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浅谈Wnt/β-catenin信号通路在口腔鳞癌干细胞的迁移、侵袭及EMT转化中的作用
目的：分选口腔鳞癌干细胞并进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在鳞癌干细胞的迁移、侵袭及eMt转化中的作用。方法磁珠分选口腔鳞癌干细胞并用细胞流式技术检测其纯度；免疫印迹检测slug、twist及oct-4的表达变化；细胞划痕及transwell小室检测口腔鳞癌干细胞的迁移及侵袭能力。结果细胞流式技术检测磁珠分选得到的cd44+细胞，结果表明分选纯度达93%；细胞划痕及transwell小室检测Wnt/β-catenin信号通路在口腔鳞癌干细胞中的作用，实验数据表明激活Wnt/β-catenin途径能够显著促进肿瘤干细胞的迁移及侵袭。免疫印迹检测发现wnt3a能够明显增强口腔鳞癌干细胞中slug、twist及oct-4的表达，同时用dKK1进行抑制实验，结果显示slug、twist及oct-4的表达降低。结论 Wnt/β-catenin信号通路在cd44+的口腔鳞癌干细胞的迁移、侵袭及eMt转化中发挥重要作用，对于肿瘤的治疗有显著的指导意义。
关键词： cd44+ 口腔鳞癌干细胞 Wnt/β-catenin EMT -
人重组蛋白DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力作用
目的 探讨DKK1通过靶基因调节Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力的作用.方法 培养并鉴定口腔鳞癌干细胞,并将细胞分为3组,分别为空白对照组(A组),未转染siRNA;阴性对照组(B组),转染StealthTM RNAi的阴性对照;DKK1 RNAi组(C组),转染DKK1 StealthTMSelect RNAi.利用实时定量PCR(RT-PCR)检测3组的转染效率及口腔鳞癌干细胞中Wnt3a、Pitx2、Oct4 mRNA的表达情况.运用划痕实验和Transwell侵袭实验检测DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移和侵袭的影响.结果 流式细胞仪检测CD44及CD133表达量分别为88.0%及92.8%,提示所培养细胞为口腔鳞癌干细胞.瞬时转染后,应用RT-PCR检测提示,C组Wnt3a、Pitx2及Oct4 mRNA表达量较A组分别下降59.8%、70.7%和66.0%(P<0.05).细胞划痕实验结果显示,A、B、C组24 h的划痕愈合率分别为(54.32%±3.21%)、(49.46%±3.75%)和(14.13%±1.96%),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell实验结果显示,A、B、C组中穿透细胞膜的细胞数目分别为(115.6 ±14.3)个、(131.2 ±19.5)个和(37.3 ±6.8)个,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DKK1可以通过抑制Wnt3a,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制口腔鳞癌的转移及侵袭.
关键词： DKK1 Wnt/β-catenin信号通路 口腔鳞癌干细胞 迁移 侵袭 -
欧前胡素下调MCL-1提高口腔鳞癌干细胞顺铂敏感性实验研究
目的：探讨中药白芷活性成分欧前胡素增强顺铂对口腔鳞癌干细胞的杀伤活性及其机制。方法流式细胞术检测欧前胡素和顺铂对Cal27细胞系的肿瘤干细胞种群比例的影响。MTT法和Annexin V染色法检测欧前胡素对顺铂杀伤Cal27肿瘤干细胞能力的影响。利用Western blot方法验证欧前胡素是否调节Cal27肿瘤干细胞MCL-1的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot方法研究欧前胡素影响顺铂疗效的信号通路。结果顺铂组Cal27细胞系的肿瘤干细胞种群比例显著高于对照组（19.4％比8.5％，P﹤0.05），而顺铂联合欧前胡素组后肿瘤干细胞种群比例下降至11.5％（P﹤0.05）。顺铂联合欧前胡素组对Cal27肿瘤干细胞的细胞活力的抑制率为（57.4±3.4）％，凋亡诱导率为（36.7±2.1）％，均显著高于欧前胡素组的（7.9±6.6）％与（4.2±0.4）％（P﹤0.05）和顺铂组的（11.8±0.8）％与（8.4±0.5）％（P﹤0.05）。顺铂联合欧前胡素组Cal27肿瘤干细胞的线粒体膜电位显著低于欧前胡素组和顺铂组（0.37±0.02比0.96±0.04、0.86±0.03，P﹤0.05）。顺铂联合欧前胡素组处理的Cal27肿瘤干细胞的caspase-9和caspase-3的活化水平分别为0.48±0.03、0.56±0.04，显著高于欧前胡素组的0.03±0.01（P﹤0.05）、0.03±0.01（P﹤0.05）和顺铂组的0.10±0.02（P﹤0.05）、0.12±0.02（P﹤0.05）。与对照组比较，欧前胡素处理后Cal27肿瘤干细胞的MCL-1表达水平显著降低（0.29±0.02比0.89±0.05，P﹤0.05），而顺铂对MCL-1的表达无影响（0.90±0.05比0.89±0.05，P﹥0.05）。结论欧前胡素可通过下调MCL-1的表达提高口腔鳞癌干细胞对顺铂的敏感性。
