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广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响
目的：观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响，并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。方法分别用natrin 5，25和125 mg·L-1预处理原代SD乳大鼠心肌细胞24 h后，再以H2O20.3 mmol·L-1诱导损伤，以Fluo-3为Ca2+荧光探针，应用激光共聚焦显微镜动态检测细胞内游离钙离子浓度变化；另外用natrin 5，25和125 mg·L-1及维拉帕米（Ver）5 nmol·L-1预处理24 h后，再以H2O20.3 mmol·L-1诱导损伤15 min，FQ-PCR法检测心肌细胞钙离子通道Cav1.2，Calm，RyR2和钾离子通道Kir6.2的mRNA表达情况。结果激光共聚焦显微镜检测结果发现，与正常对照组比较，H2O2作用3~15 min心肌细胞内钙荧光平均峰值增强49.37%（P<0.01）；而给予natrin 5，25，125 mg·L-1预处理24 h组该平均峰值分别增强27.52%，12.71%和5.15%，显著低于H2O2组（P<0.01）。PCR结果表明，H2O2损伤组其心肌细胞Cav1.2，Calm，RyR2及Kir6.2的mRNA表达分别为正常对照组的1.78倍，1.26倍，4.34倍和0.79倍（P<0.01）；而给予natrin及维拉帕米干预组，细胞Cav1.2，Calm和RyR2的mRNA表达较H2O2损伤组均显著降低（P<0.01），而Kir6.2的mRNA表达较H2O2损伤组显著升高（P<0.05）。结论广西中华眼镜蛇natrin可明显减轻H2O2所致的心肌细胞钙超载，对心肌细胞过氧化损伤有良好的保护作用，其作用机制可能与降低H2O2损伤的心肌细胞的Cav1.2， Calm和RyR2的mRNA表达及增加Kir6.2的mRNA表达有关。
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广西眼镜蛇毒 Natrin 对人卵巢癌 SKOV3细胞凋亡的影响
目的：观察广西眼镜蛇毒Natrin对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法将对数生长期的SKOV3细胞分为两组，观察组加入不同终浓度的Natrin，对照组加入等体积培养液。处理24 h后，采用MTT法检测细胞生长抑制率，流式细胞术检测凋亡率，透射电镜下观察细胞凋亡形态。结果1．25、6．25、12．5、62．5、125、200、250 mg/L的Natrin作用SKOV3细胞24 h生长抑制率分别为13．24％±0．01％、22．60％±0．01％、47．94％±0．01％、67．73％±0．01％、80．21％±0．03％、87．88％±0．01％、88．94％±0．01％，不同浓度间比较，P均＜0．01。观察组凋亡率高于对照组，P均＜0．01；观察组随着Natrin浓度增加，早、晚期和总凋亡率逐渐增大，早期凋亡率均高于晚期凋亡率，P均＜0．01。观察组电镜下细胞出现典型的凋亡形态。结论 Natrin能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长并促进其凋亡，且呈剂量依赖性，其诱导SKOV3细胞发生早期凋亡的作用高于晚期。
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广西眼镜蛇毒中Natrin的克隆及在E.coli中的表达
目的 采用基因工程技术,在大肠杆菌中表达广西眼镜蛇毒中Natrin成熟蛋白.方法 将来源于广西眼镜蛇毒的Natrin蛋白的基因克隆至融合表达载体pMAL - c2x中,以N端融合了麦芽糖结合蛋白的形式在大肠杆菌BL21( DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达Natrin蛋白.超声破菌后,将上清液经Amylose树脂柱上纯化后,收集并冻干Natrin融合蛋白,利用蛋白印迹分析其是否有Natrin抗原活性.结果 经蛋白印迹分析可知在50 kD处的条带具有Natrin抗原活性.结论 在大肠杆菌中可以表达出Natrin蛋白.
