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三报告基因标记骨肉瘤细胞及原位移植模型的建立
目的：建立一种共表达绿色荧光蛋白（ GFP）、红色荧光蛋白（ RFP）和荧光素酶三报告基因稳定标记的骨肉瘤细胞株，并利用该细胞株建立骨肉瘤原位移植裸鼠模型，用于监测体内肿瘤的生长以及药物的评价。方法用慢病毒作为载体，将同时携带荧光蛋白和荧光素酶的基因转到U2-OS骨肉瘤细胞中，筛选稳定细胞株，将细胞原位移植到裸鼠的胫骨，通过活体成像观察骨肉瘤在裸鼠体内的生长转移。结果荧光标签能稳定地在细胞中表达，通过活体成像可观察到骨肉瘤在裸鼠体内的生长转移。结论成功建立了一种实时监测骨肉瘤在小鼠体内生长转移的模型，为骨肉瘤的机制研究和体内药物评价提供了一种理想的平台。
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下调HER2磷酸化水平对骨肉瘤细胞U2-OS体外增殖转移的抑制作用研究
目的：探讨下调人类表皮生长因子受体2（HER2）磷酸化水平对骨肉瘤细胞U2-OS体外增殖、侵袭转移能力的影响。方法采用不同浓度（5、10、20、30、40μmol/L）的HER2磷酸化抑制剂二甲苯磺酸拉帕替尼作用骨肉瘤细胞U2-OS。四甲基偶氮唑盐（MTT）检测作用不同时间（24、48、72 h）细胞的增殖能力，并计算出24 h药物的半数抑制浓度（IC50）。10μmol/L二甲苯磺酸拉帕替尼作用U2-OS细胞，Western blot检测磷酸化HER2（p-HER2）蛋白表达水平；Wound healing和Transwell invasion实验检测细胞迁徙、侵袭能力。结果二甲苯磺酸拉帕替尼显著抑制U2-OS细胞的增殖，并且呈时间、剂量依赖性；二甲苯磺酸拉帕替尼作用24 h后，细胞中p-HER2蛋白表达水平显著低于阴性对照组（0.093±0.033 vs 0.306±0.033）；细胞迁徙率低于阴性对照组（%：32.70±3.00 vs 94.52±4.76），穿膜细胞数低于阴性对照组（个/视野：37±5 vs 85±10）。结论体外下调U2-OS细胞中HER2磷酸化水平能显著抑制U2-OS细胞的增殖、迁徙和侵袭，HER2有望成为抗骨肉瘤侵袭转移的分子靶点。
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浅蓝菌素对人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内生长抑制的作用
目的 研究浅蓝菌素(cerulenin)对人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内生长抑制作用.方法 建立人成骨肉瘤细胞U2-OS BALB/C裸鼠瘤模型.18只成瘤裸鼠按随机数字表分成3组,每组6只;对照组(DMSO溶剂)、低剂量cerulenin组(0.2 mL cerulenin配制液40 mg·kg-1·次-1)、高剂量cerulenin组(0.2 mL cerulenin配制液80 mg·kg-1·次-1)于腹腔隔日注射连续6次.动态观察3组肿瘤体积及裸鼠质量变化,用药结束后18 d处死裸鼠,测量瘤重、计算瘤重抑制率,测量肿瘤体积、计算肿瘤体积抑制率.肿瘤组织行形态学观察.TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果 高、低剂量cerulenin组肿瘤体积抑制率分别为51.2%和24.2%,瘤重抑制率分别为49.1%和25.5%.各组间瘤体体积与瘤重比较,差异均有统计学意义(P<0.05).瘤体组织学显示cerulenin组较对照组出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,瘤细胞体积较小,多数细胞微绒毛消失,胞质密度增高.TUNEL法显示高、低剂量cerulenin组,对照组癌细胞凋亡率为(17.1±1.2)%、(10.3±0.8)%、(3.5±0.5)%,3组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 cerulenin能够有效诱导人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内凋亡,抑制肿瘤的生长.
