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细胞角蛋白8对丙型肝炎病毒复制的影响
细胞角蛋白8 (KRT-8)水平在丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的肝癌患者体内及在HCV感染细胞培养中均明显上升,与肝病进展密切相关,但KRT-8是否对HCV复制产生影响并不清楚.本文利用KRT-8高表达质粒和特异性shRNA分析其在细胞培养中对HCV复制的影响,并分析低沉默KRT-8后与己知抗HCV药物联合抑制HCV的作用及其对常见HCV耐药突变株的影响.结果显示,胞内KRT-8水平随HCV复制的增加而增加,其高表达能促进HCV的复制,而特异性干扰KRT-8基因表达后,HCV的复制受到抑制.低沉默KRT-8可以增强已知抗HCV药物特拉匹韦抑制HCV复制的作用,且对蛋白酶抑制剂常见耐药突变(A156T和D168V) HCV也具有抑制作用.这提示KRT-8可能是HCV复制的辅助因子,下调KRT-8具有抗HCV的作用及优势.因此,KRT-8有望成为抗HCV药物研发的一个新的宿主靶点.
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四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中CK8表达研究
目的：观察四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏细胞角蛋白8(Cytokerantin-8, CK8)表达的变化。方法雄性SD大鼠20只，随机分为空白对照组和肝纤维化组，肝纤维化组采用10%四氯化碳1m l/k g，2次/每周，共12周诱导大鼠肝纤维化模型，空白对照组给予等量生理盐水。第12周末收集大鼠的外周血和肝脏；外周血离心获得血清后检测肝功能指标ALT、AST；石蜡切片的HE染色观察大鼠肝脏的病理学改变； Real time RT-PCR检测肝纤维化大鼠肝脏组织中CK8的mRNA表达。结果四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的外周血肝功能生化检测ALT和AST较空白对照组显著升高(P <0.05)；肝纤维化组大鼠肝脏HE染色可见明显纤维化改变；四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏组织中CK8 mRNA的表达较空白对照组明显升高(P <0.05)。结论 CK8在四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中的表达升高。
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人乳腺病变组织乳腺癌耐药蛋白及细胞角蛋白8和嗜铬蛋白A的表达:可能与多向分化潜能干细胞相关?
背景:多数学者认为正常乳腺组织中无神经内分泌细胞,乳腺病变后出现神经内分泌细胞是乳腺上皮干细胞分化过程中受局部微环境和激素水平影响所发生的突变、异常分化结果.目的:通过检测人乳腺病变组织中乳腺癌耐药蛋白、细胞角蛋白8及嗜铬蛋白A的表达,从干细胞多向分化的角度探讨人乳腺病变中出现神经内分泌细胞的可能机制.方法:用乳腺癌耐药蛋白作为SP干细胞标记物,用细胞角蛋白8作为腺上皮分化标记物,用嗜铬蛋白A作为神经内分泌分化指标标记物,采用免疫组化方法分别检测这3种蛋白在89例人乳腺组织中的表达情况,并分析3者间的相关性.结果与结论:乳腺癌耐药蛋白与细胞角蛋白8在正常乳腺组织、乳腺增生组织、乳腺病变组织中均有表达,乳腺癌耐药蛋白在病变组织中的表达呈上升趋势,细胞角蛋白8的表达则随乳腺组织异常分化程度的降低呈逐渐减少,嗜铬蛋白A只在乳腺病变组织中有表达.在正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺病变组织中,乳腺癌耐药蛋白与嗜铬蛋白A的阳性表达呈显著相关(P < 0.01),与细胞角蛋白8的阳性表达无明显相关(P=0.069).上述结果表明正常及增生乳腺组织中未发现神经内分泌细胞,乳腺病变组织中发现神经内分泌细胞,其机制可能与多向分化潜能干细胞的分化有关.
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细胞角蛋白7、8和10/13在不同级别宫颈病变中的表达及意义
目的 探讨细胞角蛋白(CK)7、CK8和CK 10/13在宫颈疾病中的表达情况,分析其在宫颈疾病诊断中的价值.方法 子宫颈低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)50例(LSIL组),子宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL) 50例(HSIL组),宫颈鳞癌(SCC)50例(SCC组),采用免疫组化Envision法检测3组宫颈病变组织中CK7、CK8和CK 10/13的表达情况.结果 CK7、CK8及CK10/13在LSIL组、HSIL组及SCC组中的表达率差异均有统计学意义(均P＜0.01).LSIL组CK7、CK8及CK10/13表达率与HSIL组及SCC组差异均有统计学意义(均P＜0.05),HSIL组CK7及CK8表达率与SCC组差异均有统计学意义(均P＜ 0.05),HSIL组与SCC组CK10/13表达率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CK7、CK8的表达和CK10/13的表达缺失是宫颈疾病进展的标志物.
关键词： 宫颈病变 细胞角蛋白7 细胞角蛋白8 细胞角蛋白10/13 表达 -
aFGF、 HGF体外诱导小鼠ESC向肝细胞定向分化及标志物研究
目的 观察酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor,aFGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外定向诱导分化作用及诱导后肝细胞标志物的表达水平.方法 体外培养小鼠ESC使其发育成拟胚体,然后加入aFGF、HGF诱导ESC定向分化成肝细胞.收集培养上清液,RIA法测定甲胎蛋白(alpha fetopro-tein,AFP)、白蛋白(albumin,A LB)浓度.PCR和免疫印迹法检测ALB、细胞角蛋白8(CK8)以及细胞角蛋白18(CK18)在细胞内mRNA和蛋白表达水平.结果 ESC培养5d后发育成为拟胚体,加入不同浓度aFGF继续培养,5d后AFP浓度降低,ALB浓度升高,与对照组相比有显著性差异.细胞内ALB、CK8及CK18表达水平明显升高.一次诱导后加入HGF,继续诱导5d,上清液中AFP浓度降低,ALB浓度升高,具有浓度依赖性.ALB、CK8及CK18在细胞内表达升高.结论 体外培养小鼠ESC,加入aFGF、HGF后可诱导其向肝细胞定向分化.肝细胞标志物AFP水平明显降低,ALB、CK8以及CK18表达水平明显升高.
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类固醇生成因子1及细胞角蛋白8在垂体腺瘤中的表达及意义
目的 探讨类固醇生长因子1(SF1)和细胞角蛋白8(CK8)在垂体腺瘤分类中的指导作用.方法 收集垂体腺瘤49例,检测SF1和CK8在垂体腺瘤中的表达,分析二者在不同类型垂体腺瘤中的表达特点.结果 SF1在促性腺激素细胞腺瘤中的阳性表达率(90％,18/20)明显高于其他类型垂体腺瘤(0);CK8在SF1阳性的垂体腺瘤中的高表达率(21％,5/24)明显低于SF1阴性的垂体腺瘤(92％,23/25).结论 SF1对促性腺激素细胞腺瘤有极高的诊断价值;CK8阴性或低表达是促性激素细胞腺瘤的分子特征之一,可以辅助用于垂体腺瘤的分类.
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细胞角蛋白8 GFP/Puro双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响
目的：构建细胞角蛋白8（CK8）的双标慢病毒干涉载体，获得高滴度慢病毒颗粒，感染HCT116细胞建立稳定株，检测CK8敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248，并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞，36、48 h分两次收集慢病毒上清，应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞，用嘌呤霉素筛选阳性细胞， Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株，在HCT116细胞中干涉CK8使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。
关键词： 细胞角蛋白8 GFP/Puro双标慢病毒 RNAi 凋亡 顺铂
