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结膜松弛症手术切除组织中肿瘤坏死因子α刺激基因6和穿透素3表达和细胞凋亡的研究
目的 研究结膜松弛症松弛结膜组织中肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)和穿透素3(PTX3)的表达及细胞凋亡情况.方法 松弛结膜切除手术30例(32只眼)和单纯白内障超声乳化手术20例(20只眼),术中的结膜组织,制备冰冻切片;采用免疫荧光法检测结膜组织TSG-6和PTX3的表达;采用Tunel法检测结膜组织细胞凋亡情况.结果 结膜松弛症结膜上皮层TSG-6呈强阳性表达(平均荧光强度76.67±26.87),较正常对照组(22.53±7.21)明显增高,差异有统计学意义(t=8.460,P＜0.001);结膜松弛症结膜基质层及眼球筋膜囊TSG-6呈阳性表达(平均荧光强度39.25±13.24),较正常对照组(13.81 ±9.60)明显增高,差异有统计学意义(=7.440,P＜0.001);PTX3在结膜松弛症上皮层(平均荧光强度52.41±11.61)、基质层及眼球筋膜囊(平均荧光强度35.96±10.91)均呈阳性表达,较正常对照组上皮层(13.88 ±5.42)、基质层和眼球筋膜囊PTX3(4.47±2.49)明显增高,差异均有统计学意义(t=13.887,P＜0.001;t=12.658,P＜0.001).结膜松弛症结膜上皮细胞凋亡率(8.64±0.13％)与正常对照组(8.33±0.11％)比较,差异无统计学意义(t=1.810,P=0.072),结膜松弛症结膜基质层及Tenon囊细胞凋亡率(40.42±0.24％)明显高于正常对照组(10.87±0.25％),差异有统计学意义(=90.171,P＜0.001).结论 结膜松弛症松弛结膜组织中TSG-6和PTX3两种炎症相关蛋白表达明显增加,且松弛结膜组织中细胞凋亡增多,提示炎症反应及细胞凋亡参与了结膜松弛症的发病过程.
关键词： 结膜松弛症 手术切除的结膜组织 肿瘤坏死因子α刺激基因6 穿透素3 细胞凋亡 -
杞精明目汤药物血浆对结膜松弛症成纤维细胞TSG-6和PTX3表达的影响
目的 研究杞精明目汤药物血浆对结膜松弛症成纤维细胞肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)和穿透素3(PTX3)表达的影响,探讨结膜松弛症的发病机制及杞精明目汤对其影响作用.方法 制备杞精明目汤药物血浆和无药血浆,分别用含20％、10％、5％药物血浆或无药血浆的细胞全培养基培养结膜松弛症成纤维细胞,4h、24 h后分别提取mRNA和蛋白质,采用实时荧光定量PCR (real time PCR)技术和Western blot法检测细胞TSG-6、PTX3以及基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3的表达.结果 20％和10％的含药血浆均可有效上调结膜松弛症成纤维细胞TSG-6 mRNA和蛋白的表达,且作用接近(P＞0.05),而5％浓度的含药血浆对TSG-6 mRNA和蛋白的表达无明显上调作用.三种浓度的含药血浆对结膜松弛症成纤维细胞PTX3mRNA和蛋白的表达无明显作用.三种浓度的含药血浆均可明显抑制结膜松弛症成纤维细胞MMP-1 mRNA和蛋白的表达,其中20％和10％浓度对MMP-1mRNA抑制作用较强,效果接近(P＞0.05),其次为5％;20％浓度含药血浆对MMP-1蛋白表达的抑制作用明显,10％和5％浓度对MMP-1蛋白表达的抑制作用无明显差异(P＞0.05).三种浓度的含药血浆均可有效抑制MMP-3 mRNA和蛋白的表达,其中对MMP-3 mRNA及蛋白的抑制作用显著的均为20％浓度的含药血浆,其次为10％.结论 20％和10％浓度的杞精明目汤药物血浆能有效上调TSG-6的表达;20％、10％、5％三种浓度的含药血浆对PTX3的表达均无明显作用;三种浓度的杞精明目汤药物血浆均能有效抑制MMP-1、MMP-3的表达.
关键词： 结膜松弛症 杞精明目汤 肿瘤坏死因子α刺激基因6 穿透素3 -
TSG-6对兔耳瘢痕形成过程中MMP-2、TIMP-2表达及瘢痕修复的影响
目的 建立兔耳创面修复瘢痕模型,探讨在瘢痕形成过程中肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达和瘢痕修复的影响.方法 参照Morris方法,建立兔耳创面模型,设计实验组,注射TSG-6;对照组注射等量的无菌生理盐水.检测各组瘢痕指数及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达情况来评价瘢痕增生情况.同时检测MMP-2及TIMP-2基因的表达情况.结果 实验组的瘢痕指数及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量低于对照组,MMP-2的表达较多,对应的TIMP-2表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TSG-6可以抑制瘢痕增生,可能是增多瘢痕组织中MMP-2表达来实现的.
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TSG-6对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖与凋亡的影响. 方法 取人病理性瘢痕组织共6例,用组织块培养法培养人病理性瘢痕成纤维细胞,体外培养的第3、4代细胞,用浓度为2 μg/ml的重组人TSG-6蛋白处理,在作用48 h后,用免疫组化法检测TSG-6作用前后人病理性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原( PCNA)的变化,并计算 PCNA阳性细胞率;流式细胞术计算、分析人重组TSG-6蛋白作用前后,人病理性瘢痕成纤维细胞的凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白p53、半胱天冬酶3(caspase-3)表达的变化. 结果 2 μg/ml TSG-6体外干预人病理性瘢痕成纤维细胞48 h情况下,人病理性瘢痕成纤维细胞PCNA的阳性细胞率显著降低,差异有统计学意义(P<0. 05);细胞凋亡率增高,差异有统计学意义(P<0. 05);Western blot法检测显示细胞凋亡相关蛋白 p53、caspase-3表达明显增多. 结论 TSG-6 在体外能够抑制人病理性瘢痕成纤维细胞的增殖并促进其凋亡,TSG-6对细胞的抑制作用可能与TSG-6抑制PCNA基因表达有关, TSG-6诱导人病理性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用可能与TSG-6促进细胞凋亡相关蛋白p53、caspase-3表达有关.
关键词： 肿瘤坏死因子α刺激基因6 病理性瘢痕 成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡
