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内皮抑素基因联合放射治疗对大鼠Walker-256细胞种植性肿瘤的抑制作用
目的探讨鼠源性内皮抑素(endostatin)基因联合放射治疗对大鼠种植性肿瘤的抑制效应.方法制作大鼠乳腺癌Walker-256细胞种植性肿瘤的动物模型,通过检测肿瘤重量和肿瘤生长速率观察内皮抑素基因治疗联合放疗的抑瘤效应.体外采用Western blot检测构建pCMV-endostatin质粒转染的Walker-256细胞endostatin蛋白表达,体内采用RT-PCR观察各组endostatinmRNA表达.结果基因治疗组和基因治疗联合放射治疗组均可见到endostatin mRNA及其蛋白明显表达,但两组间表达无统计学意义;基因与放射联合组肿瘤的生长速率和重量均明显小于单纯基因治疗和放疗组(P＜0.01),后两组其肿瘤的生长速率和重量明显低于对照组(P＜0.01),但二者之间差异无统计学意义.结论pCMV-endostatin在Walker-256细胞内有明显表达endostatin mRNA及其蛋白;endostatin基因治疗有明显的抑瘤作用,但endostatin基因联合放疗的抑瘤效应更明显,促进放疗的抑瘤效果.
关键词： Walker-256肿瘤细胞 基因治疗 放射治疗 -
三种大鼠移植性肝癌原位模型制作的对比研究
目的 常用大鼠移植性肝癌模型制作方法存在诸多不足,通过对直接注射法的改良以解决其缺陷.方法 将90只Wistar大鼠随机分成3组,每组30只,分别以直接注射法、瘤块种植法和改良注射法进行模型制作,观察动物模型的肿瘤生长情况和动物模型的生存情况.结果 术后第8天对3组大鼠进行比较,改良注射法模型组(C组)的肿瘤大直径、体积和质量与直接注射法模型组(A组)、瘤块种植法模型组(B组)间差异并不显著(P＞0.05),具有可行性,在肿瘤移植的成功率方面以改良注射法模型组高；在腹水和腹壁瘤发生率方面C组明显低于A、B两组(P＜0.01)；生存时间长于A、B两组(P＜0.01).结论 基于易行性和重复性考虑而产生的改良注射法,优化了直接注射法的实验操作方法、弥补了直接注射法的缺陷,很好地控制了实验条件,既拥有直接注射法的易行性,又提升了其可重复性,同时保证了动物模型的适用性和可靠性.
关键词： Walker-256肿瘤细胞 Wistar大鼠 移植性肝癌 动物模型 -
不同浓度Walker-256癌性腹水腹腔接种对大鼠免疫功能的影响
目的观察不同浓度肿瘤腹水接种后,Wistar大鼠腹水产生的情况与其本身免疫功能的关系.方法24只大鼠被接种不同浓度的Walker-256肿瘤腹水0.3 ml,另外12只大鼠腹腔注入生理盐水0.3 ml作为对照组,8d后观察各组大鼠产生腹水的数量及细胞免疫及体液免疫功能各指标.结果高浓度腹水接种后产生腹水的大鼠只数少于稀释后接种的大鼠只数,各组免疫指标均具有统计学意义,P＜0.05,其中高浓度腹水接种组免疫功能好,稀释后接种的大鼠免疫功能差.结论不适当地增加含肿瘤腹水的浓度并不能增加产生腹水的可能性,相反确有可能激活大鼠本身的细胞和免疫功能消灭腹水内肿瘤细胞,使得产生腹水的可能性降低.
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两种方式接种肝癌模型的比较
目的 观察直接注入法和瘤块种植法制作Wistar大鼠肝癌模型的差异.方法 采用大鼠含有Walker-256肿瘤细胞的腹水离心洗涤后接种于另一组大鼠的后腿后外侧皮下,待肿瘤长到直径约为1.0 cm,取下肿瘤并切成1.0～2.0 mm3大小.然后将瘤块接种于15只大鼠的肝叶上;另一组 (15只) 按上述方式将癌性腹水接种于正常大鼠的肝叶上;两组均在第7天后采用CT和开腹后游标卡尺分别测量种植性肝癌的直径.结果 腹水直接注射法与瘤块种植法的肿瘤成瘤率分别为:86.7% 和80%,两者并不具有统计学意义 (P ＞0.05).第7天时,直接注射法所形成肿瘤的直径大于瘤块种植法的肿瘤 (P ＜0.05).但瘤块法所引起的腹腔转移的可能性要少于腹水直接种法.结论 直接注射法和瘤块种植法制作大鼠肝癌模型均可以满足临床实验研究的需要,但直接注射法的成瘤时间短,腹腔转移可能性也大;瘤块种植法成瘤时间略长,但腹腔转移可能性少于直接法.
关键词： Walker-256肿瘤细胞 大鼠 Wistar 肝癌模型 腹水 -
大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型
目的 通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型.方法 取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1 × 108个/ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0.04 ml.观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率.结果 肝包膜下接种细胞悬液7d可见较小肿瘤块生长;14 d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21 d肺转移率达100％.肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩.肺组织切面有多个散在的圆形或卵圆形实化灶.HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚.
