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浅谈Wnt/β-catenin信号通路在口腔鳞癌干细胞的迁移、侵袭及EMT转化中的作用
目的：分选口腔鳞癌干细胞并进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在鳞癌干细胞的迁移、侵袭及eMt转化中的作用。方法磁珠分选口腔鳞癌干细胞并用细胞流式技术检测其纯度；免疫印迹检测slug、twist及oct-4的表达变化；细胞划痕及transwell小室检测口腔鳞癌干细胞的迁移及侵袭能力。结果细胞流式技术检测磁珠分选得到的cd44+细胞，结果表明分选纯度达93%；细胞划痕及transwell小室检测Wnt/β-catenin信号通路在口腔鳞癌干细胞中的作用，实验数据表明激活Wnt/β-catenin途径能够显著促进肿瘤干细胞的迁移及侵袭。免疫印迹检测发现wnt3a能够明显增强口腔鳞癌干细胞中slug、twist及oct-4的表达，同时用dKK1进行抑制实验，结果显示slug、twist及oct-4的表达降低。结论 Wnt/β-catenin信号通路在cd44+的口腔鳞癌干细胞的迁移、侵袭及eMt转化中发挥重要作用，对于肿瘤的治疗有显著的指导意义。
关键词： cd44+ 口腔鳞癌干细胞 Wnt/β-catenin EMT -
喉癌Hep-2细胞CD44+CD133+生物学特性研究
目的：分选培养和鉴定人喉癌Hep-2细胞珠，并研究其体外生物学特性。方法通过磁珠细胞分选（mag-netic bead cell sorting，MACS）方法，分选培养和鉴定CD44+CD133+喉癌干细胞，应用免疫磁珠分选技术分选CD44+CD133+、CD44+CD133-、CD44-CD133+、CD44-CD133-4种亚群，对4种细胞绘制生长曲线，应用流式细胞仪检测其阳性率，应用侵袭实验、黏附实验和克隆形成实验评价其侵袭能力、黏附能力和克隆形成能力，用CCK8法检测其耐药性。结果对Hep-2、CD44+CD133+亚群、CD44+CD133-亚群、CD44-CD133+亚群、CD44-CD133-亚群5种细胞进行生物学特性研究，CD44+CD133+细胞亚群的增殖、侵袭、黏附、克隆形成能力及耐药性均增强，CD44+CD133+>CD44-CD133+>Hep-2>CD44+CD133->CD44-CD133-。结论免疫磁珠技术是分选CD44+CD133+的有效方法，CD44+CD133+细胞亚群具有明显的肿瘤干细胞特征，有望为喉癌细胞高表达标志物做一些新的探索。
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姜黄素抑制CD44+结肠癌细胞增殖的体外实验研究
目的:探讨姜黄素能否抑制CD44+结肠癌细胞的增殖.方法:MTT法检测姜黄素处理的结肠癌细胞增殖情况,Real-time PCR检测姜黄素处理的结肠癌细胞CD44 mRNA的表达水平,流式细胞术检测姜黄素处理的结肠癌细胞表面CD44的表达水平,磁珠分选方法分离得到结肠癌细胞中CD44+细胞和CD44-细胞, MTT法观察姜黄素对两种细胞增殖情况的影响.结果:姜黄素可抑制结肠癌细胞HCT116和HT-29增殖,Real-time PCR和流式细胞术均证明姜黄素可导致结肠癌细胞CD44表达下调,磁珠分选方法获得CD44+的结肠癌细胞并应用姜黄素处理后,结果提示姜黄素可抑制CD44+细胞增殖.结论:姜黄素可通过抑制结肠癌肿瘤干细胞增殖而降低结肠癌复发和转移,有望成为结肠癌治疗的辅助性药物.
