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多聚胺胆固醇阳离子脂质体介导CpGODN雾化吸入对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞的影响
目的 探讨雾化吸入多聚胺胆固醇阳离子脂质体(PCL)与CpGODN复合物(CpGODN/PCL复合物)对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)的影响.方法 采用卵蛋白激发法建立哮喘小鼠模型,并设置正常对照组、哮喘对照组、CpGODN/PCL干预组、CpGODN干预组,每组6只.在雾化PCL介导转染CpGODN 48h后,分离小鼠左肺组织,切片HE染色,显微镜下检测EOS浸润情况,同时检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞浸润情况.结果 用卵蛋白激发法成功地制备了哮喘小鼠模型.哮喘对照组肺组织肺泡腔黏液分泌增加,支气管及血管周围大量炎性细胞浸润,以EOS,淋巴细胞为主,与正常对照组比较,BALF中细胞总数、EOS数目和百分率均明显增加(P<0.01).而与哮喘对照组比较,CpGODN干预组细胞总数,ECB数目和百分率显著下降(P<0.01).CpGODN/PCL干预组与CpGODN干预组比较,细胞总数无统计学差异,EOS数目、百分率的差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 哮喘小鼠肺组织EOS浸润和气道黏液分泌,雾化介导CpGODN干预哮喘小鼠模型可减轻以EOS为特征的炎症反应,利用PCL为转染载体包裹CpGODN,可提高转染效率.
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CpGODN对哮喘小鼠肺组织GITR/GITRL表达的影响
目的 观察CpGODN干预对哮喘小鼠肺组织GITR及GITRL表达的影响.方法 48只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(简称对照组),哮喘模型组(简称模型组),地塞米松治疗组,CpGODN治疗组.以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型.观察肺组织病理；对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类及计数；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化检测肺组织中GITR、GITRL的表达.结果 BALF中嗜酸性粒细胞平均((x)±s,下同)计数:CpGODN组为(2.76±0.25)×107/L,地塞米松组为(1.05±1.72)×107/L,均低于模型组的(12.09±2.62)×107/L,差异有统计学意义(P＜0.01),CpGODN组与地塞米松组比较差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR、免疫组化结果:CpGODN组与地塞米松组GITR、GITRL表达高于模型组,差异有统计学意义(P均＜0.05),CpGODN组GITRL mRNA、GITR蛋白表达高于地塞米松组,差异有统计学意义(P＜0.05).相关分析:肺组织GITR与GITRL表达呈正相关(P＜0.01,n=40).结论 CpGODN能改善哮喘小鼠气道炎症,显著增强哮喘小鼠模型中GITR及GITRL在肺组织中的表达.
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CpGODN对尘螨哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达的影响
目的 探讨CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)对尘螨哮喘小鼠Thl/Th2型细胞因子的影响及其机制.方法 用雌性C57BL/6J小鼠建立尘螨哮喘小鼠模型,在抗原致敏阶段加入CpGODN进行干预,并设立GpCODN治疗对照组及布地奈德治疗对照组,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)数量的变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ的含量变化;用免疫印迹(Western blotting)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平.结果 与哮喘模型组及GpCODN治疗对照组比较,CpGODN治疗组的BALF中炎症细胞明显减少,IL-4、IL-5的浓度降低,IFN-γ浓度升高,肺组织中GATA-3蛋白表达降低,T-bet表达增高;与布地奈德治疗组比较,CpGODN治疗组的BALF中IFN-γ浓度升高.相关分析显示肺组织中T-bet/GATA-3比值与BALF中IFN-γ/IL-4比值呈正相关.结论 CpGODN可通过诱导T-bet表达、抑制GATA-3表达以恢复Thl/Th2平衡,从而减轻尘螨过敏性哮喘小鼠的气道炎症.
