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RT-PCR方法检测非神经元、类神经元、神经元细胞系中淀粉样前体蛋白基因表达
目的与方法:根据人淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)基因cDNA序列设计的引物,提取总RNA,利用RT-PCR方法检测非神经、类神经及神经细胞系APP基因的表达.结果:利用专门设计的引物不能检测野生型COS-7细胞中APP基因的表达,但可以检测转染人APP基因的非神经元类COS-7细胞,类神经元的野生型PC12及人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞中APP基因的表达.结论:利用特异设计的人APP基因引物及RT-PCR方法可以检测类神经及神经细胞系APP基因的表达.
关键词: 聚合酶链反应 基因表达 淀粉样β蛋白前体/代谢 阿尔茨海默病/病因学 -
阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白可与低密度脂蛋白受体相关蛋白6直接作用
目的:研究低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low density lipoprotein receptor related protein6, LRP6)的胞内代谢及其与淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的相关性.方法:构建含有APP羧基端106个氨基酸的融合表达质粒,用酵母双杂交系统筛选人胎脑cDNA文库.结果:发现LRP6的羧基端可以和含有β淀粉样蛋白和胞内区的APP片段相互作用.结论:使与AD相关的两个重要蛋白载脂蛋白E和APP联系起来,并提示LRP6可能在APP的代谢和β淀粉样蛋白的产生中起重要作用.
关键词: 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白前体/代谢 低密度脂蛋白受体相关蛋白 脂蛋白类 LDL -
神经节苷脂GM1对阿尔茨海默病β淀粉样蛋白前体基因转录及蛋白代谢的影响
目的:研究神经节苷脂GM1对β淀粉样蛋白(Aβ)分泌和β淀粉样蛋白前体(APP)基因转录水平的影响,探讨GM1在阿尔茨海默病Aβ生成过程中的作用机制.方法:利用人类APP695基因转染神经母细胞瘤细胞株,免疫沉淀Western印迹法检测经不同浓度GM1处理的细胞培养液中的Aβ含量,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中APPmRNA水平.结果:随GM1浓度增加,细胞分泌Aβ增加,GM110μmol.L-1组和100μmol.L-1组分别为对照组的1.33倍(t=1.29,P>0.05)和3.07倍(t=3.63,P<0.05);而APPmRNA水平无变化,APP特异性片段与内参照的比值3个组无显著性差异(F=0.23,P>0.05).结论:GM1不影响APP基因转录水平,其促进细胞分泌Aβ的作用可能与干扰APP的水解代谢有关.
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不同麻醉方式对老年患者经尿道前列腺电切术术后POCD发生率、血清S-100β及Aβ1-42水平的影响
目的 探讨全身麻醉与硬膜外阻滞麻醉对经尿道前列腺电切术(TU RP)治疗的老年患者术后认知功能障碍(POCD)发生率、血清S-100β及Aβ1-42蛋白的影响.方法 选取拟实施TURP的老年男性患者120例,病例收集时间为2014年3月至2016年8月,其中60例采用全身麻醉(全麻组)、60例采用硬膜外阻滞麻醉(硬膜外组),对比两种麻醉方法对患者认知功能、血清S-100β及Aβ1-42蛋白的影响.结果 硬膜外组和全麻组在术前、术后12、24、72 h及术后1周的MMSE评分差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者在术后12、24、72 h的MMSE评分较本组术前均明显降低(P<0.05).硬膜外组和全麻组在术前、术后12、24、72 h及术后1周的画钟试验(CDT)评分差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者在术后12、24、72 h的CDT评分较本组术前均明显降低(P<0.05).硬膜外组和全麻组在术前、术后12、72 h及术后1周的血清S-100β水平差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者在术后12、72 h的血清S-100β较本组术前均明显升高(P<0.05).硬膜外组和全麻组在术前、术后12、72 h及术后1周的血清Aβ1-42水平差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者在术后12、72 h的血清Aβ1-42较本组术前均明显降低(P<0.05).硬膜外组POCD发生率28.33% (17/60)与全麻组35% (21/60)差异无统计学意义(P>0.05).结论 老年TURP患者术后全身麻醉与硬膜外阻滞麻醉术后POCD发生率无明显差异,老年患者术后POCD的发生可能与血清S-100β升高、Aβ1-42降低有关.