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自身分泌性细胞间通讯文献资料
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变形链球菌AI-2活性测定及luxS基因同源重组质粒的构建
目的 构建用于转化变形链球菌的luxS基因缺失的同源重组克隆载体.方法 利用哈氏弧菌(Vibrio harveyi)BB170作为报告菌株,对变形链球菌在不同生长时期诱导生物发光的能力进行测定,然后分别PCR扩增变链菌luxS基因上下游片段及质粒PJT10的红霉素抗性基因片段,采用分子克隆技术将基因片段依次双酶切后连接入载体pUC19,构建luxS基因缺失的重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞经筛选后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定.结果 变链菌国际标准株可诱导哈氏弧菌BB170的生物发光现象,提示变链菌中存在AI-2数量感应通路.构建的重组质粒pUCluxKO经PstⅠ-BamHI双酶切,产物电泳在大约1000 bp和5000 bp处各见一条特异条带;经BamHI-KpnI双酶切,产物电泳在大约1500 bp和4500 bp处各见一条特异条带;经KpnI-EcoRI双酶切后,产物电泳在大约1000 bp和5000 bp处各见一条特异条带.结论 变链菌luxS基因同源重组质粒构建成功,为进一步通过同源重组法构建变链菌luxS基因缺陷株奠定基础.
关键词： 链球菌 变异 自身分泌性细胞间通讯 基因 重组质粒
