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氟尿嘧啶联合白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡的体内外研究
目的 研究氟尿嘧啶(5-Fu)联合白藜芦醇对肿瘤细胞A431、TE-1的抑制和致凋亡作用及机制,以及两药联合对小鼠皮肤癌的治疗作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、生长曲线实验、Chou-Talalay法和乳酸脱氢酶(LDH)溢出实验对联合用药抗肿瘤作用进行体外评价.光镜观察、DNA Ladder和共聚焦测定胞内Ca2+变化研究药物诱导凋亡的作用和机制.两阶段促癌法诱发小鼠皮肤癌,免疫组化法检测鼠皮中活化caspase-3的表达.结果 联合用药可以大大降低氟尿嘧啶(5-Fu)或白藜芦醇对A431的中效浓度.两药联用对肿瘤细胞的凋亡有协同作用,可以观察到更多典型凋亡形态学变化及显著的DNA片段化现象,其机制可能与大量增加细胞中Ca2+强度有关.联合给药后小鼠表皮肿瘤数量明显减少,表皮细胞中caspase-3的活化程度与单药相比明显增加.结论 联合给药在体内外均有协同抗肿瘤作用.
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地西他滨抑制A431细胞生物学功能的机制
目的 检测地西他滨对A431细胞生物学功能的影响并初步探讨其机制.方法 将0、5、10和20 μmol/L的地西他滨分别作用于A431细胞,通过MTT法观察地西他滨对细胞增殖的影响,通过Western blotting和实时PCR检测地西他滨作用于A431细胞后细胞增殖相关蛋白Cyclin B1、PCNA和CDC2的改变.通过Hoeehst 33258染色检测0、5和10 μmol/L地西他滨对A431细胞凋亡状态的影响,采用Western blotting和实时PCR检测地西他滨对A431细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的影响.采用transwell实验检测细胞侵袭转移情况,并通过Western blotting和实时PCR检测0、5和10 μmol/L的地西他滨对侵袭转移相关蛋白MMP2的影响.结果 MTF检测发现,5、10和20 μmol/L的地西他滨作用于A431细胞24 h后对细胞增殖的抑制率分别为(43.81±1.53)％、(48.64±4.65)％和(50.69±4.99)％,随着药物的浓度增加,对A431细胞的增殖抑制率显著增加(P＜0.05).Hoechst 33258染色发现,地西他滨可以显著促进细胞凋亡,transwell实验也证明地西他滨可以明显抑制A431细胞的转移能力.Western blotting和实时PCR结果显示,地西他滨影响A431细胞中Cyclin B1、CDC2、PCNA、Bax、Bcl-2和MMP2蛋白及mRNA水平,地西他滨处理组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 地西他滨对外阴鳞状细胞癌的生物学功能有很强的抑制作用,可以作为治疗外阴鳞状细胞癌的化疗药物.
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BMI-1在不同时期表皮鳞癌细胞中的表达
目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对表皮鳞癌细胞株A431细胞凋亡的影响,并观察干细胞更新因子BMI-1在鳞癌A431细胞系不同分化时期的表达变化,以明确BMI-1在皮肤鳞癌细胞增殖分化中的功能.方法 体外培养A431细胞,分别于ATRA作用即刻、24 h及48 h收集细胞,流式细胞仪检测不同状态下细胞凋亡变化,west-ern blot法检测不同时期BMI-1蛋白表达差异.结果 随ATRA作用时间的延长可以显著提高A431细胞的凋亡率.同时24 h及48 h BMI-1表达逐渐减少,与即刻组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 ATRA可抑制鳞癌细胞A431增殖,并影响BMI-1在肿瘤细胞不同增殖状态的表达,同时说明干细胞更新因子BMI-1在维持皮肤鳞状细胞癌增殖中可能起关键作用.
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人鳞状细胞癌细胞株A431中Bmi-1基因的RNAi对其增殖的影响
目的 探讨人鳞状细胞癌细胞株A431中干细胞更新因子(B-cell specific moloney murine leukemia virus insertion site1, Bmi-1)基因的 RNA干扰(RNA interference, RNAi)对其增殖的影响.方法 转染Bmi-1基因的RNAi至人鳞状细胞癌细胞株A431,采用逆转录聚合酶联反应法(reverse transcription polymer-ase chain reaction, RT-PCR)筛选A431细胞株Bmi-1-RNAi沉默载体,采用Western印迹法测定Bmi-1蛋白表达,采用四甲基偶氮唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法测定细胞增殖抑制情况,并应用流式细胞仪测定细胞周期.结果 ① 转染Bmi-1shRNA 2 d后,A431细胞缩小,间隙变大,生长速度减缓.② 转染Bmi-1shRNA组Bmi-mRNA表达量明显低于空白对照组(P<0.05).③ 转染Bmi-1shRNA组Bmi-1蛋白表达较空白对照组明显降低.④转染Bmi-1shRNA组其S期细胞所占比例高于空白对照组,G2/M期细胞比例少于空白对照组(P<0.05).结论 RNAi可抑制Bmi-1mRNA及蛋白表达,限制A431细胞分化及增殖,阻滞其生长周期.
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全反式维A酸对A431细胞中BMI-1表达的影响
目的 研究全反式维A酸(ATRA)对表皮鳞癌细胞株A431细胞生长周期的影响及干细胞更新因子BMI-1在鳞癌A431细胞系不同分化时期的表达变化,以明确BMI-1在皮肤鳞状细胞癌细胞增殖分化中的功能.方法 体外培养A431细胞,分别于ATRA作用24h和48h时收集细胞,流式细胞仪检测不同状态下细胞周期的变化,免疫组化SP法检测不同时期BMI-1蛋白表达变化;对照组细胞不加药物直接检测.结果 ATRA作用48h后,A431细胞G0/G1分布比例增高,S期及G2期分布降低,且作用24h和48h时BMI-1表达逐渐减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ATRA可抑制鳞癌细胞A431增殖,并影响BMI-1在肿瘤细胞不同增殖状态的表达,说明作为干细胞更新因子BMI-1在维持皮肤鳞状细胞癌增殖中可能起关键作用.
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A431鳞状细胞异种移植瘤模型中c-Kit信号通路诱导其对EGFRIs耐药机制的影响
目的 建立EGFRIs(吉非替尼)耐药的EGFR野生型移植瘤模型,并研究其可能耐药机制.方法 雌性BALB/c裸鼠皮下注射A431细胞,肿瘤生长到150×200mm3,口服给予50mg/kg的吉非替尼,1次/d,连续25周后对EGFRIs产生耐药.比较敏感和耐药移植瘤的全基因组基因表达谱寻找目的基因.耐药模型分别接受空白对照组、吉非替尼、目的基因抑制剂(AMG706),或它们的混合物治疗21d,检测肿瘤组织生长、细胞凋亡、目的基因以及相关细胞因子表达情况.结果 C-kit在吉非替尼耐药的A431异种移植瘤中过表达,双重阻断EGFR和c-Kit信号有协同作用,引起细胞凋亡.结论 A431异种移植瘤模型中诱导的吉非替尼耐药可能与c-Kit过表达有关.EGFRIs和c-Kit抑制剂的联合治疗可能阻断这种耐药机制,抑制肿瘤细胞生长.
关键词： 表皮生长因子受体(EGFR) A431 C-kit 鳞状细胞癌
