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半边旗提取物6F抑制HL-60细胞蛋白激酶C活性
目的探讨半边旗提取物6F的细胞毒作用及诱导DNA片段化与蛋白激酶C(PKC)信号转导途径的关系,检测6F对PKC活性的影响.方法受试对象为HL-60细胞,超速离心法获得的胞液(可溶部分)及颗粒(不可溶部分,包括细胞膜系统及胞核)部分用作PKC活性测定.经0.4 g@L-1磷脂酰丝氨酸,0.04g@L-1甘油二油酸酯激动剂作用酶粗提物后,用液体闪烁计数仪计数[γ-32P]ATP参入外源底物的量以测定PKC活性.MTT法测定HL-60细胞的活力,二苯胺法测定6F诱导DNA片段化程度.结果在所测试的浓度范围内(0.5～312 μmol@L-1),化合物6F显著抑制胞液及颗粒部分PKC活性,大抑制率达88.6%,呈浓度依赖关系(胞液部分r=0.781,P＜0.05,颗粒部分r=0.931,P＜0.01).6F诱导HL-60细胞DNA片段化及对细胞的毒性作用可被具有致癌作用的PKC激活剂肉豆蔻酸酯(PMA,浓度为65 nmol@L-1)拮抗,抑制率分别是30%和44%(P＜0.01).PMA单独用使HL-60细胞线粒体将MTT还原为甲臜的能力增强14%(P＜0.01),即增强细胞活力.结论化合物6F是PKC的抑制剂.6F对HL-60细胞DNA片段化的诱导作用及其细胞毒作用至少可部分归因于其对PKC活性的抑制作用.
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中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的研究概况
中性粒细胞是机体固有免疫应答的主要效应细胞,也是机体内重要的炎症细胞.中性粒细胞除了凋亡和坏死外,还存在一种非凋亡性程序化细胞死亡形式.该形式具有空泡化,线粒体通透性增大等形态学特征,具有 caspase-3、caspase-8非依赖性以及无DNA片段化的生物化学特征.目前尚不知其确切的生物学意义,但它与发育和许多生理/病理现象有关.这些研究成果对于重新认识和定位中性粒细胞程序化细胞死亡的多样性和复杂性提出了新的思路.
关键词： 中性粒细胞 非凋亡程序化细胞死亡 空泡化 DNA片段化 -
ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中未出现DNA小片断化的分子机制初探
细胞经
关键词： ONO-AE-248 中性粒细胞 非凋亡 DNA片段化 DNA断裂因子 -
枫杨叶提取物抑制金黄色葡萄球菌的机制研究
[目的]研究枫杨叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及相关机制.[方法]通过纸片扩散法比较不同溶剂枫杨叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑制效果;以微量稀释法测定枫杨叶醇提取物的小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)与小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);以生长曲线法比较不同浓度枫杨叶醇提取物对细菌生长的影响;以扫描电镜观察该提取物对细菌菌体形态的影响;以碘化丙啶(propidium iodide,PI)和SYTO9荧光染料染色观察确定该提取物对菌体细胞膜的影响;以琼脂糖凝胶电泳检测该提取物对细菌基因组DNA的作用.[结果]纸片抑菌与微量稀释实验证实枫杨叶水提取物无抑菌效果,而醇提取物具有明显的抑菌效果,其MIC和MBC分别为125mg·L-1和1600mg·L-1.枫杨叶醇提取物作用后,细菌进入对数生长期的时间延迟,培养至2h时各组OD60值均低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).培养至4h开始,各时点2×MIC枫杨叶醇提取物处理组OD60值均低于1×MIC处理组,4×MIC处理组均低于2×MIC处理组,差异均有统计学意义(P<0.01).培养12h后,不同浓度枫杨叶醇提取物处理组菌量较空白对照组明显减少(P<0.01),且均进入稳定期,而空白对照组菌量在24h时仍呈增长趋势.说明枫杨叶醇提取物可以明显抑制金黄色葡萄球菌的增殖,而且抑制作用存在量效关系.扫描电镜观察发现,枫杨叶醇提取物作用后,金黄色葡萄球菌出现菌体变形、塌陷甚至表面溶解等现象;荧光探针实验进一步说明枫杨叶醇提取物可破坏金黄色葡萄球菌细胞膜与菌体结构的完整性,且效果具有剂量和时间依赖性.琼脂糖凝胶电泳表明枫杨叶醇提取物可使细菌基因组DNA发生损伤.[结论]枫杨叶醇提取物对金黄色葡萄球菌生长具有显著的抑制作用,其机制可能与破坏细胞膜完整性和菌体结构,损伤基因组DNA有关.
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基因芯片核酸样品制备方法的优化
基因芯片研究中,基于不同的样品来源、基因含量、检测方法和分析目的,采用的核酸分离、扩增和标记方法各异.本文综述了对核酸样品制备条件的优化.主要有核酸的单链化处理,片段化和标记方法.根据具体情况选用合适的处理方法,可显著提高基因芯片检测的特异性和重现性.
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一种快速分离细胞凋亡片段化DNA的简单方法--NP-40法
目的鉴定细胞凋亡的一个重要生化指标是凋亡细胞的核DNA通过琼脂糖凝胶电泳呈现典现的DNA"梯状"图谱.传统分离凋亡细胞片段化DNA的方法多采用酚/氯仿抽提.因此,有必要探寻一种更为灵敏、简单的分离凋亡片段化DNA的新方法.方法通过比较传统分离凋亡片段化DNA的方法,并对HERRMANN等[1]报道的方法加以改进.结果本文介绍一种快速分离凋亡DNA片段化的新方法(NP-40法).结论这种简单、快速的分离方法无需酚/氯仿反复抽提,无需大量的细胞样品,并且凋亡DNA片段化梯状图谱清晰,适用于大多数凋亡细胞片段化DNA的分离.
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液压脑损伤后大鼠脑组织DNA片段化及bax的表达改变
目的探讨液压脑损伤后大鼠脑组织DNA片段化及凋亡相关基因bax的变化规律.方法在液压颅脑损伤模型中,观察伤后神经功能、神经病理学改变、DNA片段化的形态和生化特征以及凋亡促进基因bax的表达;比较液压致伤前5min应用放线菌酮对上述指标的影响.结果伤后不同时间,不同脑区均出现特征性的DNA片段化,具有凋亡细胞的特征.放线菌酮治疗组的颅脑伤大鼠,伤后行走功能、平衡功能障碍程度明显低于未治疗组(P<0.01);神经病理学改变减轻;不同脑区各个时间点凋亡细胞数均显著减少,DNA电泳未见凋亡带谱;不同脑区bax蛋白水平升高受到抑制.结论细胞凋亡参与了创伤性脑损伤后的病理生理改变,抑制脑创伤后神经细胞凋亡,可以减轻神经病理损害,具有神经保护作用.
