以上3个基因在糖尿病肾病中相互作用以及维生素D对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用。方法将54只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(18只)、模型组(18只)、治疗组(18只)。其中，模型组及治疗组大鼠均行糖尿病肾病造模，饲以高脂高糖饲料6周，空腹12 h后给予小剂量链腺佐菌素腹腔注射。注射1周后，不同日期测随机血糖(GLU)3次，若3次GLU均≥16.7 mmol/L为2型糖尿病大鼠。2型糖尿病成模后的大鼠在6周和7周时用尿微量蛋白试纸连续测大鼠晨尿3次以上，若为阳性，则为2型糖尿病肾病的大鼠。治疗组给予骨化三醇溶于0.05 mL花生油以0.03μg/(kg·d)灌胃37 d，模型组给予花生油灌胃37 d。处死大鼠，取肾脏，采用HE、电镜技术观测肾脏组织的形态学变化，采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)评价肾脏TGF-β1、collagen-1及CTGF基因表达的变化。结果①模型组TGF-β1、collagen-1及CTGF基因表达高于正常对照组(P<0.05)，治疗组TGF-β1、collagen-1及CTGF基因表达明显低于模型组(P<0.05)。②采用HE、电镜技术可以看出治疗组病理组织形态学，尤其是组织结构完整性明显优于模型组。结论糖尿病肾病大鼠中，维生素D可以通过下调TGF-β1、collagen-1及CTGF基因的表达，对糖尿病肾病起保护作用。
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转化生长因子1与食管癌的研究进展
食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一,全世界每年约有20万人死于食管癌,目前其发病原因和机制仍未完全阐明,近年来细胞因子在其中起到的作用日益受到重视.转化生长因子1(TGF-1)被认为是一类具有激素样活性的多肽,目前发现其与肿瘤的发生密切相关[1].现就TGF-1在食管癌发生、发展及防治中的作用的研究进展综述如下.
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健脾补肾益气养阴法对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏CTGFmRNA、TGF-β1mRNA表达的影响
目的:观察健脾补肾、益气养阴法对糖尿病肾病大鼠肾脏基因表达的影响.方法:选用Wistar大鼠,通过高脂高糖饮食加腹腔小剂量注射链脲佐菌素复制糖尿病肾损伤大鼠模型,采用逆转录聚合酶链反应检测肾内TGFβ1 mRNA、CTGF mRNA表达情况.结果:健脾补肾、益气养阴法能下调TGFβ1 mRNA、CTGF mRNA的表达.结论:健脾补肾、益气养阴法通过抑制转化生长因子1、结缔组织生长因子及血管内皮生长因子蛋白表达,抑制TGF-β1 mRNA、CTGFmRNA表达,从而降低蛋白尿,抑制肾小球细胞及肾间质成纤维细胞合成ECM,抑制肾脏肥大,终延缓了疾病的进展.
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西那普利对梗阻性肾病大鼠保护作用的初步研究
目的从蛋白质水平研究转化生长因子(TGFβ1)在梗阻性肾病中所起的作用及血管紧张素转化酶抑制剂-西那普利(Cilazapril)对其表达的影响.方法除对照组(C组)外的所有成年SD大鼠均接受单侧输尿管结扎术(UUO),术前24h起治疗组(A组)每日予Cilazapril(10mg/kgday)灌胃,B组与C组则予相同剂量的生理盐水灌胃,共15d.采用图象分析仪检测结扎侧肾(OK)小管肾间质的面积及纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原的含量,增殖细胞核抗原(PCNA)染色计算增殖细胞数.TGFp1则利用免疫组化及Western blot杂交两种方法检测.结果 C组肾间质的TGFβ1蛋白几乎不表达,而B组表达较强,同时B组的肾间质面积、FN、Ⅰ型胶原水平及增殖细胞数均显著增加(P＜0.05).而A组使用Cilazapril后可使其TGFβ1的蛋白表达下降到B组的1/4.61,肾间质面积及FN、Ⅰ型胶原含量也显著减少(P＜O.05).结论TGFβ1蛋白水平表达增加很可能是梗阻性肾病的重要致病因素之一,而Ci1azapril由于能使其表达减少从而对梗阻侧肾脏起到重要的保护作用.
