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支架蛋白JLP调控B细胞上CD40诱导的MAPK信号通路活化及细胞增殖
目的 对支架蛋白JLP在小鼠B细胞上CD40诱导信号通路活化及细胞增殖中的作用进行研究,探索支架蛋白JLP在CD40诱导小鼠B细胞信号通路及后续生物学效应中的作用.方法 磁珠分选法分选出jlp野生型和jlp基因敲除小鼠模型脾脏B细胞,使用免疫印迹法检测在接受CD40配体(CD40L)刺激后jlp野生型和jlp基因敲除型小鼠脾脏B细胞p38、Erk和Jnk MAPK,磷酸化c-Jun以及NF-κB信号通路及的活化情况,并使用CFSE检测两种基因型小鼠B细胞在接受CD40L刺激后细胞增殖情况.结果 jlp基因敲除小鼠B细胞在受到CD40L刺激后其p38、Erk、Jnk MAPK信号通路以及c-Jun活化情况均较jlp野生型小鼠B细胞明显减弱,而NF-κB信号通路的激活情况在两种基因型B细胞中并无明显差异,jlp基因敲除小鼠B细胞中CD40诱导的细胞增殖水平较jlp野生型B细胞明显降低.结论 支架蛋白JLP参与调控B细胞上CD40诱导的MAPK信号通路活化及细胞增殖.
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辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响
目的:探索辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响.方法:①体外实验:采用不同剂量X线辐照HK-2细胞,并于辐照后24 h和48 h提取细胞蛋白及mRNA,Western印迹法检测JLP、α平滑肌肌动蛋白(SMA)、转长生长因子(TGF)-β1蛋白的表达;RT-PCR检测JLP mRNA的表达;免疫荧光观察辐照后α-SMA的变化.②体内实验:将JLP野生型(jlp+/+)小鼠分为辐照组和非辐照组,辐照组小鼠采用6 GyX线照射,7d后处死小鼠.Western印迹法检测肾组织辐照后JLP、α-SMA、TGF-β1、胶原蛋白(COL)-Ⅰ蛋白的表达;PAS染色观察辐照后肾脏病理改变.结果:体外研究结果显示,辐照后JLP蛋白表达下调,α SMA、TGF-β1蛋白表达上调;免疫荧光结果显示辐照后α-SMA的荧光表达增加.jlp+/+小鼠辐照后7d肾脏病理可见明显空泡变性,刷状缘紊乱,小管坏死,脱落,部分小管再生;Western印迹结果显示,辐照后α-SMA,TGF-β1,COL-Ⅰ表达增加.结论:辐照下调肾小管上皮细胞JLP的表达,同时上调TGF-β1的表达,进一步促进α-SMA、COL-Ⅰ表达上调,加重肾脏病理损害.
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支架蛋白JLP在单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化中的作用及其机制探讨
目的 观察支架蛋白JLP基因缺失对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响,探讨JLP在梗阻性肾病肾纤维化形成中的作用和可能机制.方法 将jlp野生型(jlp+/+)小鼠和jlp敲除(jlp-/-)小鼠分为4组:jlp+/+假手术组(jlp+/+-Sham);jlp-/-假手术组(jlp-/-Sham);jlp+/+模型组(jlp+/+-UUO)和jlp-/-模型组(jlp-/--UUO).分别于术后7d和14 d处死小鼠.Masson染色观察肾间质纤维化改变;免疫荧光、免疫组化及Western印迹法观察JLP在各组小鼠肾组织的表达与分布;免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原纤维(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原纤维(COL-Ⅲ)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达;Western印迹检测肾组织α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3蛋白表达.结果 jlp+/+小鼠肾组织表达JLP,主要分布于肾小管.Masson染色结果显示,与jlp+/+-UUO组比较,jlp-/--UUO组肾间质胶原纤维增加,纤维化程度加重(均P＜ 0.05).免疫组化结果显示,与jlp+/+-UUO组比较,jlp-/--UUO组小鼠肾皮质α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和TGF-β1表达明显升高(均P＜0.05).Western印迹结果显示,与jlp+/+-UUO组比较,jlp-/--UUO组α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和TGF-β1蛋白表达明显升高(均P＜ 0.05),p-Smad2和p-Smad3蛋白表达也明显升高(均P＜0.05).结论 支架蛋白JLP在预防肾纤维化的形成中起重要作用,这一作用可能是通过抑制TGF-β1的表达和肌成纤维细胞生成来实现的.
