首页 > 文献资料
-
质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+-ATPase活性及ryanodine受体结合反应的影响
目的:观察质粒DNA对离体大鼠骨骼肌肌质网Ca2+-ATPase活性及ryanodine受体结合反应的影响.方法:参照Jones等的方法比色测定肌质网Ca2+-ATPase活性;以3H-ryanodine作为配基,液闪测定肌质网Ca2+释放通道ryanodine受体与配体的结合.质粒DNA处理组预先将肌质网蛋白与质粒DNA 37℃共同孵育30min,而后再测定肌质网Ca2+-ATPase活性和ryanodine结合反应.结果:预先用10、20和30 μg pcDNA3及pcDNA3/ANF处理后,肌质网Ca2+-ATPase活性分别较对照组升高45%(P<0.05),68%(P<0.01)和109%(P<0.01)及109%,118%和145%(P值均小于0.01);质粒pcDNA3可明显降低ryanodine受体的亲和力,并使Bmax增强.结论:质粒DNA可能通过增强肌质网Ca2+-ATPase的活性促进肌质网对Ca2+的摄入,通过影响ryanodine 受体而调控肌质网Ca2+释放.
关键词： 质粒/药理学 Ca(2+)转运ATP酶/代谢 兰尼碱/代谢 肌/代谢 钙/代谢 -
钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗大鼠慢性心力衰竭
目的:观察肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植对慢性心力衰竭大鼠心功能的影响.方法:实验于2004-07/2005-12在北京医科大学生物化学系实验室完成.选取4周龄清洁级雄性SD大鼠作为骨髓供体.雌性SD大鼠作为细胞移植、基因治疗受体,随机数字表法分为4组:肌浆网钙离子ATP酶2a基因治疗组(n=7)、骨髓干细胞移植治疗组(n=7)、肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植组(n=8)、腺病毒空载体对照组(n=7).结扎左冠状动脉制作急性心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠模型,每组进行相应的基因治疗和细胞移植.治疗后21 d,采用苏木精-伊红染色和MASSON染色评价心脏形态及结构变化,组织多普勒评价各组心功能.并检测肌浆网钙离子ATP酶2a基因和蛋白在宿主心脏的表达.结果:29只雌性大鼠均进入结果分析.①与腺病毒空载体对照组大鼠相比,骨髓干细胞移植治疗组和肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗组大鼠心室腔明显减小.MASSON染色显示,肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗组大鼠蓝包的胶原纤维染色区域减少,红色的肌纤维染色区域增多.②肌浆网钙离子ATP酶2a基因治疗组、骨髓干细胞移植治疗组和肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗组大鼠左室前壁、室间隔收缩及舒张期纵向峰值速度均较腺病毒空载体对照组显著升高l左室前壁:(0.58±0.03),(0.67±0.02),(0.78±0.05),(0.31±0.02)cm/s;(0.81±0.04),(1.26±0.04),(1.39±0.05),(0.40±0.01)cm/s;室间隔:(0.60±0.05),(1.00±0.08),(1.33±0.04),(0.40±0.01)cm/s;(0.70±0.04),(1.28±0.05),(1.57±0.03),(0.44±0.03)cm/s,P＜0.001].与肌浆网钙离子ATP酶2a基因治疗组相比,肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗组大鼠左室前壁、室间隔收缩及舒张期纵向峰值速度升高(P＜0.001).③肌浆网钙离子ATP酶2a基因治疗组和肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗组心肌内肌浆网钙离子ATP酶2a mRNA表达强度明显高于骨髓干细胞移植治疗组和腺病毒空载体对照组.结论:肌浆网钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植能显著改善慢性缺血性心力衰竭大鼠心脏的收缩和舒张功能.