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CpGODN结合CD28/CD80单抗活化T细胞对结肠癌细胞的杀伤作用
目的 研究联合应用CpGODN和CD28/CD80单抗共刺激健康人外周血T淋巴细胞(PBLs)在体外对结肠癌细胞株HT-29的杀伤作用,为结直肠癌的过继免疫治疗可能性提供参考.方法 PBLs的分离与体外培养;CD28/CD80共刺激活化PBLs:用含共刺激活化PBMC或/和CpGODN的100ml/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养细胞,测生长曲线.MTT法检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用,并用电镜观察效应细胞杀伤的结肠癌细胞超微结构及用流式细胞仪检测结肠癌细胞的相关凋亡情况.结果CpGODN本身对HT-29细胞有一定的杀伤作用(P<0.05),CD28/CD80共刺激活化PBLs在体外对结肠癌细胞株HT-29杀伤作用明显(P<0.01),CpGODN与CD28/CDSO共刺激活化PBLs合用,对HT-29的杀伤作用显著大于CpGODN单独对HT-29细胞杀伤作用(抑制率92.31% vs 68.00%,P<0.01),亦大于单独应用CD28/CD80共刺激活化PBMC对HT-29细胞的杀伤作用(P<0.05),CpGODN增加了HT-29细胞对共刺激活化PBMC的敏感性.电镜结果显示,效应细胞作用24h肿瘤细胞就部分发生坏死,部分肿瘤细胞可见凋亡.流式细胞仪检测效应细胞HT-29细胞72h明显凋亡.结论 联合应用CpGODN可以提高单抗协同诱导的效应细胞对结肠癌细胞株HT-29杀伤作用,而坏死细胞进一步增多说明效应细胞是通过诱导肿瘤细胞坏死及细胞凋亡两条途径来实现抑制杀伤作用从而说明活化的淋巴细胞杀伤结肠癌细胞是通过坏死及凋亡实现的.
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CpG ODN1826增强树突状细胞抗胃癌效应研究
近年研究结果 显示,含有非甲基化的CpG基序具有强大的免疫激活作用[1].前期研究表明,CpG ODN可增强树突状细胞(DC)对胃癌细胞株MKN45的杀伤作用[2].本研究旨在观察CpGODN诱导DC的抗胃癌效应.
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CD3单抗、CD28/CpGODN共刺激活化的PBMC对膀胱癌细胞杀伤作用的研究
目的探讨CD3单克隆抗体与CD28/CpGODN共刺激活化PBMC在体外对膀胱癌细胞株T24及Scarber杀伤强度及杀伤作用机理.为膀胱癌的过继免疫治疗提供新的效应细胞.方法 MTT法检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用,并用电镜观察效应细胞杀伤膀胱癌细胞的超微结构.结果 CD28共刺激细胞对T24杀伤作用较强,达到69.35%±1.17%,而CpGODN诱导的活化细胞对Scarber杀伤较强,达到63.11%±2.03%.且效应细胞:靶细胞均需达到20:1才达到半数杀伤作用.电镜结果显示,效应细胞作用6小时肿瘤细胞就大部分发生坏死,部分肿瘤细胞可见凋亡,说明效应细胞是通过诱导肿瘤细胞坏死及凋亡实现杀伤作用的.结论 CD28单抗协同诱导的效应细胞对T24杀伤效果较好,而CpGODN刺激细胞对 Scarber杀伤较强,活化的淋巴细胞杀伤膀胱癌细胞是通过坏死及凋亡两条途径来实现的.
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CpG ODN增强乙肝疫苗免疫反应的研究
目的 研究人工合成的CpG ODN对乙肝表面抗原的免疫增强效应,评价CpG ODN的佐剂效应.方法 将不同剂量特定的CpG ODN与乙肝表面抗原联合免疫小鼠,用ELISA检测小鼠乙肝表面抗体的滴度.结果 CpG ODN联合乙肝表面抗原免疫小鼠,在短期检测中,高剂量组能较快的达到检测阈,各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性(P<0.05),在长期检测中,各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性(P<0.05),检测值随CpG剂量的增高而增大.结论 CpG ODN增强乙肝表面抗原的免疫反应短期和长期都具有剂量效应.
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CpG ODN促进树突状细胞成熟的实验研究
目的:研究CpG ODN对小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendriticells,BMDC)分化成熟的影响.方法:以含非甲基化CpG基序的寡核苷酸(unmethylated CpG motif oontaining oligonu-cleotides,CpG ODN)刺激BMDC.流式细胞术检测DC膜表面CD80表达,ELISA检测DC分泌IL-12水平,MTT法测定CpG ODN活化的DC刺激T细胞增殖能力.结果:CpG ODN可显著刺激DC表达CD80,分泌IL-12,增强DC刺激T细胞增殖的能力.结论:CpGODN可以有效促进DC的功能成熟.
