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高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响
目的：分析高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响。方法研究时间2015年7月—2016年4月，将36只SD大鼠随机分为模型组(皮下注射用生理盐水配成的蛋氨酸溶液)和对照组(相应体积的生理盐水)，检测不同时间点大鼠血浆同型半胱氨酸含量及脑内NMDA受体亚单位(NR1、NR2A、NR2B)的蛋白含量。结果模型组中第3小组大鼠的Hcy、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B分别为(21.46±1.37)、(0.99±0.13)、(0.95±0.18)、(1.47±0.25)，均高于第2小组和第1小组(P<0.05)，第1小组大鼠上述指标含量均为低，分别为(10.14±1.13)、(0.74±0.11)、(0.70±0.23)、(0.68±0.13)。模型组3个小组大鼠的脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B含量均高于对照组中对应小组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。结论高同型半胱氨酸血症会导致大鼠脑内NMDA受体亚单位的蛋白表达上升，加重大鼠脑神经损伤。
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NMDA受体亚单位在海马脑片和在体发育海马结构中表达变化的比较
目的:对比长期培养大鼠海马脑片与在体生后发育海马结构中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR1、NR2A和NR2B表达变化的异同,为利用海马脑片研究NMDA受体亚单位在生理和病理状态中的作用提供资料.方法:免疫组织化学染色、海马脑片培养技术及图像分析.结果:NR1、NR2B在海马脑片各区和生后大鼠海马结构各区表达模式相似,均呈"先升后降"的趋势,但升降幅度不同;NR2A在海马脑片各区是"先升、后降"的趋势,在生后海马结构各区则呈现"先降后升"的模式.NR1、NR2A、NR2B在脑片和在体发育海马的相似期间,在CA1、CA3、PG区表达均无显著性差异.结论:P3w/C2w时NR1和NR2B在海马脑片各区的表达强度,和其在生后大鼠海马结构中的表达较相似.
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NMDA受体亚单位NR1在离体人神经干细胞中的表达
目的 研究离体培养的人海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR1的表达.方法 分离培养胎龄8～12周人胚脑海马神经干细胞,对NSCs进行Nestin和分化鉴定.用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹和RT-PCR等方法检测原代、传代1次、传代2次的人胚胎海马NSCs中NR1蛋白和mRNA的表达.结果 在孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs中,NMDA受体亚单位NR1免疫细胞化学反应呈阳性,该受体亚单位的蛋白和mRNA均被检测到.结论 体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1.
关键词： 神经干细胞 人 NMDA受体亚单位 Western blot RT-PCR -
NMDA受体亚单位NR1在长期培养大鼠海马脑片中的免疫活性变化
目的研究NMDA受体亚单位NR1在长期培养大鼠海马脑片各区中免疫组织化学反应活性变化规 律.方法将新生6～9天大鼠海马和齿状回切成400μm厚脑片(即海马脑片),分别体外培养1、2、3、4、5周时再作20μm厚冰冻切片,行NR1免疫组织化学反应和图像分析.结果NR1在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞胞体的免疫反应均呈阳性,胞膜深染,胞质淡染.培养1周时,其反应强度为CA3区＞CA1区＞齿状回(DG);之后则为CA1区＞CA3区＞DG;3周时各区反应均达高峰.结论NR1在长期培养大鼠海马脑片各区的免疫活性有时空差异,提示NMDA受体的结构和功能在长期海马脑片培养中可能发生变化.
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大鼠海马脑片长期培养中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达变化
目的研究在长期培养大鼠海马脑片各区中N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚单位NR2A、NR2B表达的变化规律.方法400μm厚大鼠海马脑片,体外培养1、2、3、4、5周,再作20μm厚冰冻切片,行NR2A、NR2B免疫组织化学反应和图像分析.结果NR2A、NR2B在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞胞体均有表达,NR2B还在CA1区锥体细胞顶树突明显着色.1周时,NR2A的表达较弱;4周时升至高峰.在CA3区,NR2B的表达1周时即达高峰;但在CA1区其表达至3周时始达高峰.结论长期培养大鼠海马脑片各区中NR2A、NR2B的表达有时空变化,且二者的表达模式不同,提示此间NMDA受体的结构和功能可能也有改变.
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NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达
目的研究NMDA受体亚单位(NR1、NR2A和NR2B)mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点.方法原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析.结果NR1、NR2A和NR2B mRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达,其中NR1 mRNA的表达强,NR2A mRNA的表达弱.NR1mRNA在齿状回(DG)的表达水平明显强于CA1区和CA3区;NR2A mRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG;NR2B mRNA在海马各区的表达水平基本相同.结论NR1、NR2A和NR2B mRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同,其中NR2A mRNA在海马CA1区以及NR1 mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习、记忆等生理功能以及选择性易损现象有关.
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离体培养人神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达
目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达.方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定.通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达.结果:自孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs,NMDA受体亚单位NR2A和NR2B免疫细胞化学反应呈阳性,这两种受体亚单位的mRNA均被检测到.结论:体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR2A和NR2B.
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生后早期大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达变化
运用免疫组织化学反应和图象分析处理技术研究生后1 d、4 d、1周、2周、3周、4周、5周、6周的SD大鼠海马结构中NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B三种蛋白质的表达变化规律.结果表明,生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有NR1、NR2A、NR2B的表达,NR2B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达.NR1与NR2B的生后表达变化模式相似,在生后1 d和4 d,两者在CA3区的表达均高于CA1区;生后1周后两者在CA1区的表达则高于CA3区;到生后2～3周其表达达到峰值.而NR2A却与此不同,生后1 d、4 d时其在海马结构各区的表达较高,随发育时间延长表达逐渐下降,大约在生后4周降至谷底.整个发育过程中,NR1在海马结构各区的表达始终高于NR2A和NR2B的表达.这些结果提示,生后早期大鼠海马结构NR1、NR2A、NR2B的表达具有发育性时空差异和亚单位差异,这种差异可能与发育早期海马学习功能的特异性以及海马各区对缺血敏感性不同有关.
