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雷公藤甲素对γ-干扰素刺激后人眼球后成纤维细胞粘附分子-1和白细胞抗原-DR表达的影响
目的观察雷公藤甲素对γ-干扰素(IFN-γ)刺激后人眼球后成纤维细胞(RFs)增殖和对细胞粘附分子-1(ICAM-1)、白细胞抗原(HLA)-DR表达的影响.方法体外培养的RFs分别与IFN-γ、雷公藤甲素孵育后,MTT比色法检测雷公藤甲素对RFs增殖的影响;流式细胞仪检测ICAM-1、HLA-DR的表达状况.结果雷公藤甲素能以剂量依赖方式抑制RFs的增殖,当剂量达100μg/L时,RFs的增殖完全被抑制.正常人自发表达少量的ICAM-1,不表达HLA-DR;IFN-γ(100U/L)能强烈刺激ICAM-1、HLA-DR的表达(P＜0.01);雷公藤甲素能明显抑制IFN-γ对ICAM-1、HLA-DR的刺激作用.结论雷公藤甲素能够抑制细胞因子介导的RFs的生物活性,从而减少Graves'眼病的免疫损伤.
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羟基喜树碱对甲状腺相关眼病球后成纤维细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察羟基喜树碱对体外培养的球后成纤维细胞增殖和凋亡的影响.方法 甲状腺相关眼病患者球后成纤维细胞体外培养.免疫组织化学染色检测波形蛋白在球后成纤维细胞中的表达.将不同浓度的HCPT(1、5、10、50、100mg/L组)作用于球后成纤维细胞48h,用MTT法检测各组药物对细胞增生的抑制率.流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率.提取细胞内总蛋白、采用Western blotting法检测活化型caspase-3和caspase-3、bax和bcl-2、p-JNK和JNK、p-AKT和Akt在HCPT中的表达.结果 MTT法显示不同浓度的HCPT(1、5、10、50、100mg/L组)能降低成纤维细胞细胞的A值(P＜0.05),细胞生长抑制率随药物浓度的增加而增加.流式细胞仪检测凋亡率随着浓度的增加而增高;Western blotting法检测结果证明,活化型caspase-3、bax、p-JNK表达的灰度值明显增加,差异均有统计学意义.结论 羟基喜树碱能诱导体外培养球后成纤维细胞,其作用呈剂量依赖性.
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雷公藤甲素对球后成纤维细胞的影响
目的研究雷公藤甲素(TL)对γ-干扰素(IFN-γ)刺激后人眼球后成纤维细胞(RFs)透明质酸(HA)、I型胶原蛋白合成的影响.方法体外培养的RFs分别与IFN-γ,TL孵育后,放免法检测TL对RFs分泌HA和I型胶原蛋白的影响.结果 INF-γ(100 U/L)能强烈刺激RFs分泌HA和I型胶原蛋白(P均＜0.05),分别是对照组的1.64倍(P＜0.05)和1.72倍(P＜0.01);而TL能明显抑制IFN-γ的这种刺激作用,且随着剂量的增加,抑制作用更加明显.结论 TL能通过抑制HA、I型胶原蛋白的合成来减少Graves'眼病的免疫损伤.
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甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞形态学和超微结构的比较
目的 研究体外培养人球后成纤维细胞,比较甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞形态学和超微结构的差异.方法 用组织块法体外培养甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞并采用透视电镜技术进行观察比较及鉴定.结果 用组织块法成功培养出甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞,电镜显示甲状腺相关眼病和正常患者球后成纤维细胞超微结构无明显差异.结论 经倒置相差显微镜和电镜证实为成纤维细胞,甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞形态学和超微结构无明显差异.
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99Tc-亚甲基二磷酸盐对细胞因子刺激后人球后成纤维细胞增生的影响
背景 Graves眼病是一种器官特异性自身免疫性疾病.研究表明,99Tc-亚甲基二磷酸盐(99Tc-MDP)在治疗Graves眼病方面有一定的疗效,但其机制尚不明了. 目的 观察99Tc-MDP对细胞因子刺激后Graves 眼病患者球后成纤维细胞(RFs)增生、合成透明质酸和表达人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的影响. 方法 球后结缔组织取白严重Graves眼病行球后减压术的女性患者2例,用组织块培养法在含质量分数20％胎牛血清(FBS)的DMEM培养液中培养RFs并进行传代,取2～7代细胞用于实验.分别将干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及不同质量浓度的99Tc-MDP加入不同组的细胞培养液中孵育后,利用3H-TdR掺人法检测99Tc-MDP对RFs增生的影响,采用放射免疫法检测培养细胞合成透明质酸的情况,用流式细胞仪检测HLA-DR、ICAM-1的表达.结果 培养的细胞呈成纤维原细胞型,波形蛋白染色阳性,细胞角蛋白染色呈阴性.TNF-α、IFN-γ和IL-1作用后,培养的RFs增生值、透明质酸值、RFs中HLA-DR表达率及ICAM-1表达率分别为(4918.33±297.91) cpm、(505.83±41.29) mg/L、(56.88± 14.67)％和(63.57±14.11)％,均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01),培养基中分别加入＞100 mg/L 99Tc-MDP后,RFs增生值、透明质酸值、RFs 中HLA-DR表达率及ICMA-1表达率均明显低于TNF-α、IFN-γ、IL-1单独作用组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 99Tc-MDP能够以剂量依赖的方式抑制体外培养的人RFs的增生.