关键词： 大鼠肝癌模型 Walker-256肿瘤细胞 肝包膜下接种 -
内皮抑素基因对肝癌治疗作用的实验研究
目的探讨鼠源性内皮抑素基因治疗对大鼠肝癌模型的抑制效应.方法制作大鼠肿瘤株Walker-256细胞肝癌的动物模型,通过肝动脉给予内皮抑素基因与脂质体混和物后72 h,采用RT-PCR技术观察各组肝癌中的内皮抑素mRNA表达,并测量不同时间肿瘤生长速率及观察各组大鼠的生存期.结果基因治疗组可见到内皮抑素mRNA表达,而对照组则未见表达;基因治疗组肿瘤的生长速率明显小于对照组(P＜0.001);治疗组大鼠的生存期长于对照组(P＜0.05).结论通过肝动脉介入方法给予内皮抑素基因后,在Walker-256细胞内有明显表达的内皮抑素mRNA;内皮抑素基因治疗有明显的抑制肝癌作用,可延长大鼠的生存时间.
关键词： Walker-256肿瘤细胞 基因治疗 介入治疗 -
树突状细胞-Walker-256融合瘤苗的构建及对肝癌大鼠抗肿瘤作用的研究
目的 研究树突状细胞(DC)、Walker-256肿瘤细胞融合的肿瘤疫苗对大鼠肝癌模型的抗肿瘤免疫作用及其抑制肿瘤新生血管的机理.方法 利用50%聚乙二醇(PEG)法诱导Walker256肿瘤细胞与成熟DC融合,制备DC-Walker-256融合瘤苗.取6～8周龄健康雄性SD大鼠32只,建立种植性肝癌模型,随机分为4组:融合瘤苗组、混合培养组、单纯DC组和空白对照组,每组8只.建模后第7和14天各组大鼠分别皮下注射融合瘤苗、DC-Walker-256和DC混合培养细胞、单纯DC和PBS.第28天处死各组大鼠,观察各组大鼠肝脏肿瘤情况;收集大鼠脾脏制备淋巴细胞,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)法检测大鼠抗原特异性的细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用免疫组织化学检测肿瘤微血管密度(MVD)计数以及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管生成素(ANG)-1和ANG-2的蛋白表达.结果 融合瘤苗组、混合培养组、单纯DC组和空白对照组大鼠术后28 d分别存活8、5、6和3只;除融合瘤苗组外,其他3组大鼠均不同程度存在活动少、食纳差、皮毛光泽差及腹水形成.除融合瘤苗组2只大鼠无明显肉眼肿瘤形成外,其余存活大鼠均可见肿瘤形成.①大鼠肝脏肿瘤重量:融合瘤苗组[(32.4±9.2)g]明显轻于混合培养组[(67.3±5.1)g,P=0.031]、单纯DC组[(75.0±8.3)g,P=0.019]和空白对照组[(86.6±10.5)g,P=0.0083.②CTL每孔斑点数:融合瘤苗组[(404.51±25.34)个]明显多于其他3组[混合培养组:(214.54±21.45)个,P=0.019;单纯DC组:(226.52±32.55)个,P=0.025;空白对照组:(56.54±16.21)个,P=0.001].③MVD计数:融合瘤苗组为(24.12±2.32)个/HP,明显低于混合培养组[(40.34±1.29)个/HP,P=0.025]、单纯DC组[(42.36±3.16)个/HP,P=0.035]和空白对照组[(56.48±5.16)个/HP,P=0.006];混合培养组和单纯DC组大鼠MVD计数均少于空白对照组(P=0.040和P=0.043),而混合培养组与单纯DC组之间差异无统计学意义(P=0.165).④VEGF-A蛋白表达阳性率:融合瘤苗组为23.2%,明显低于混合培养组(42.5%,P=0.031)、单纯DC组(61.3%,P=0.019)和空白对照组(89.6%,P=0.003);混合培养组和单纯DC组均低于空白对照组(P=0.027和P=0.038),而混合培养组与单纯DC组之间差异则无统计学意义(P=0.089).⑤ANG-1蛋白表达阳性率:融合瘤苗组大鼠为43.2%,与混合培养组(46.3%,P=0.292)、单纯DC组(51.3%,P=0.183)和空白对照组(49.6%,P=0.179)比较差异无统计学意义;混合培养组与单纯DC组(P=0.242)、混合培养组与空白对照组(P=0.347)、单纯DC组和空白对照组(P=0.182)之间也无统计学意义.⑥ANG-2蛋白表达阳性率在融合瘤苗组为19.2%,明显低于混合培养组(62.3%,P=0.007)、单纯DC组(67.3%,P=0.005)和空白对照组(71.6%,P=0.004);混合培养组与单纯DC组(P=0.634)、混合培养组与空白对照组(P=0.483)、单纯DC组和空白对照组(P=0.379)之间差异则无统计学意义.结论 融合瘤苗能够诱导CD8+ CTL建立有效的抗肿瘤免疫,同时下调VEGF和ANG-2的水平,抑制肿瘤新生血管,从而达到治疗肿瘤的目的.