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CD44+/CD24+表型的宫颈癌Siha细胞对顺铂的耐药及机制研究
背景与目的：肿瘤干细胞的存在是肿瘤细胞抗拒化疗的原因之一。该研究探讨CD44+/CD24+宫颈癌Siha细胞对顺铂的耐药性及相关机制。方法：体外培养Siha细胞，流式荧光激活细胞分选仪分选CD44+/CD24+Siha细胞，噻唑蓝(thiazolyl blue，MTT)法检测不同浓度顺铂对细胞的体外抑制情况，采用流式细胞仪检测10μg/mL顺铂作用于CD44+/CD24+Siha细胞24、48和72 h时的细胞凋亡率，实时定量聚合酶链式反应(quantitutive real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测CD44+/CD24+Siha细胞中Oct-4、ABCG2、Bcl-2的表达，同时设立亲代Siha细胞作为对照。结果：不同浓度顺铂(0.1、1、5、10、15和20μg/mL)对CD44+/CD24+Siha细胞的增殖抑制作用较亲代Siha细胞小[(88.4±1.5)%vs (92.9±1.5)%，(79.9±1.0)%vs (84.7±1.1)%，(69.8±0.8)%vs (75.1±2.9)%，(59.0±0.7)%vs (65.8±2.7)%，(49.6±0.9)%vs (52.1±0.5)%，(45.1±0.7)%vs (48.8±1.0)%，P<0.05]；与亲代细胞相比，当10μg/mL顺铂作用于CD44+/CD24+Siha细胞时，发现在24、48和72 h时的细胞凋亡率均较小[(3.05±0.16)%vs (5.17±0.27)%，(17.94±2.02)%vs (32.60±4.28)%和(40.14±3.01)%vs(56.62±5.32)%，P<0.05]。qRT-PCR和Western blot实验均显示CD44+/CD24+Siha细胞高表达Oct-4、ABCG2和Bcl-2，与亲代Siha细胞比较差异有统计学意义(P=0.015)。结论：CD44+/CD24+Siha细胞可以抵抗顺铂诱导的细胞凋亡，具有化疗抵抗性，并且高表达肿瘤干细胞表面标志物如Oct-4和ABCG2，该结果在宫颈癌肿瘤干细胞的有效分选以及肿瘤靶向治疗方面有深远意义。
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胃癌 MKN-45细胞系的无血清培养技术及干细胞的制备
目的：胃癌干细胞的制备困难一直是阻碍胃癌研究进展的主要因素。文中研究无血清培养基悬浮培养胃癌MKN-45细胞系技术，并根据胃癌干细胞（cancer stem cells，CSCs）的生物学标记筛选出该细胞系中的干细胞。方法 MKN-45细胞系在无血清培养基中培养8周后，取对数生长期的MKN-45细胞以Hoechst33342孵育后流式细胞仪（ FACS）检测侧群细胞。当侧群细胞达约25％时，收集全部细胞微球体，加荧光标记的CD133和CD44单抗孵育后 FACS 筛选，选CDl33＋CD44＋细胞即为胃癌干细胞。结果胃癌MKN-45细胞系中约40％的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖并形成自由飘浮的细胞球。双苯酰胺33342染色检测提示MKN-45细胞中侧群细胞含量为3．4％，而细胞球中侧群细胞细胞含量则明显增高，可达到26．9％；收集的侧群细胞通过FACS检测表面标记，MKN-45细胞CDl33＋CD44＋细胞含量为11．2％，而细胞球中CD133＋CD44＋细胞含量为90．3％。结论应用无血清培养基悬浮培养法能成功获得CSCs富集的肿瘤球，Hoechst33342及表面标记双重检测提取法可筛选出其中的CSCs，并可作为今后胃癌干细胞研究的实验基础。
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EGFR抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44+细胞及侧群细胞作用的研究
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44+细胞及侧群(SP)细胞的作用机制.方法 应用Hoechst33342染色、流式细胞仪检测HT29中CD44+细胞以及SP细胞比例和成瘤性,并对不同浓度EGFR抑制剂吉非替尼作用后球囊形成及SP细胞比例、不同化疗药物处理后CD44+细胞比例进行分析与比较.结果 空白对照组HT29中SP细胞比例为(3.82±0.08)％,经维拉帕米阻断后降为(0.34±0.03)％,吉非替尼10、15pmol/L作用48h后HT29中SP细胞比例明显降低(均P＜0.01),5-氟尿嘧啶(5-FU)作用48h后SP细胞比例变化不大(P＞0.05).与空白对照组比较,吉非替尼7 5、10、15μmol/L作用24、48h后CD44+细胞比例均明显降低(均P＜0.05);且随着吉非替尼的浓度增大,CD44+细胞比例逐渐降低(P＜0.05).与空白对照组比较,多烯紫杉醇、顺铂作用24、48h后CD44+比例均明显增大(均P＜0.05).随着时间延长,加入不同浓度的吉非替尼对球囊形成均具有抑制作用.结论 EGFR抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44+细胞及SP细胞具有生长抑制作用,且可抑制球囊形成.
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DADS抑制CD44+、CD24-人胃癌干细胞特性的作用研究
胃癌是现阶段对人类健康威胁大的恶性肿瘤之一,国际癌症研究机构(ICRG)的一项统计数据显示,2008年胃癌死亡病例占全球因肿瘤死亡患者的9.7%,仅次于肺癌,因此胃癌的治疗与控制是肿瘤研究的重点与难点.肿瘤干细胞(can-cer stem cells,CSCs)是肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞,被认为是肿瘤发生、复发及转移的根源,其中CD44+与CD24-具有无限增殖分化潜能,是胃癌形成与放、化疗抵抗的主要原因.本文将阐明二烯丙基二硫(diallyl disul-fide,DADS)对CD44+与CD24-细胞生长的抑制作用及对细胞周期的影响,为DADS的抗胃癌功效提供参考依据.
关键词： 胃癌 肿瘤干细胞(CSCs) 二烯丙基二硫(DADS) cd44+ CD24- 抑制作用 作用机制