关键词： Graves眼病 球后成纤维细胞 99Tc-亚甲基二磷酸盐 细胞因子 -
依那普利对球后成纤维细胞体外增殖的影响
目的 研究依那普利对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响.方法 MTT法测定依那普利对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响.结果 经10-8 mmol/L、10-7 mmol/L、10-6 mmol/L和10-5 mmol/L依那普利作用48h后,正常人和TAO患者球后成纤维细胞的A值与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);在一定范围内有浓度依赖性,且以10-5 mmol/L的浓度抑制球后成纤维细胞的作用强.结论 依那普利有抑制正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用,以10-5mmol/L抑制作用强,在一定范围内有浓度依赖性.
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环孢霉素A对球后成纤维细胞体外增殖的影响
目的:研究环孢霉素A(CsA)对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响.方法:用MTT法测定CsA对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响.结果:经1,10,100,500,1 000μg/L CsA作用48h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.253±0.018,0.210±0.016,0.173±0.032,0.134±0.013,0.119±0.022与对照组0.278±0.019相比,差异有统计学意义(P＜0.05);经1,10,100,500,1 000μg/L CsA作用48h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.221±0.025,0.191±0.036,0.150±0.017,0.118±0.039,0.110±0.011与对照组0.249±0.028相比,差异有统计学意义(P＜0.05);随着浓度的增加,抑制作用增强.结论:CsA呈浓度依赖性抑制正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖.
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CD40在人球后成纤维细胞的表达
目的:探讨rhIFN-γ作用下,正常人和TAO患者球后成纤维细胞(RF)CD40 mRNA的表达情况.方法:用RT-PCR法,对rhIFN-γ诱导正常人和TAO患者RF CD40的mRNA进行半定量分析.结果:经100,200,400,1 000kU/L rhIFN-γ作用48h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.483±0.095和0.476±0.051,0.647±0.034和0.659±0.083,0.849±0.017和0.852±0.024,0.891±0.082和0.894±0.041与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P≤0.01);两者同一浓度相比差异无统计学意义(P＞0.05).经400kU/L rhIFN-γ作用12,24,48,72h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.331±0.047和0.329±0.025,0.668±0.067和0.683±0.104,0.849±0.017和0.852±0.024,0.865±0.021和0.876±0.014与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P＜0.05),两者同一时间相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:rhIFN-γ可上调正常人和TAO患者RF CD40mRNA的水平,呈浓度和时间依赖.
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IFN-γ对球后成纤维细胞增殖的影响
目的:研究IFN-γ对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响.方法:用MTT法测定rhIFN-γ对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响.结果:经0.05,0.1,0.2,0.4,1.0MU/L的rhIFN-γ作用48h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.221±0.013,0.260±0.016,0.274±0.022,0.299±0.016,0.288±0.012与对照组0.181±0.010相比,差异有统计学意义(P＜0.05);经0.05,0.1,0.2,0.4,1.0MU/L的rhIFN-γ作用48h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.231±0.017,0.269±0.010,0.291±0.020,0.318±0.019,0.303±0.016与对照组0.189±0.012相比,差异有统计学意义(P＜0.05);在一定范围内有浓度依赖性,并且以0.4MU/L的浓度刺激球后成纤维细胞的作用强.结论:rhIFN-γ有促进正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用.
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吲哚美辛体外对球后成纤维细胞增殖的影响
目的:研究吲哚美辛对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响.方法:用MTT法测定吲哚美辛对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响.结果:经100,200,400,800μmol/L吲哚美辛作用24h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.219±0.015,0.201±0.026,0.129±0.013,0.112±0.012与对照组0.252±0.017相比,差异有统计学意义(P＜0.01);经100,200,400,800μmol/L吲哚美辛作用24h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.225±0.022,0.197±0.011,0.138±0.019,0.121±0.023与对照组0.267±0.031相比,差异有统计学意义(P＜0.01);在一定范围内有浓度依赖性,并且以800μmol/L的浓度抑制球后成纤维细胞的作用强.结论:吲哚美辛有抑制正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用,以800μmol/L抑制作用强,在一定范围内有浓度依赖性.
