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磷酸二酯酶4B在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织中的表达与作用
目的 观察博来霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中磷酸二酯酶4B(PDE4B) mRNA和蛋白表达随时间的变化,初步探究PDE4B在小鼠肺纤维化过程中的作用.方法 采用气道滴入博来霉素2.5 mg·kg-1制备肺纤维化模型,在造模后第3,7,14,21和28天进行支气管肺泡灌洗并留取肺组织.应用细胞形态学方法计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和分类;ELISA法测定BALF中巨噬细胞炎症蛋白2(MIP2)、白细胞介素6(IL-6)、IL-13和转化生长因子β1(TGF-31)含量;胶原试剂盒测定法测定肺组织胶原含量;髓过氧化物酶(MPO)活性测定试剂盒测定组织匀浆液中MPO活性;实时荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织中PDE4B mRNA表达;免疫组织化学法检测PDE4B的分布.结果 博来霉素气道滴入诱导的肺纤维化随时间持续加重,第28天明显,可见肺组织明显实质化.BALF中白细胞总数、IL-1β和IL-6在造模后第3天达峰值,分别为正常对照组的22.0,2.0和2.8倍;MPO和TGF-31在第7天达峰值,分别为正常对照组的1.9和5.5倍;胶原含量、MIP-2和PDE4B mRNA表达从造模后呈持续增长趋势,分别为正常对照组的1.6,2.7和2.6倍.免疫组织化学法检测结果表明,PDE4B分布于炎症细胞和纤维化的肺组织.结论 PDE4B在肺纤维化中发挥重要作用,可能是一个特异性的药物作用靶点.
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阿魏酸对脂多糖损伤的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞的保护作用
目的：探讨阿魏酸（FA）对脂多糖（LPS）诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的保护作用，并探讨其可能的作用机制。方法体外实验：FA 2.5~40μmol·L-1与PC12细胞预处理12 h，加入LPS 0.15 g·L-1继续培养8 h，采用CCK-8法检测细胞活力；ELISA法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的释放；激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F肌动蛋白的表达。体内实验：FA 25，50和100 mg·kg-1 ip给予SD大鼠，每天1次，连续35 d。给药第29天时ip给予LPS 0.2 mg·kg-1，每天1次，连续7 d，运用免疫组织化学法观察大鼠海马神经元磷酸二酯酶4B（PDE4B）蛋白表达的变化；Western蛋白质印迹法检测cAMP反应元件结合蛋白（CREB）和磷酸化CREB（p-CREB）表达。结果体内实验：与LPS组细胞比较，FA 10，20和40μmol·L-1预处理组细胞活力明显升高（P<0.05），炎性因子TNF-α和IL-1β的释放显著减少（P<0.05），细胞骨架蛋白F肌动蛋白的分布和结构明显改善。体内实验：HE染色结果显示，预先给予FA 50和100 mg·kg-1可以减轻LPS诱导的大鼠海马神经元损伤；免疫组织化学实验结果显示，FA 50和100 mg · kg-1能够显著降低LPS诱导的大鼠海马神经元PDE4B蛋白表达水平的升高（P<0.05）；Western蛋白印迹实验结果表明，FA 50和100 mg·kg-1可逆转LPS对CREB和p-CREB蛋白表达的抑制作用（P<0.05）。结论 FA对LPS诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞损伤有保护作用，FA抗神经炎症的作用可能与抑制PDE4表达、激活cAMP/CREB信号通路相关。
关键词： 阿魏酸 磷酸二酯酶4B 脂多糖 cAMP反应元件结合蛋白 -
鞘内注射PDE4B-siRNA对L5脊神经结扎大鼠痛觉高敏的影响
目的 观察鞘内注射针对磷酸二酯酶4B(PDE4B)基因的小于扰RNA(siRNA)对L5脊神经结扎(SNL)大鼠的热痛觉及机械痛觉高敏的影响.方法 雄性SD大鼠70只,随机均分为假手术组(Sham组)、生理盐水组(NS组)、单纯载体组(V组)、错配siRNA组(siRNA-M组)和PDE4B-siRNA组(siRNA-B组),分别于神经结扎术后即刻以及术后1、3、5、7d鞘内注射生理盐水、生理盐水、Lipofectamine(R)RNAiMAX、错配siRNA 2 μg和PDE4B-siRNA 2 μg,容量均为10μl.PDEAB-siRNA、错配siRNA与载体均在注射前30 min混匀.于术前ld及术后2、4、6、8d分别测定五组大鼠的机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)；术后4、8d行为学测试结束后每组各处死6只大鼠,取腰段脊髓,采用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和western bolt分别测定PDE4B的mRNA和蛋白表达.结果 与术前1d比较,术后2、4、6、8 dNS组、V组、siRNA-M组和siRNA-B 组大鼠MWT明显缩短、TWL明显减小(P＜0.05).与NS组比较,术后2、4、6、8 d siRNA-B组大鼠MWT明显延长、TWL明显增加(P＜0.05).与Sham组比较,术后4、8dNS组、V组、siRNA-M 组、siRNA-B组大鼠脊髓组织的PDE4BmRNA、PDE4B蛋白表达升高(P＜0.05).与NS组比较,术后4、8dB组大鼠脊髓PDE4B mRNA、PDE4B蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 鞘内注射PDE4B-siRNA可显著抑制L5 SNL大鼠腰段脊髓PDE4B的mRNA和蛋白表达,有效缓解机械和热痛觉高敏.
