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表没食子儿茶素没食子酸酯对阿米卡星诱导大鼠螺旋神经元Bcl-2和Bax表达的影响
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3gallate,EGCG]对阿米卡星(amikacin,Amk)诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)Bcl-2和Bax表达的影响.方法 设生理盐水对照组、Amk[450 mg/(kg·d)×14 d]损伤组和Amk加EGCG[50 mg/(kg·d)×14 d]保护组.各组动物均深度麻醉后半身灌注固定处死,取右侧耳蜗标本固定、脱钙、石蜡轴住包埋、轴位切片,近中轴位切片行Bcl-2和Bax免疫组化染色,光学显微镜下检测耳蜗SGN表达情况、并通过切片图像分析进行半定量处理比较.结果 对照组SGN Bcl-2染色胞浆有棕黄色或黄色颗粒或斑片呈中度着色、Bax染色胞浆有棕黄色或黄色颗粒或斑片呈轻度着色[SGN Bcl-2和Bax染色平均灰度值分别为(81.24±3.10)和(90.92±3.62)1,损伤组SGN Bcl-2染色胞浆着色减轻、Bax染色胞浆着色加深fSGN Bcl一2和Bax染色平均灰度值分别为(99.58±3.97)和(71.12±2.98)1,保护组SGN Bcl-2染色胞浆着色加深、Bax染色胞浆着色减轻[SGN Bcl-2和Bax染色平均灰度值分别为(82.86±8.10)和(89.15±2.85)],图像分析结果 显示损伤组与对照组、损伤组与保护组之间的SGN Bcl-2和Bax染色平均灰度值差异有显著性.结论 Amk耳中毒诱导耳蜗螺旋神经元氧化损伤时Bcl-2表达下调,Bax表达增强.EGCG可以减弱Amk耳中毒时耳蜗螺旋神经元Bax的表达,同时增强Bcl-2的表达,从而减轻Amk耳毒性.
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EGCG对阿米卡星诱导大鼠螺旋神经元凋亡的保护作用
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG).对阿米卡星诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元凋亡是否具有保护作用.方法 设生理盐水对照组、阿米卡星(450 mg·kg-1·d-1共14 d)损伤组和阿米卡星加EGCG(50 mg/kg·kg-1·d-1共14 d)保护组.各组动物均深度麻醉后半身灌注固定处死,取右侧耳蜗标本固定、脱钙、石蜡轴位包埋、轴位切片,近中轴位切片行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记(TUNEL)免疫组化染色,光学显微镜下检测耳蜗螺旋神经节细胞表达情况、并通过切片图像分析进行半定量处理比较.结果 正常组螺旋神经元胞浆及细胞核基本上均不着色,损伤组部分螺旋神经元胞核着色,保护组亦少部分螺旋神经元胞核着色,图像分析结果显示损伤组与对照组、损伤组与保护组之间的染色阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EGCG可以减轻阿米卡星诱导大鼠耳蜗螺旋神经元凋亡.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 阿米卡星 螺旋神经元 凋亡 -
小鼠耳蜗螺旋神经元的原代培养及鉴定
目的:机械分离、培养小鼠耳蜗螺旋神经元,并进行免疫荧光细胞学鉴定,为后期进一步的实验研究提供实验材料.方法:采用初出生1～5天以内的昆明小鼠进行解剖、机械分离以获得螺旋神经节组织,进行原代培养后,应用神经微丝蛋白(Neurofilament protein,NFP-H)单克隆抗体进行免疫荧光细胞学鉴定.结果:机械分离后获得的螺旋神经节组织中的螺旋神经元,在体外培养条件下可以存活并进行正常分化.典型的螺旋神经元,其细胞形态呈椭圆形,胞体透明光滑、接近生理形态.荧光染色标记后,胞体和神经突起均显色好,Schwann细胞和成纤维细胞未着色.结论:应用机械分离的方法获得小鼠耳蜗螺旋神经节组织并进行培养,耳蜗螺旋神经元在体外可以稳定地存活生长.培养获得的细胞形态和生存状态接近生理状态,满足电生理、免疫细胞化学、药理学等研究.应用特异性的神经微丝蛋白对培养获得的螺旋神经元进行免疫荧光细胞学鉴定,特异性好,荧光显色好.
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五羟色胺1A受体在小鼠耳蜗螺旋神经元上的表达及其意义
目的:探讨小鼠耳蜗螺旋神经元上是否存在五羟色胺(serotonin,5HT)1A受体.方法:采用出生后3天～6天的乳小鼠耳蜗进行冰冻切片,运用免疫荧光技术检测耳蜗螺旋神经元上五羟色胺1A受体的表达.结果:实验组乳小鼠耳蜗螺旋神经元胞浆内显示阳性表达信号,阴性对照组未发现阳性信号.结论:五羟色胺1A受体应存在于小鼠耳蜗螺旋神经元上,螺旋神经元兴奋时,五羟色胺作为神经递质与螺旋神经元上的五羟色胺1A受体结合,对其兴奋性进行调节.
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5羟色胺1B受体在小鼠耳蜗螺旋神经元上的表达及意义
目的 研究小鼠耳蜗螺旋神经元上5羟色胺(serotonin,5-HT)1B受体的表达并探讨其意义.方法 采用成熟昆明小鼠耳蜗石蜡切片,运用免疫组化技术检测耳蜗螺旋神经元上5羟色胺1B受体的表达.结果 实验组小鼠耳蜗螺旋神经元胞浆内显示阳性表达信号,阴性对照组未发现阳性信号.结论 5羟色胺1B受体存在于听觉传导通路的第一级神经元,支持5羟色胺作为其递质,对神经兴奋性起着重要的调节作用.
