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干扰八聚体转录结合因子4A对人牙髓细胞增殖与多向分化能力的影响
目的 研究八聚体转录结合因子4A(octamer-binding transcription factor 4A,Oct4A)在人牙髓细胞(human dental pulp cells,DPC)的表达及对细胞增殖、成牙本质向和成脂向分化能力的影响.方法 实时荧光定量PCR(reahi mequantitative PCR,RT-qPCR)技术检测健康人DPC中Oct4A的表达；合成特异性针对Oct4A的siRNA(Oct4A干扰组),50 nmol/L siRNA经脂质体LipofectamineTM RNAiMAX转染DPC 24、48、72、96和120 h,以无义序列-siRNA转染的DPC作为阴性对照,细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况、RT-qPCR检测Oct4A的mRNA水平以选取佳转染时间；茜素红染色检测成牙本质诱导DPC 14 d后矿化结节形成情况,油红O染色检测成脂诱导DPC 14 d后脂滴形成情况,RT-qPCR技术检测成牙本质向分化标志物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和成脂向分化标志物脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)的mRNA表达变化；蛋白质印迹法检测DSPP和LPL的表达.结果 Oct4A在第3代DPC中表达高(2.10±0.10),为第1代DPC的2.10倍(与第1、7代相比P =0.000),之后随细胞传代表达下降；Oct4A-siRNA转染DPC 72 h,干扰效率达峰值(69.7％)；与正常细胞组及阴性对照组相比Oct4A干扰组细胞增殖能力显著下降,矿化结节和脂滴形成显著减少(P =0.000),分化标志物DSPP和LPL表达量显著下降(P =0.000).结论 瞬时干扰牙髓细胞中Oct4A的表达可以降低细胞增殖和成牙本质向、成脂向分化能力.
关键词： 细胞增殖 细胞分化 牙髓细胞 八聚体转录结合因子4A