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转化生长因子β1对种植体表面成骨细胞I型胶原蛋白基因表达研究
目的：通过观察特定浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)，在不同时间刺激体外培养种植体表面成骨细胞中I型胶原蛋白表达情况，探讨TGF-β1对种植体表面成骨细胞增殖分化的影响。方法：体外培养成骨细胞模拟种植体植入后的体内环境接种于钛片表面,将其分为2个浓度刺激组和对照组。刺激组分别加入0.5ng/mL、10ng/mL的TGF-β1刺激细胞增殖和分化，分别收集刺激后第2d、5d、7d培养的细胞。通过RT-PCR检测不同培养时间成骨细胞中的I型胶原蛋白mRNA表达，对照组不加TGF-β1，比较各组间差异程度。结果：浓度为0.5ng/mL的外源性TGF-β1加入到接种于模拟体内种植体的钛片表面的成骨细胞中后，可显著增加成骨细胞中I型胶原蛋白表达(P<0.05)；而浓度为10ng/mL的外源性TGF-β1可降低成骨细胞中I型胶原蛋白的表达(P<0.05)。TGF-β1刺激后的I型胶原蛋白在不同时间培养的成骨细胞中，表达在凝胶成像系统光密度分析后可见与对照组中表达量相比，低浓度刺激组表达量略有升高，高浓度刺激组表达量略有降低。结论：浓度为0.5ng/mL的TGF-β1对I型胶原蛋白的表达有促进作用；浓度为10ng/mL外源性TGF-β1对I型胶原蛋白表达有抑制作用。
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蟾蜍灵对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞IL-6和TGF-β1表达的影响
目的 探讨蟾蜍灵对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及白细胞介素6(IL-6)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为蟾蜍灵干预(A)组、LPS刺激(B)组和对照(C)组,应用台盼兰拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,MTT观察LPS诱导的GMC增殖的变化,RT-PCR检测TGF-β1和IL-6 mRNA的相对表达.结果 与B组相比,A组蟾蜍灵10-8mol/L和10-7mol/L明显抑制GMC增殖,A492nm值分别为[(0.818±0.058)和(0.574±0.182),P<0.01].B组IL-6和TGF-β1 mRNA相对表达量较C组和A组明显减少(P<0.01).结论 蟾蜍灵明显抑制LPS诱导的大鼠系膜细胞增殖及其IL-6和TGF-β1的表达.
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尾加压素Ⅱ诱导乳鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的信号转导机制研究
目的 探讨尾加压素Ⅱ (urotensin Ⅱ,UⅡ)对乳鼠心肌成纤维细胞(cardiac myofibroblasts,CFs)增殖及胶原合成的影响.方法 体外培养CFs作为实验模型,不同浓度UⅡ处理细胞后,通过ELISA法检测各组培养细胞上清中TGF-β1的含量变化,分别利用CKK-8细胞增殖法及Western blot分析UⅡ受体拮抗剂(SB-611812)及PKA特异性阻断剂(KT5720)对UⅡ诱导的CFs增殖及胶原蛋白col-Ⅰ、col-Ⅲ表达的影响.结果 UⅡ 10-10,10-9,10-8 mol·L-1处理细胞后,CFs培养上清中TGF-β1的含量及各组CFs的吸光度值与对照组相比明显增加(P＜0.05),而在10-7 mol·L-1U Ⅱ处理细胞后,上述参数与对照组比较无显著差异.1 mol·L-1 SB-611812+10-8 mol·L-1 UⅡ组和1 mol·L-1 KT5720+10-8 mol·L-1 UⅡ组的TGF-β1的含量及CFs的吸光度值均显著高于对照组(P＜0.05),但显著低于10-8 mol·L-1 U Ⅱ组(P＜0.05),且两组col-Ⅰ、col-Ⅲ型胶原蛋白表达均低于10-8 molL-1 U Ⅱ组.结论 UⅡ上调TGF-β1水平促进了CFs的增殖,诱导细胞表达胶原蛋白col-Ⅰ、col-Ⅲ,这一过程可能涉及cAMP-PKA信号转导通路.
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脂肪间充质干细胞向髓核样细胞诱导分化的初步研究
[目的] 定向诱导大鼠脂肪间充质干细胞分化为髓核样细胞,为椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗奠定生物学基础.[方法] (1)200 g SD雄性大鼠断颈处死后,取腹股沟脂肪垫处脂肪,0.1%胶原酶消化,体外接种培养,同时采用极限稀释法纯化细胞;(2)利用流式细胞技术对细胞表面标记进行鉴定;(3)第3代细胞消化计数后,用1.2%海藻酸钠溶液悬浮,调整细胞密度至1×10~6/ml,滴入3.5%CaCl_2溶液形成微球,加入含TGF-beta1的诱导培养基,低氧条件下进行微球联合培养;(4)7 d后,取部分微球进行Alcian Blue染色并收集微球内细胞提取RNA,进行RT-PCR检测.[结果] (1)体外培养的脂肪间充质干细胞主要呈梭形和多角形,核大、核仁明显,平行排列生长或呈漩涡状生长;(2)流式细胞仪检测显示Sca-1、CD44的阳性率分别为95.2%、99.7%,CD45、CD11b的阳性率分别为0.4%、1.5%;(3)微球联合培养7 d后,Alcian Blue染色表明,实验组细胞外基质的生成明显多于对照组;(4)RT-PCR结果证实,髓核细胞标志基因和软骨细胞标志基因的表达,实验组明显高于对照组.[结论] (1)本实验方法可以获得大量均一的脂肪间充质干细胞;(2)脂肪间充质干细胞可以被定向诱导分化为髓核样细胞;(3)首次探讨了将脂肪间充质干细胞体外诱导后移植治疗椎间盘退变性疾病,为椎间盘退变性疾病的干细胞移植治疗提供了新的思路.
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结直肠癌患者手术前后血清TGF-β1下降水平与预后的关系
目的 分析结直肠癌手术前后血清转化生长因子β1(TGF-β1)下降水平与预后的关系.方法 选择TNM 分期为Ⅱ～Ⅲ期的结直肠癌患者114例,术前未行新辅助化疗或放疗,均行结直肠癌根治切除术,术后采用FOLFOX4方案化疗12个周期;分别于术前及术后第1周取空腹静脉血,采用酶联免疫吸附法检测血清TGF-β1;术后均至少随访3年,观察复发转移情况, 统计无瘤生存期.结果 结直肠癌患者术后较术前血清TGF-β1水平降低(P<0.05),血清TGF-β1下降率为37％±17％、中位数为39％.114例患者中,术后复发转移38例,无瘤生存期(29.17±10.81)个月,无瘤生存率为66.7％(76/114).其中,血清TGF-β1下降率≥39％者中发生复发转移者少于下降率<39％者(P<0.05).Pearson相关分析显示,血清TGF-β1下降水平与结直肠癌复发或转移患者3年无瘤生存期呈正相关(r=0.414,P=0.01).血清TGF-β1下降率≥39％者无瘤生存率为78.9％(45/57),高于<39％者的54.4％(31/57),P<0.05.结论 结直肠癌患者术后第1周血清TGF-β1水平较术前显著降低,其下降程度较大者预后较好,可为结直肠癌患者预后判断提供参考.
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甲乙煎对肝纤维化大鼠肝组织MMP2及TGFβ1表达的作用
目的 观察中药甲乙煎对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP2)及转化生长因子1(TGFβ1)表达的作用.方法 雄性清洁级Wister大鼠60只,随机分为正常对照组和肝纤维化模型组,运用二甲基亚硝胺对模型组大鼠诱导肝纤维化.4周后,将模型组大鼠随机分为模型对照组、甲乙煎高剂量[22 g/(kg·d)]组和低剂量[5.5 g/(kg·d)3组.对甲乙煎高、低剂量组大鼠分别给予甲乙煎灌胃,共治疗4周,处死全部大鼠.采用免疫组化法检测大鼠肝组织MMP2和TGF/81的表达.结果 经中药甲乙煎高、低剂量治疗后,甲乙煎高、低剂量组的大鼠肝细胞浆内TGFfil的阳性表达与模型对照组比较,显著降低(P<0.05),其中甲乙煎高剂量组优于低剂量组(P<0.05);而甲乙煎高、低剂量组MMP2的表达较模型对照组无明显差异(P>0.05).结论 中药甲乙煎能下调实验性肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1的表达,这是其抗肝纤维化的作用机制之一.
